摘要：现分别针对乙型肝炎病毒(HBV)、丁型肝炎病毒(HDV)基因保守区域设计多对聚合酶链反应(PCR)引物,打印制备成芯片,并用限制性显示(RD)技术标记样品,探索此方法制备基因芯片的可行性.

摘要：目的制备检测丁型肝炎病毒(HDV) 基因芯片。方法针对HDV基因保守区域设计多对PCR引物。用芯片点样仪将PCR产物点到玻片上制成基因芯片。样品标记采用限制性显示技术,样品标记后进行杂交。结果运用PCR技术得到多个HDV特异性基因片段,序列分析表明,所扩增的片段均属于HDV特异基因。杂交结果显示,样品和HDV诊断基因芯片杂交的敏感性和特异性均佳。结论用基因芯片检测HDV具有敏感、高效、检测结果可靠的优点,有着较大的应用前景。

摘要：目的应用PCR技术扩增乙型、丁型肝炎病毒保守区域基因片段,并进行克隆、测序分析,制备联合诊断乙型、丁型肝炎病毒基因芯片探针。方法利用Oligo6.4软件分别针对乙型、丁型肝炎病毒基因保守区域设计PCR引物,纯化PCR扩增产物,扩增后的产物克隆至pMD18-T载体并进行快速鉴定,提取阳性克隆质粒进行测序分析及鉴定。结果获得多个乙型、丁型肝炎特异性基因片段。序列分析表明,所扩增的片段均属于乙型、丁型肝炎病毒特异基因。结论利用PCR扩增产物制备基因芯片探针是一种快速、简便的实用方法。

摘要：以质粒（ｓＳＶＬＤ３）为模板，通过聚合酶链反应（ＰＣＲ）扩增得到一条１３９ｂｐ的片段，它含有丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）基因组ＲＮＡ中核酶（ｒｉｂｏｚｙｍｅ）区的ｃＤＮＡ，该核酶具有自身裂解功能，将上述片段插入到ｐＧＥＭ－３Ｚ中，经筛选、鉴定，得到一重组质粒（ｐＨＤＶ１０８），经测序发现有２个碱基变异，以该质粒为模板，通过Ｔ７ＲＮＡ聚合酶，转录出核酶的前体，并观察到其自身裂解产物，自裂率达７１％。针对核酶两个重要的单链区，设计并合成二条反义寡核背酸（ＡＳＯＮ），当在转录反应中同时加入ＡＳＯＮ后，核酶的自裂率下降均较明显，当ＡＳＯＮ浓度为１６ｕｍｏ１／Ｌ时，核酶自裂抑制率均在７０％以上。提示，ＡＳＯＮ可与核酶两个重要的单链区结合，从而抑制核酶的自裂活性。

摘要：目的:研究建立聚合酶链反应(PCR)检测丁型肝炎病毒的方法,并在临床上作初步应用。方法:选择HDV保守区域基因片段设计合成特异性引物,建立检测HDV感染的PCR方法,对450例门诊患者血清进行HDV感染检测。结果:该PCR方法特异性和灵敏度均较高,450例门诊患者血清HDV感染率为1.3%,与ELISA法比较,总符合率为99.3%。结论:本PCR方法可用于检测HDV感染,是一种快速、简便、实用的方法。

摘要：目的观察经过结构改建的丁型肝炎病毒核酶（ＨＤＶ核酶）对丙型肝炎病毒（ＨＣＶ）基因组ＲＮＡ是否存在剪切作用。方法对ＨＤＶ基因组核酶的茎ＩＶ区和底物结合区进行改建，获得３种针对ＨＣＶ ＲＮＡ的ＨＤＶ核酶ＲｚＣ１、 ＲｚＣ２和ＲｚＣ３。体外转录制备含ＨＣＶ ＲＮＡ ５’一非编码区（５’－ｎｏｎｃｏｄｉｎｇ ｒｅｇｉｏｎ， ５’－ＮＣＲ）及部分 Ｃ区的底物 ＲＮＡ（ＨＣＶ ＲＮＡ ５’－ＮＣＲ－Ｃ），进行 ５’端放射性标记。在一定的 ｐＨ、温度、 Ｍｇ２＋浓度和有或无去离子甲酰胺存在等条件下，将核酶和底物按摩尔比１００：１混合，反应２ ｈ后聚丙烯酰胺凝胶电泳，放射自显影，推算剪切百分率。结果 ＲｚＣ１和ＲｚＣ２可剪切ＨＣＶ ＲＮＡ ５’－ＮＣＲ—Ｃ，在适宜浓度的去离子甲酰胺存在时剪切效率较高。ＲｚＣ３对底物几乎无剪切活性。结论设计得当的ＨＤＶ基因组核酶可以剪切异源性ＲＮＡ分子ＨＣＶ ＲＮＡ。

摘要：本研究设计并用固相法合成了丁型肝炎病毒与蛋白上的二个抗原肽,肽的纯度达到高压液相鉴定均.两种复肽均具有丁肝病毒抗原活性,在抗HDVELISA检测中有应用价值,混合包被的效果更佳.

摘要：为构建我国丁型肝炎病毒(HDV)全基因克隆,分别从3份HDV阳性血清中提取病毒RNA,通过反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)分段扩增,获得4个相互重叠的DNA片段,将PCR产物测序,利用DNAStar软件拼接,获得HDV全基因组序列;设计引物,用重叠PCR扩增全长HDV片段并连接至克隆载体,构建全基因克隆。结果成功克隆出3株1 675bp的HDV全长基因组。经与GenBank标准序列比对,3株HDV均为基因Ⅰb型,核酸序列同源性达98%以上,与我国Ⅰ型X77627的同源性均达98%以上,与其他基因Ⅰ型的同源性均高于84%。与基因Ⅱ型和Ⅲ型的同源性分别低于77%和66%。本研究构建了3株具有我国代表性的HDV全长基因cDNA克隆,为进一步开展HDV分子生物学研究提供了基础。

摘要：目的为建立一种特异性强、敏感性高的检测丁型肝炎病毒（ＨＤＶ）感染的方法，提高丁型肝炎的诊断水平。方法根据ＨＤＶＲＮＡ保守区（６５４～９６３位核苷酸）设计合成两对引物，采用逆转录－套式聚合酶链反应（ＲＴ－“ｎｅｓｔｅｄ”ＰＣＲ）对３５例肝炎患者血清进行检测。结果二次ＰＣＲ扩增的特异性和敏感性均较一次ＰＣＲ高。１９例丁型肝炎抗原阳性者ＨＤＶＲＮＡ均为阳性，９例丁型肝炎抗体阳性者中有６例阳性，７例单纯ＨＢｓＡｇ和ＨＢｅＡｇ阳性者均未检出ＨＤＶＲＮＡ。结论这一检测方法特异性强、敏感性高，可广泛用于临床检测。

摘要：目的　制备联合检测乙型、丁型肝炎病毒基因芯片并进行杂交验证。方法　利用Primer 5 .0软件分别针对乙型、丁型肝炎病毒基因保守区域设计多对PCR引物 ,纯化PCR扩增产物 ,扩增后的产物克隆至 pMD18 T载体 ,提取阳性克隆质粒进行测序分析及鉴定。用芯片点样仪将PCR产物点到玻片上制备成基因芯片。样品标记采用限制性显示技术 ,样品标记后进行杂交。结果　运用PCR技术 ,得到多个乙型、丁型肝炎病毒特异性基因片段。序列分析表明 ,所扩增的片段均属于HBV、HDV特异基因。杂交结果显示 ,样品和乙型、丁型肝炎诊断基因芯片杂交的敏感性和特异性均佳。结论　利用PCR扩增产物制备乙型、丁型诊断基因芯片是一种快速、简便的实用方法 ,有着广阔的应用前景。另外 ,利用限制性显示技术标记样品可为进一步更多种肝炎病毒的混和检测奠定基础。