摘要：目的建立狂犬病毒血清中和抗体效价的快速检测方法,以实现狂犬疫苗免疫效果的定量评价,指导高危人群及动物种群的免疫预防。方法采用常规方法建立杂交瘤细胞株并制备抗狂犬病毒核蛋白单抗,以亲和层析法进行纯化,异硫氰酸荧光黄标记制备荧光抗体;以BHK-21细胞系培养狂犬病毒细胞适应株CVS-11,以染毒细胞测定荧光抗体的工作浓度后,通过荧光抗体染色法测定CVS-11细胞半数感染量(TCID50);利用狂犬病毒灭活疫苗免疫犬制备抗狂犬病毒血清,并以国际兽疫局标准品进行标定;参考世界卫生组织及国际兽疫局推荐方法,确定中和试验程序,对51份样品血清进行测定,并与国际狂犬病参考实验室的检测结果进行比较,评价其精确及可靠程度。以Kaber法公式和MicrosoftExcel软件为基础,设计被测样品中和效价计算方法。结果制备的抗狂犬病毒核蛋白单抗的亚型为IgG2a;纯化、标记后的荧光抗体工作浓度为1∶400;CVS-11株的使用量为每孔100TCID50;本研究建立的检测程序对51份人及犬血清测得的中和效价结果与国际参考实验室的测定结果一致;自行设计的计算方法操作简便,计算快捷。结论成功建立了与国际标准相当的狂犬病毒中和抗体效价测定和计算方法。

摘要：鸭病毒性肝炎病毒(DHV)属于小RNA病毒科的病毒,能致雏鸭发生以肝炎为主要特征的病毒性疾病。该病毒可在9日龄鸡胚或12～14日龄鸭胚的尿囊腔内增殖,但细胞培养十分困难。迄今国际上通用的检疫手段和诊断方法仍为鸡(鸭)胚中和试验。笔者1993年应用鸭胚肝细胞成功地培养出了鸭肝炎病毒,且能形成典型细胞病变(CPE),而且实其形成病变的能力可被特异抗血清所中和。据此,我们又设计了鸭病毒性肝炎病毒微量血清中和试验,并成功地将其用于进出口鸭苗的检疫、鸭场的免疫监测和免疫抗体消长规律的测定等。

摘要：目的摸索建立脑心肌炎病毒（EMCV）鉴定方法。方法根据GenBank中EMCVVR．129B序列设计引物，提取病毒RNA，进行***，琼脂糖凝胶电泳检测片段大小。将DNA测序结果与GenBank中相同毒株EMCV序列进行比对。以RK细胞培养的全病毒作为免疫原制备抗血清，用于建立间接免疫荧光试验（IIFA）及中和试验方法，并验证方法精密性和特异性。制备抗GST—VPl和抗***2多克隆抗体，与EMCV浓缩液进行免疫印迹反应。结果获得的DNA片段与GenBank中上传的相同毒株EMCV序列进行比对，相似性为98％-100％。采用20100901批抗血清160倍稀释作为一抗，建立IIFA方法，特异性好。检测20100901批抗血清中和效价1：30211，建立的固定病毒．稀释血清中和试验方法特异性、精密性好。抗GST—VPl和GST—VP2抗体与EMCV浓缩液于相对分子质量为33x103左右分别出现清晰单一条带，与理论值相符。结论初步建立了用于EMCV毒株鉴定的RT-PCR、间接免疫荧光、中和试验及免疫印迹方法。

摘要：根据已发表的犬瘟热病毒 OP株核酸序列设计 2对引物 ,以犬瘟热病毒 OP株感染 Vero细胞收获病毒提取的RNA为模板 ,应用 RT- PCR扩增出 F基因的 76 9、832 bp片段。将 PCR产物按正确的阅读框架定向克隆进 p GEX- 6 p-1载体中谷胱甘肽 - S-转移酶 (GST)基因的下游 ,再将重组质粒转化入宿主菌 BL2 1 中 ,在 37℃ 1 .0 mmol/ L IPTG诱导下 ,F基因 2个片段获得了良好的表达。表达产物经聚丙烯酰胺凝胶电泳鉴定 ,确定所表达的融合多肽大小分别为5 4 0 0 0、5 6 0 0 0。将表达产物回收后混合免疫小鼠 ,IFA显示 ,免疫小鼠血清能与病毒感染细胞呈现特异反应 ,并表现出 1∶ 1 6的中和抗体活性 ,表明体外表达的

摘要：【目的】探讨猪流行性腹泻病毒（PEDV）3种不同抗原制备的卵黄抗体对PEDV的中和能力,为抗猪流行性腹泻卵黄抗体的制备提供新的方法和理论基础。【方法】根据PEDV S糖蛋白基因设计引物扩增PEDVS534基因（636~789位氨基酸）和PEDV COE基因（499~638位氨基酸）,并构建原核表达质粒pET32a-PEDV S534和pET32a-COE,分别转化表达菌株BL21（DE3）进行诱导表达。以原核表达的PEDV S534蛋白、COE蛋白以及PEDV灭活病毒为抗原,分别免疫产蛋鸡并制备卵黄抗体,通过病毒中和试验评价各卵黄抗体的中和效力。【结果】成功表达了PEDV S534蛋白和COE蛋白,Western-Blotting分析显示,2种蛋白均具有很好的免疫原性;制备的3种特异性卵黄抗体均具有一定的病毒中和能力,PEDV S534蛋白特异性卵黄抗体的中和效价为1∶12,COE蛋白特异性卵黄抗体的中和效价为1∶25,而PEDV灭活病毒的卵黄抗体中和效价达到1∶120。【结论】PEDV灭活病毒的中和能力最强,其次为COE蛋白特异性卵黄抗体,PEDV S534卵黄抗体的中和能力较弱。

摘要：目的高效表达HPV31和52型L2融合蛋白疫苗，并评价其免疫效果。方法根据GenBank上公布的HPV31、52型L2蛋白11-200位氨基酸序列，设计合成两个型别L2该区域对应的优化密码子基因融合序列，并将其克隆至原核表达载体中。利用原核表达系统表达HPV31和52L2融合蛋白，纯化目的蛋白后免疫小鼠，用血清抗体检测及HPV假病毒体外中和试验评价融合蛋白疫苗的免疫效果。结果HPV31和52L2融合蛋白在原核表达体系中呈高效表达，表达量约占全菌20％。融合蛋白加铝佐剂免疫小鼠后，血清中能检测到高滴度的总抗体及一定水平的中和抗体和交叉中和抗体。结论HPV31和52L2融合蛋白能够刺激机体产生广谱中和抗体，为高危型广谱HPVL2蛋白疫苗研发提供了实验室依据。

摘要：【目的】利用MDBK细胞进行牛传染性鼻气管炎病毒(IBRV)XA株的分离与鉴定。【方法】用MD-BK细胞从陕西发病奶牛鼻拭子中分离IBRV;使用IBR标准阳性血清对该病毒分离物进行中和试验;根据GenBank公布的IBRV基因组序列,利用gB保守序列设计1对引物,对分离病毒进行PCR扩增并测序。【结果】分离病毒在MDBK细胞上产生了明显的特征性细胞病变(CPE):细胞圆缩,聚集成葡萄串样群落,在单层细胞上形成空洞,偶见含有几个细胞核的巨大细胞;用标准抗IBRV特异性抗血清能完全中和分离株;用IBRV gB特异性引物进行PCR,可扩增出1 182 bp的特异性条带,目的序列与已发表的IBRV基因组序列一致。【结论】该分离株为牛传染性鼻气管炎病毒,将其命名为IBRV XA株。

摘要：为比较鸡传染性法氏囊病三价活疫苗种毒毒株之间的抗原差异性,将CA株、CF株和B87株分别以104.0ELD50/0.1 mL、103.0ELD50/0.1 mL和104.0ELD50/0.1 mL免疫3周龄SPF鸡制备单特异血清。用制备的三种单特异血清与三株病毒进行交叉中和试验,根据中和试验结果计算三个毒株之间的R值均低于0.4;设计引物扩增VP2片段,对3个毒株进行序列比对并构建系统发育树,表明3个毒株的VP2片段处于不同分支,且特征性氨基酸位点存在明显差异。结果表明:IBDV-CA、CF和B87毒株之间的抗原性具有较大的差异性,三个毒株属于不同的血清亚型。

摘要：采用清水、氨水以及CaO等三种中和剂对铀矿堆浸尾渣进行中和试验,以确定合适的中和剂。将确定的中和剂以及渣浆浓度、灰渣比按一定比例配制成胶结充填体标准试样,采用RMT-150B岩石力学试验机,测试其不同龄期的抗压强度。根据测试结果,选用渣浆浓度为80%、灰渣比为18的胶结充填体对某铀矿工业性试验采场进行了充填,同时还对其进行了应力测试。研究结果表明,CaO是比较理想的中和剂,其耗量为尾渣干重的0.2%;渣浆浓度、灰渣比是影响堆浸尾渣胶结充填体强度的关键因素,其强度与渣浆浓度成正比,与灰渣比成反比;渣浆浓度为80%、灰渣比为18的堆浸尾渣胶结充填体,龄期为7d时,其抗压强度大于2 MPa,塌落度为13mm;选用该配比的堆浸尾渣胶结充填体的试验采场应力测试结果远低于其抗压强度,有效地控制了该矿试验采场深部开采的地压。

摘要：在对进口种用奶牛隔离检疫期间,从1头IBRV中和抗体阳性奶牛中分离出1株病毒。该分离株表现类似于IBRV特征的细胞病变,细胞圆缩,聚集成葡萄串样群落,在单层细胞上形成空洞。用特异性抗IBRV阳性血清与其进行中和试验,发现IBRV标准阳性血清对分离株的中和抗体滴度为27,与IBRV标准株的中和抗体滴度相差不到1个滴度。用OIEV推荐的IBR特异性引物对分离病毒进行PCR扩增,获得与设计基因片段大小一致的特异性条带,表明分离到的病毒为IBRV。