摘要：根据猪生殖与呼吸综合征病毒高致病性毒株、经典毒株Nsp2基因序列的差异,应用Oligo软件设计了2对特异引物,建立了鉴别PRRSV高致病性毒株和经典毒株的SYBR Greenⅰ实时荧光pcr方法。用该方法检测JEV、CSFV、FMDV和PRCV均呈阴性,表明该方法特异性良好;敏感性试验结果表明,该方法的最低检出量为1 TCID50/0.1 mL;批内、批间重复性试验显示,其变异系数均低于0.3%,具有良好的重复性。应用该方法对人工感染动物进行检测,自感染后第3、5、7、10、142、1 d分别采集全血,检测结果均为阳性。证实,本试验所建立的SYBR Greenⅰ实时荧光pcr方法具有良好的特异性、敏感性和重复性,可以快速、准确地鉴别PRRSV高致病性毒株和经典毒株。

摘要：为建立SYBR Green I实时荧光pcr检测鉴定狮(Panthera Leo)制品的方法,本文在豹属动物线粒体细胞色素b基因上设计狮特异性引物,建立并优化了SYBR Green I实时荧光pcr检测鉴定体系,采用17种血液、组织和骨粉类样品的DNA,通过扩增曲线和融解曲线分析检测的特异性和灵敏度,并用狮肉粉和牛肉骨粉系列百分比混合物进行抗干扰能力分析。结果显示,狮血液和组织DNA样品均出现特异性的实时扩增曲线,平均熔解温度在84±0.2℃。虎、豹、熊等14种哺乳动物DNA样本的检测结果均为阴性。灵敏度检测显示,本实验所建立的SYBRGreen I实时荧光pcr方法能够检测出10 pg/μL的狮组分DNA。抗干扰能力显示在骨粉中狮的成分最低检出含量为0.1%。这些结果说明,本文建立的SYBR Green I实时定量pcr方法具有方便、经济、灵敏度高和重复好等特性,可用于狮源性制品的检测鉴定。

摘要：目的:建立SYBR Greenⅰ实时荧光pcr方法检测食品中转基因成分35S启动子和NOS终止子,并对样品进行检测。方法:以大豆Lectin基因为内源性基因,以转基因食品中常用的花椰菜花叶病毒启动子(Ca MV35S)和根癌农杆菌终止子(NOS)基因为目标基因,设计并合成3对特异性引物,优化反应条件,使用SYBR GreenⅠ染料实时荧光pcr检测35S启动子和NOS终止子,并做熔解曲线分析。同时利用该方法对胡萝卜、青豆、玉米、马铃薯等实际样品进行检测。结果:运用该方法检测8份样品,有4份检出35S基因和NOS基因成分。结论:SYBR Greenⅰ实时荧光pcr方法能有效检测出35S和NOS两种转基因成分,简便、快速。

摘要：[目的]利用SYBR-GreenI实时荧光pcr检测传染性鲑鱼贫血病。[方法]根据传染性鲑鱼贫血病毒(ISAV)Y10404的序列合成部分基因片段,将其插入到T载体中,构建阳性质控品;并设计合成一对特异性引物。利用阳性质控品建立SYBR-Greenⅰ实时荧光pcr方法,对反应体系进行优化,进行特异性和敏感性分析,并制作标准曲线。[结果]最佳引物终浓度为0.5μmol/L。所建立的SYBR-Greenⅰ实时荧光pcr方法能够特异地检出ISAV;最低检出浓度为9.5×10-8μg/μL,其灵敏度比传统pcr高1000倍;能够从阳性样品中检出ISAV,Tm值为82.5℃。建立了标准曲线,其r2>0.99。