摘要：为评价弓形虫CRISPR/Cas9质粒在柔嫩艾美耳球虫基因敲入中的应用,以柔嫩艾美耳球虫Etβ-tubulin为目标基因,根据Etβ-tubulin基因序列设计向导RNA(g RNA),构建含g RNA的基因编辑质粒及含有目标基因和m Cherry基因的同源重组质粒;将含g RNA的基因编辑质粒和含有目标基因、DHFR基因和m Cherry基因的同源重组质粒共同转染柔嫩艾美耳球虫子孢子,将转染后的子孢子接种雏鸡泄殖腔,并在饲料中添加乙胺嘧啶进行筛选,得到表达外源荧光蛋白的标记球虫虫株。挑取单卵囊进行扩繁,并通过PCR和荧光检测方法分别从基因水平和蛋白水平上对标记虫株进行了鉴定。结果显示通过单卵囊筛选和鉴定,成功获得了1株荧光标记β-微管蛋白的柔嫩艾美耳球虫虫株。结果表明,CRISPR/Cas9技术可应用到柔嫩艾美耳球虫的基因敲入研究,同时也为进一步研究Etβ-tubulin在虫体中的功能奠定了基础。

摘要：旨在以不同生长时期茯苓为材料,β-tubulin基因为内参基因,建立实时荧光定量PCR体系。根据Gen Bank上同为真菌的黄曲霉菌β-tubulin基因保守区域设计内参引物,以茯苓菌丝体、初期菌核和成熟期菌核c DNA为模版,检测内参引物的特异性和稳定性;并对PCR反应体系中的引物浓度和模板浓度进行优化;最后利用茯苓转录组数据中6个显著差异表达基因对优化后的反应体系进行表达分析与验证。结果显示,综合扩增曲线和溶解曲线分析,在茯苓不同生长发育时期,β-tubulin基因表达水平基本恒定;对比内参引物在不同浓度条件下的扩增效率,得到模板和引物的最优浓度分别为80 ng/μL和1μmol/L。在优化后的反应体系中,6个差异表达基因的表达变化趋势与转录组测序结果基本一致,得到的线性相关系数r值均大于0.9,呈显著性正相关。成功地建立了以β-tubulin基因为内参基因的茯苓实时荧光定量PCR体系。

摘要：以油果实为材料,应用RT-PCR和RACE技术克隆其β-tubulin cDNA,并采用半定量的方法对该基因进行表达量分析。结果表明,油果实β-tubulin的cDNA全长1606 bp,包含一个1341 bp的开放阅读框,共编码446个氨基酸。对其推导氨基酸序列进行比对分析,表明油果实β-tubulin与众多植物来源的β-tubulin具有很高的相似度。通过设计特异性引物,对果实11个发育时期β-tubulin表达量分析的结果表明,该β-tubulin基因表达量稳定,说明该β-tubulin可作为油果实整个生长发育时期内参基因使用,可以在为进一步应用实时荧光定量PCR技术研究油果实发育相关基因的表达奠定了试验基础。