摘要：目的检测串联sirna对SW480细胞中增殖诱导配体（APRIL）基因的影响。方法设计并筛选针对APRIL基因的4条shRNA片段（sh644、shl451、shl938、sh2231），分别将其连接至pGenesil-1．1质粒表达载体，形成pGsh644、pGsh1451、pGshl938、pGsh2231单一表达载体，同时将4条shRNA连接至pGenesil4-T质粒形成pG4串联sirna表达载体。阳离子脂质体法转染至结直肠癌细胞株SW480。实时荧光定量PCR和Westernblot技术检测SW480细胞中APRILmRNA和蛋白表达水平。结果经酶切和测序鉴定，构建的串联sirna质粒载体符合要求。几条sirna均可有效抑制SW480细胞APRIL基因的表达，APRILmRNA的抑制率分别是pGsh644（56．2％）、pGshl451（49．5％）、pGshl938（50．9％）、pGsh2231（49．2％）、pG4（79．3％）。蛋白质表达抑制率分别为pGsh644（56．9％）、pGshl451（48．7％）、pGshl938（50．1％）、pGsh2231（46．4％）、pG4（87．5％）（P〈0．05）。其中以pG4抑制效应最强。结论与传统单一的sirna表达载体相比，串联sirna表达载体大大地敲低了结直肠癌细胞株中APRIL基因的表达，为针对结直肠癌APRIL基因的基因治疗提供研究基础。

摘要：目的分析串联sirna在SW480细胞中对增殖诱导配体(APRIL)基因的作用效果,探讨串联sirna对APRIL基因表达的应用价值。方法设计筛选4条针对于APRIL基因的shRNA片段(即sh644、sh1938、sh1451、sh2231),分别将其与pGenesil-1.1质粒表达载体连接,形成4个单一表达载体(pGsh644、pGsh1938、pGsh1451、pGsh2231),同时将4条shRNA与pGenesil4-T质粒连接,共同构成pG4串联sirna表达载体。应用阳离子脂质体法对结直肠癌细胞株SW480进行转染。采用实时荧光定量PCR以及Western blot法对SW480细胞的APRIL mRNA和蛋白表达进行检测。结果酶切及测序证实串联sirna质粒载体构建成功。sirna能够抑制SW480细胞APRIL基因表达,pG4组APRIL mRNA抑制率为77.72%,蛋白质表达抑制率为84.74%,显著高于其他质粒,差异具有统计学意义(P<0.05)。结论串联sirna表达载体能够抑制结直肠癌SW480细胞株的APRIL基因表达,为结直肠癌APRIL基因治疗提供基础。