摘要：目的:探讨miR-129对肺腺癌细胞系A549中T细胞因子4(TCF4)的表达及上皮间质转化(EMT)进程的影响及其机制。方法:将miR-129寡核苷酸片段miR-129 mimic转染A549细胞,实时定量PCR验证转染效率。实时定量PCR和蛋白质印迹实验检测转染后A549细胞TCF4、E-钙黏蛋白和波形蛋白的mRNA和蛋白表达水平。设计合成miR-129 mimic,将其与TCF4 3’-UTR报告基因质粒共转染HEK-293细胞,检测miR-129对TCF4报告基因质粒荧光素酶活性的影响,证实TCF4是miR-129的靶基因。结果:实时定量PCR及蛋白质印迹结果均表明,上调miR-129表达后,A549细胞TCF4、波形蛋白表达明显下调(P <0. 05或P <0. 01),E-钙黏蛋白表达明显上调(P <0. 01)。miR-129明显抑制TCF4报告基因质粒荧光素酶活性(P <0. 01)。结论:miR-129通过抑制TCF4的表达阻遏A549细胞的EMT进程。

摘要：目的 探讨小分子干扰RNA（siRNA）干扰CXCR4基因对人子宫颈癌HeLa细胞增殖、侵袭及上皮间质转化因子Twist、Slug及E钙黏蛋白（E-cad）表达的影响。 方法 体外培养HeLa细胞，设计合成CXCR4基因siRNA（CXCR4-siRNA）转染至HeLa细胞，采用四甲基偶氮唑盐（MTT）法检测细胞增殖能力的变化，Transwell实验观察细胞侵袭能力的变化，蛋白印迹法检测CXCR4、Twist、Slug、E-cad蛋白表达的变化。 结果 与空白组及阴性对照组相比，CXCR4-siRNA转染至HeLa细胞后能抑制CXCR4蛋白的表达（0.959±0.197、0.932±0.141和0.379±0.022， F =16.286， P =0.004）。MTT结果显示：48及72 h时，CXCR4-siRNA组HeLa细胞的增殖活性受到抑制（48 h：0.846±0.034、0.823±0.025和0.744±0.039， F =7.379， P =0.024；72 h：0.996±0.026、0.964±0.059和0.829±0.051， F =10.425， P =0.011）。Transwell结果显示：48及72 h时，CXCR4-siRNA组HeLa细胞的侵袭力受到抑制（细胞穿膜数量为48 h：37.4±8.1、33.6±6.2和25.4±3.2， F =4.830， P =0.029；72 h：48.4±7.6、43.0±5.4和33.4±6.7， F =6.579， P =0.012）。转染后48 h，CXCR4-siRNA组HeLa细胞Twist及Slug蛋白的表达降低（Twist：0.93±0.11、1.00±0.17和0.53±0.07， F =10.962， P =0.010；Slug：0.52±0.08、0.47±0.06和0.19±0.03， F =25.579， P =0.001），E-cad的表达增高（0.53±0.04、0.55±0.24和1.11±0.14， F =12.494， P =0.007）。 结论 沉默CXCR4基因的表达可以抑制HeLa细胞增殖，降低其侵袭力，通过下调Twist、Slug蛋白的表达，上调E-cad表达，抑制HeLa细胞上皮间质转化。

摘要：目的探讨人工改造的CDR1as(M-CDR1as)是否可通过特异性结合miR-21和miR-130b,体外抑制小鼠Hepa1-6肝癌细胞的上皮间质转化(EMT)。方法将CDR1as中miR-7结合位点替换为特异性结合mmu-miR-21或mmu-miR-130b的碱基序列。将小鼠Hepa1-6肝癌细胞分为对照组,空质粒组(NC)和M-CDR1as组。采用RT-qPCR检测Hepa1-6细胞内M-CDR1as的水平及其对靶miR-21和miR-130b水平的影响。利用RT-qPCR和Western blot法检测各组肝癌细胞中EMT相关Vimentin,E-cadherin及N-cadherin的mRNA水平和蛋白表达量。结果仅M-CDR1as组可在阈值以上检测到M-CDR1as。M-CDR1as组miR-21水平较对照组和NC组有所下降(P>0.05),M-CDR1as组miR-130b水平较对照组及NC组均明显下调(P<0.001)。Vimentin和N-cadherin mRN水平较对照组和NC组明显下降(P<0.01),E-cadherin mRNA较对照组和NC组明显升高(P<0.01)。Vimentin和N-cadherin蛋白表达量较对照组和NC组明显下降(P<0.01);而E-cadherin较对照组和NC组表达明显升高(P<0.01)。结论 M-CDR1as可通过结合吸附miR-21和miR-130b体外抑制小鼠Hepa1-6肝癌细胞的EMT。

摘要：目的探讨短发夹RNA(shRNA)靶向沉默人类配对盒基因(PAX6)对乳腺癌MCF-7细胞增殖、凋亡及上皮间质转化(EMT)的影响。方法根据Gen Bank数据库中PAX6序列,设计、合成互补并特异性编码其shRNA序列的寡核苷酸,克隆至线性化***质粒载体中,将*** PAX6 shRNA质粒(转染组)和阴性对照质粒*** luciferase shRNA(阴性对照组)分别转染人MCF-7细胞,建立稳定低表达PAX6的MCF-7细胞株,同时设未行转染的MCF-7细胞为空白对照组。经实时定量PCR验证后,噻唑蓝(MTT)法检测各组转染24、48、72、96 h后的增殖抑制率,流式细胞术检测各组转染后的细胞凋亡和细胞周期情况,采用Western blotting检测各组转染96 h后的EMT相关标记分子(E-钙粘蛋白、纤连蛋白和波形蛋白)水平。结果转染组的PAX6水平均低于阴性对照组和空白对照组(P<0.05);与其余两组相比,转染组的增殖抑制率、凋亡率及促凋亡基因Bax、Bad mRNA水平均升高,而抑制凋亡基因Bcl-2 mRNA水平降低,且细胞周期的G_0/G_1期细胞比例升高,但S期和G_2/M期细胞比例均降低,以上差异均有统计学意义(P<0.05);转染组的钙粘蛋白水平升高,而纤连蛋白和波形蛋白水平均降低,与其余两组的差异均有统计学意义(P<0.05)。结论通过shRNA抑制PAX6基因表达可抑制乳腺癌细胞增殖并诱导凋亡和细胞周期阻滞,对EMT过程有一定抑制效果,为乳腺癌的基因沉默靶向治疗提供了依据。

摘要：目的研究基因沉默多配体蛋白聚糖(syndecan-2,SDC2)抑制转化生长因子β1(transforming growth factorβ1,TGF-β1)介导的非小细胞肺癌A549细胞发生上皮间质转化(epithelial interstitial transformation,EMT)的作用机制。方法设计靶向SDC2的小干扰RNA(small interfere RNA,siRNA),采用TGF-β1诱导A549细胞发生EMT,并予以SDC2-siRNA预处理。划痕实验检测细胞迁移,明胶酶谱法检测基质金属蛋白酶(matrix metalloproteinases,MMP)含量;免疫印迹法检测E-钙黏蛋白、波形蛋白、Snail蛋白的表达。结果与对照组比较,TGF-β1诱导组细胞迁移能力更强,MMP活性更高,E-钙黏蛋白表达下调,而波形蛋白、Snail蛋白表达上调(P<0.05)。与TGF-β1诱导比较,SDC2-siRNA组能够抑制细胞迁移、MMP活性、波形蛋白和snail蛋白的表达,同时上调E-钙黏蛋白的表达(P<0.05)。结论基因沉默SDC2能够抑制TGF-β1介导的EMT。

摘要：目的 观察沉默糖原合成激酶3β(GSK3β)的表达对胰腺癌PANC1细胞增殖及上皮间质转化(EMT)的影响，探讨其作用机制。 方法 设计并合成靶向GSK3β的3个siRNA(siRNA-GSK3β)及阴性对照siRNA(siRNA-NC)，分别转染PANC1细胞。通过RT-PCR法检测各组细胞GSK3β mRNA表达量，筛选基因沉默效果最佳的siRNA进行后续实验。采用MTT法检测转染细胞的增殖。采用RT-PCR法检测转染细胞Wnt/β-catenin通路成员Wnt、β-catenin、C-myc、CyclinD1mRNA；Hedgehog通路成员Shh、Smo mRNA；PI3K/Akt/mTOR通路成员PI3K、Akt、mTOR、4E-BP1、p70S6K mRNA以及EMT相关分子Slug、Snail、Twist、E-cadherin、N-cadherin、Vimentin mRNA的表达。 结果 转染siRNA-NC的PANC1细胞GSK3β mRNA表达量为1.00±0.15，3个转染siRNA-GSK3β的GSK3β mRNA表达量分别为0.25±0.08、0.62±0.09、0.70±0.11，转染siRNA-GSK3β细胞均显著低于转染siRNA-NC细胞，差异有统计学意义( P 值均<0.0001 )。转染后siRNA-GSK3β组细胞的增殖显著低于转染siRNA-NC组细胞，差异有统计学意义( P <0.05)。转染后siRNA-GSK3β组细胞的Wnt、β-catenin、C-myc、CyclinD1、PI3K、Akt、mTOR、4E-BP1、p70S6K、Slug、Snail、N-cadherin、Vimentin mRNA表达量分别为0.28±0.04、0.47±0.05、0.37±0.05、0.62±0.08、0.22±0.03、0.47±0.06、0.65±0.08、0.39±0.04、0.56±0.07、0.33±0.05、0.46±0.07、0.55±0.06、0.38±0.04，均显著低于转染siRNA-NC组细胞，差异有统计学意义( P 值均<0.05)；Shh、Smo mRNA表达量分别为1.10±0.13、1.05±0.11，与转染siRNA-NC组细胞的差异无统计学意义；Twist mRNA表达量为0.62±0.08，低于转染siRNA-NC组细胞，E-cadherin mRNA表达量为2.12±0.25，高于转染siRNA-NC组细胞，但差异均无统计学意义。 结论 沉默PANC1细胞GSK3β基因表达后能够通过Wnt/β-catenin、PI3K/Akt通路抑制胰腺癌细胞的增殖，并抑制其上皮间质转化过程。

摘要：目的:探究慢病毒介导过表达Smad4或沉默Smad4对万古霉素诱导的肾小管上皮细胞HK-2上皮间质转化（EMT）的影响。方法:设计并包装Smad4沉默或过表达的慢病毒，之后利用所获得的慢病毒瞬时转染HK-2,将HK-2细胞分为万古霉素组、空载体组（转染HBLV-GFP-PURO）、过表达Smad4组（转染HBLV-h-Smad4-GFP-PURO）、沉默Smad4组（转染HBLV-h-Smad4-shRNA-GFP-PURO）,另取正常HK-2细胞作为对照组。比较五组细胞迁移能力、上清液中氧化应激指标（TGF-β1、SOD、GSH、MDA）及Smad4、E-cadherin、FN、Vimentin蛋白表达水平。结果:与对照组相比，万古霉素组和空载体组HK-2细胞迁移能力、上清液TGF-β1和MDA含量、Smad4、FN、Vimentin蛋白表达水平升高（P<0.05）,SOD、GSH含量、E-cadherin蛋白表达水平降低（P<0.05）。过表达Smad4可提高HK-2细胞迁移能力和氧化应激反应，促进EMT（P<0.05）;沉默Smad4可降低HK-2细胞迁移能力和氧化应激反应，抑制EMT（P<0.05）。结论:Smad4调控万古霉素诱导的HK-2细胞氧化应激反应和EMT。

摘要：目的设计合成(E)-N-取代亚甲基-3-[4-(吡啶-4-基)嘧啶-2-基]氨基苯甲酰肼衍生物,并对其抗癌的活性进行研究。方法3-氨基苯甲酸乙酯为起始原料,通过4步反应合成了一系列目标化合物7a~7p,并通过^(1)H-NMR、^(13)C-NMR和HRMS对所有目标化合物进行了结构鉴定。采用MTT法、免疫印迹法、细胞侵袭实验、损伤愈合实验和EdU染色试剂检测了合成化合物对于结肠癌细胞生长的抑制作用。结果目标化合物对于结肠癌细胞的生长具有一定的抑制活性,其中化合物7m活性最优,其抑制结肠癌细胞系HT-29和RKO的IC50值分别为(1.04±0.16)和(1.54±0.20)μmol·L^(-1),且7m对正常结肠上皮细胞的毒性较小(IC_(50)>100μmol·L^(-1))。此外,7m能与Nur77结合,并以浓度依赖的方式抑制结肠癌细胞中Nur77和p-mTOR蛋白的表达。进一步研究表明化合物7m能以Nur77依赖的方式抑制结肠癌细胞的EMT进程。结论该系列化合物具有较好的抗结肠癌的活性,具有进一步研究的意义。

摘要：目的:探讨Klf4表达水平对Hela细胞上皮间质转化的影响。方法:设计合成针对Klf4的siRNA和阴性对照siRNA,并转染至Hela细胞。用含10ng/ml TGF-β1和10%胎牛血清的DMEM培养液诱导Hela细胞发生上皮间质转化,对照组使用不含TGF-β1的培养液。倒置显微镜下观察记录细胞的形态学改变。Western blot法和细胞免疫荧光法检测Klf4、上皮标志分子E-cadherin、ZO-1及间质标志分子N-cadherin的表达变化。结果:在TGFβ1的诱导作用下,Hela细胞呈现出梭形、类成纤维细胞的形态,发生了上皮间质转化。Western blot和细胞免疫荧光检测结果显示,Hela细胞在TGFβ1诱导作用下,Klf4、上皮标志分子E-cadherin、ZO-1表达减少,间质标志分子N-cadherin表达增多。转染了si Klf4的Hela细胞经TGFβ1诱导后,与转染了阴性对照siRNA的细胞相比,上皮标志分子E-cadherin、ZO-1表达略有减少,而间质标志分子N-cadherin的表达则明显增多。结论:抑制Klf4表达可以促进Hela细胞的上皮间质转化。

摘要：上皮-间质转化(EMT)是具有极性的上皮细胞向间质细胞转化的过程,在机体正常发育和肿瘤细胞的侵袭及转移过程中具有重要作用。近年来,大量的实验数据表明上皮剪接调节蛋白(epithelial splicing regulatory proteins,ESRPs)具有抑制肿瘤EMT的作用,是肿瘤恶性转化的一种负向调控因子,受TGF-β-Smad信号通路的调节。ESRPs通过选择性剪接作用在转录后水平直接或者间接地调控FGFR2、Rac1b、E-钙黏蛋白及ZEBs等EMT相关因子的表达,抑制上皮细胞向间质细胞转换。本文综述了ESRPs的分子结构特征及其抑制肿瘤细胞EMT机制的研究进展,并对其在临床上作为恶性肿瘤诊断标志物的可能性进行了讨论。