摘要：目的 用均匀设计法筛选下瘀血汤(XYXD)抑制四氯化碳(CCl4)诱导的肝纤维化模型胶原沉积的最佳配伍。方法 用CCl4肝纤维化小鼠模型,以大黄、桃仁、地鳖虫为研究对象,根据均匀方案选用U6(63)表分组设计,以肝天狼星红阳性染色半定量分析为筛选指标,通过多元线性回归分析,获得最佳配比(TOR);再次运用上述模型,用试剂盒检测小鼠血清谷丙转氨酶(GPT)和谷草转氨酶(GOT)水平,用天狼星红染色及半定量分析检测小鼠肝胶原沉积,验证TOR抗肝纤维化疗效。最后用实时定量聚合酶链反应检测致纤维化生成相关基因表达,用免疫组化及Western blot法检测α-SMA、Smad2和BAMBI蛋白的表达情况,对TOR抑制肝胶原沉积进行机制分析。结果 正常组、模型组和组分1,2,3,4,5,6组的肝天狼星红染色阳性面积分别为0.25±0.14,3.24±0.95,2.21±0.57,3.14±0.51,2.60±0.50,2.25±0.36,2.28±0.47和2.46±0.48,与正常组相比,模型组的肝天狼星红阳性染色显著增加(P<0.01);与模型组相比,组分1,4,5组肝天狼星红阳性染色均显著降低(P<0.01,P<0.05)。均匀设计结果显示:XYXD抑制肝胶原沉积的最佳剂量配比为桃仁(5 g)+地鳖虫(3 g)。验证结果显示:与正常组相比,模型组的血清GPT、GOT水平及肝天狼星红阳性染色均显著升高(均P<0.01);与模型组相比,下瘀血汤组和TOR组以上指标表达均明显降低(P<0.01,P<0.05)。机制分析显示:与正常组相比,模型组致肝纤维化生成相关基因、α-SMA蛋白、Smad2蛋白表达均明显升高(均P<0.01);与模型组相比,TOR组以上指标表达均明显降低(P<0.05,P<0.01,P<0.001);与正常组相比,BAMBI蛋白表达明显下调(P<0.001),TOR能抑制BAMBI蛋白的下调(P<0.001)。结论 桃仁(5 g)+地鳖虫(3 g)配比可显著抑制CCl4肝纤维化模型胶原沉积,其机制与调控BAMBI/Smads信号有密切关系。

摘要：探讨了祛瘀的下瘀血汤和养阴的一贯煎抑制CCl_4诱导的大鼠肝硬化形成的不同作用机制．采用方法为给大鼠先皮下注射CCl_4 3 mL/kg,然后注射50%CCl_4橄榄油溶液2 mL/kg,每周2次,第9周开始随机将大鼠分为模型对照组、下瘀血汤组及一贯煎组,药物干预的同时继续CCl_4诱导建立大鼠肝硬化模型,至12周末取材．检测指标为：肝组织病理学；肝组织羟脯氨酸含量；肝组织α-SMA,CD68,MMP-13,TIMP-1,TIMP-2蛋白表达；MMP-2,MMP-9的活性；肝细胞凋亡指数及Caspase-12,HGF_α蛋白表达．结果显示：(1)与正常大鼠比较,模型大鼠8周时α-SMA,CD68,TIMP-1蛋白表达显著增加,12周时显著高于8周模型对照组；MMP-13,HGF_α,TIMP-2蛋白表达逐渐降低,各时间点相互比较具有显著性差异；MMP-2,MMP-9活性4周时显著升高,8周时较4周略有升高,12周时显著高于8周模型对照组；肝细胞凋亡指数,Caspase-12蛋白表达量逐渐增加,且各时间点比较均具有显著性差异．(2)与同期模型对照组比较,干预组MMP-9活性及MMP-13,TIMP-2,HGF_α蛋白表达量均显著增加,其中下瘀血汤组MMP-9,MMP-13显著高于一贯煎组,一贯煎组TIMP-2,HGF_α显著高于下瘀血汤组；干预组MMP-2活性,TIMP-1蛋白表达显著降低,且一贯煎组显著低于下瘀血汤组；一贯煎组肝细胞凋亡指数,Caspase-12蛋白表达量显著减少．由此得出结论：祛瘀的下瘀血汤和养阴的一贯煎均可有效地抑制CCl_4诱导的大鼠向肝硬化发展,下瘀血汤的主要作用在于提高MMP-9的活性及MMP-13的蛋白表达,其祛瘀作用的主要机制是促进胶原纤维的降解；而抑制肝细胞凋亡和肝星状细胞的活化是一贯煎养阴的主要作用途径．