摘要：目的:构建HCV NS5A/pCI-neo真核表达载体,转染Huh-7细胞系,为体外高效表达NS5A蛋白奠定基础。方法:用PCR方法从带有丙型肝炎病毒NS5A基因的pC DNA 3.1(+)/HCV NS345质粒中扩增出HCV NS5A基因,然后TA克隆于pGEM-T载体中,转化大肠杆菌JM109。阳性克隆经测序鉴定,再经双酶切消化后插入真核表达载体pCI-neo上,经酶切鉴定与测序证实。结果:用PCR方法扩增出HCV NS5A基因全序列,因其cDNA的G+C含量高直接测序未成功,后经TA克隆,筛选得到的阳性克隆经测序鉴定,与设计的HCV NS5A基因序列完全一致。经酶切连接并成功插入pCI-neo上。结论:成功构建了高效表达丙型肝炎病毒NS5A基因的pCI-neo真核表达载体。

摘要：中国大陆地区80％的肝细胞癌（HCC）具有HBV感染背景，其中80％是基于肝硬化背景发生的，治疗方案设计要注意两个原则：（1）积极清除实体肿瘤；（2）积极改善肝脏微环境，防治肝硬化进展，减少HCC的复发和终末期肝病的发生。除了应用手术切除或非手术手段损毁HCC病灶之外，内科综合治疗具有重要意义。目前具有较多循证医学证据的辅助治疗措施为抗病毒治疗，故中华医学会肝病学分会肝癌学组提出了（（HBV／HCV相关f生肝细胞癌抗病毒治疗专家建议》（以下简称《建议》）[1]。《建议》强调了针对HBV／HCV相关性肝细胞癌患者应用抗病毒治疗的必要性，抗病毒治疗的应用可提高患者生活质量，延长患者生存期。

摘要：目的 对我国华南地区184例未行抗病毒治疗的慢性丙型肝炎患者进行NS5B聚合酶抑制剂相关耐药位点检测并分析其特点. 方法 根据NS5B区变异位点的特点,将其分成3段扩增.NS5B聚合酶抑制剂相关的耐药位点分析采用自行设计型别特异性引物行巢式PCR,PCR产物纯化后直接测序鉴定,同时对患者的临床资料进行分析.定量资料如人口学指标、生物化学指标、血液学指标、病毒学等指标,参数比较用Student＆#39;s t检验或ANOVA方差分析,两组间非参数比较用Mann Whitney U检验;分类资料用x 2检验. 结果 对核苷类聚合酶抑制剂耐药的变异位点A15G,S96T,S282T主要在HCV 6a型中发生（20/88,22.73％）,在HCV 1b型中未发现变异位点;对非核苷类聚合酶抑制剂耐药的变异位点C316N,S365A主要见于HCV 1b型,I482L、V499A主要见于HCV 6a型及HCV 2a型;本研究发现一些新的变异位点如A15S,S365F,S365P,S368A,S368L,这些变异位点能否导致耐药尚待研究. 结论 我国慢性丙型肝炎患者对NS5B聚合酶抑制剂存在预存耐药,变异率因HCV基因型而异.不同的基因型可预存不同的耐药,提示使用直接抗病毒药前应常规进行基因检测.

摘要：慢性丙型肝炎直接抗病毒治疗方案的应用及其在中国获批准，使得我国实现世界卫生组织提出的2030年消除病毒性肝炎公共卫生威胁迈出了重要的一步，在此基础上，政策层面的设计和实施是达到该目标的保证。但是，我们还需要探索适合新的机制以及中国人群的方案、更短疗程的方案。同时，需要研究丙型肝炎肝纤维化的逆转，丙型肝炎相关肝癌等新出现的问题。

摘要：目的证实La自身抗原、33kD人类囊相关膜蛋白（hVAP-33）和真核细胞翻译起始因子第3亚单位（eIF2B7）是HCV在细胞内的协同感染因子，通过抑制Huh7细胞内这些因子的表达可抑制HCV复制和表达。方法分别设计合成3条HCV内部核糖体进入位点（IRES）的小干扰RNA（siRNAs），转染HuhT-HCV细胞后筛选出其中沉默效率最高的1条。以HCV假病毒感染Huh7细胞后48h，分别以上述HCVIRKSsiRNA和之前试验中已经筛选出的La、hVAP-33和eIF2BY特异性siRNAs单独或者不同组合转染Huh7-HCV细胞，利用荧光定量PCR方法检测HCV核心基因并计算△ACT值（相对定量法），比较不同siRNAs及组合对目的基因沉默的效率; 同时以Westemblot观察HCV核心蛋白表达量的差异。结果La自身抗原与IRKS特异性siRNA共转染对HCV表达的抑制效率最高，使HCV核心蛋白基因相对表达量下降了约41％；4种基因特异性siRNAs对HCV在Huh7细胞中的复制和表达均有不同程度的抑制作用，La、hVAP-33和eIF2B7特异性siRNAs分别与IRES siRNA联合均较其单独转染对目的基因的抑制效率高。结论可以认为La自身抗原、hVAP-33和eIF2BY是HCV在宿主细胞内的协同感染因子，通过对Huh7细胞内协同感染因子及HCVIRES基因沉默后可以显著减少HCV的表达。

摘要：目的:通过生物信息学软件对易引起慢性肝炎的三种肝炎病毒基因组结构进行分析,设计肝炎病毒诊断分型芯片的寡核苷酸(O ligo)探针。方法:利用BLAST软件对乙型肝炎病毒(HBV)、丁型肝炎病毒(HDV)、丙型肝炎病毒(HCV)6个亚型的DNA及cDNA序列进行序列比对,得到有意义的特异序列;然后用生物信息学软件Array designer 3.0设计特异性高、Tm值相近、长度均一的O ligo探针。结果:获得156条60-m er探针,用于打印成DNA芯片,进行HBV、HDV的联合检测和HCV的基因分型。结论:利用BLAST检索系统和生物学软件Array desig-ner 3.0设计肝炎病毒诊断分型芯片的探针,是一种简便可行、有效的方法。

摘要：目的评价等位基因特异性PCR（AS-PCR）检测白介素28B（IL28B）rs12979860基因多态性在预测丙型肝炎患者抗病毒治疗效果中的应用价值。方法选取2011年5月至2012年5月武汉大学人民医院感染科174例丙型肝炎住院患者外周血，针对rs12979860基因多态性设计特异性引物2对，并在反向引物3’末端第2或第3碱基处引入突变碱基，用AS-PCR检测30例丙型肝炎患者rs12979860基因多态性，并用基因测序法平行验证，比较2种检测方法的符合率、敏感度和特异度。然后采用AS-PCR方法分析174例丙型肝炎患者rs12979860不同基因型在人群中的分布频率。结果***和测序法平行检测30例丙型肝炎患者，均能有效鉴别rs12979860基因的CC型、CT型和TT型，二者符合率为100％（X2=60．0，P〈0．01），特异度和敏感度也均为100％。以CC基因型为对照，AS-PCR检测TT基因型灵敏度为10-5，测序法为2×10-1。用AS-PCR法从174例丙型肝炎患者中，检出rs12979860基因的TT型、CC型和CT型的分布频率分别为3．5％（6／174）、13．2％（23／174）和83．3％（145／174）。结论AS-PCR法可快速、准确、可靠、经济、有效地检测丙型肝炎患者IL28Brs12979860基因多态性，适于各大医院预测丙型肝炎患者抗病毒治疗效果。（中华检验医学杂志，2013．36：59-62）

摘要：目的探讨慢性丙型肝炎患者IL-28B基因多态性的分布特征,进一步分析其与聚乙二醇干扰素(PEG-IFN-α)联合利巴韦林(RBV)治疗的关系。方法设计特异性引物和探针,建立连接酶检测反应体系,对42例接受治疗的慢性丙型肝炎患者IL-28B基因多态性进行检测。结果 42例患者中,IL-28B基因区rs12979860基因型均为CC型(100%);rs12980275基因型,AA型39例(92.9%),AG型3例(7.1%);rs8099917基因型,TT型39例(92.9%),TG型3例(7.1%)。用药后快速应答34例,持续应答41例,患者均获得早期应答。结论 IL-28B基因多态性在本地区存在特征分布,rs12979860基因型CC患者对PEG-IFN-α联合RBV治疗具有较高的应答率;IL-28B基因区rs12979860、rs8099917单核苷酸多态性检测对PEG-IFN-α联合RBV治疗效果的预测具有一定的意义。

摘要：墙体改革,逐步淘汰黏土砖已成为我国建筑工程的基本方针。各地兴建的高层房屋已为墙体改革创造了良好条件,但从全国范围来看,多层房屋仍是建设工程中数量最多的。对于多层房屋目前大多数地区仍习惯地采用砖混多孔板结构。 为了加快墙体改革进程,有必要对四——七层的民用工程尤其是各种住宅楼进行采用框架现浇板结构与采用砖混多孔板结构在各方面的分析、对比和探讨,在社会效益、设计工作量、单位造价和工期上等等,到底两者谁优谁劣?这对推动今后墙体改革的发展有莫大的直接关系。

摘要：聚乙二醇干扰素联合利巴韦林是目前慢性丙型肝炎抗病毒治疗的标准治疗方案,约70%的患者能够获得持续的病毒学应答,病毒和宿主因素对治疗的结局有决定性影响。部分患者对治疗无应答或治疗后复发,称为难治性丙型肝炎。对干扰素治疗结果的预测一直是研究的热点。近年有研究报道,利用患者的基线特征以及对治疗的不同病毒学应答模式,可以对远期的治疗结果进行预测,能更好的帮助临床医生设计治疗方案。新型抗病毒药物的问世,也将为难治性丙型肝炎的治疗提供新的方案。