摘要：鸭坦布苏病毒(Duck Tembusu virus,DTMUV)是一种新发现可引起鸭产蛋下降的新型黄病毒,建立一种病原学检测方法对于疫病的诊断和流行病学研究具有重要意义。在对DTMUV序列的比对分析的基础上,设计了1对特异性引物,通过优化PCR反应条件,建立了DTMUV的一步法RT-PCR检测方法。该方法具有特异、快速、敏感、准确等特点,可以检出1.82个TCID50的病毒核酸。对2010年至2011年6月份前的106份产蛋下降鸭群临床病料进行了检测,结果显示样品阳性率为46.2%,表明DTMUV在浙江及其周边省份的产蛋鸭群具有较高的感染率。

摘要：CRISPR(Clustered regularly interspaced short palindromic repeats)技术是一种革命性的基因编辑和调控工具,问世之后迅速成为了生物医学领域的前沿热点,广泛用于基因功能研究和治疗。CRISPR具有优异的序列识别性质,核酸切割能力,并且易于编程设计改造,在生物分析化学领域展示出独特的魅力,在病毒检测、临床诊断和单细胞成像分析等方面都取得了突破性进展。目前基于CRISPR技术的检测方法种类繁多,本文综述了CRISPR-Cas分析检测方法的研究进展,并且展望了该技术的发展趋势。

摘要：环介导等温扩增技术(LAMP)是一种新兴的快速扩增技术,非常适合于现场检测。自建立以来,其在反应速度、产物检测和引物设计等许多方面又得到了进一步的改进和发展,使其性能更优异,用途更广泛。

摘要：为解决在养殖过程中多种疫病混合感染造成鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV)的临床及实验室诊断困难的问题,利用分离得到的GPV GDGZh1设计合成1对特异性引物GPV-rt PCRF/GPV-rt PCRR,建立了GPV SYBR Green I实时荧光定量PCR检测方法,并进行了临床样品及GPV在种鹅体内定植规律的检测.结果表明,该方法对质粒的检测灵敏度为3.5×10~2copies/μL,GPV具有组织广泛嗜性,种鹅的直肠、脾脏、心脏、肾脏和卵巢中病毒含量在攻毒后第5天最高,肝脏中病毒含量在攻毒后第9天最高,心脏和肾脏在攻毒后第17天检测不到病毒,直肠、肝脏、脾脏和卵巢在攻毒后第25天还能检测到病毒.这说明种鹅感染GPV后,病毒可以在其体内长期存在,并不断向外排毒,还能通过垂直传播的方式将病毒传递给雏鹅.

摘要：早在2002年，WHO推荐临床检测使用血浆，而不是传统上的血清。目前仪器自动化吸样检测几乎涉及所有项目，血清检测常因纤维蛋白堵塞仪器导致的检测不准确或仪器故障而成为检验操作的常见问题；而血清凝固需要的时间成为影响着检测结果正确性和报告单延迟发送的关键因素。更重要的是，凝血激活对RBC、WBC、PLT的损伤而导致的细胞内物质的释放，从而影响检测结果。

摘要：目的　从刚地弓形虫RH株基因组DNA中扩增出其主要表面抗原 1(SAG1)全长的基因编码序列 ,构建重组原核表达载体并在大肠埃希菌中进行表达 ,为进一步研制弓形虫病免疫诊断试剂盒打下基础。方法　根据弓形虫RH株主要表面抗原SAG1的cDNA序列设计一对引物 ,利用聚合酶链反应 (PCR )技术从RH株弓形虫基因组中扩增出SAG1的全长基因 ,将其克隆到载体pGEX 4T 3中 ,并通过基因测序加以证实 ;重新设计引物将其亚克隆至原核表达载体pET 3 2c中 ,在大肠埃希菌中经IPTG诱导表达。结果　从刚地弓形虫RH株基因组中成功扩增到 10 3 0bp的全长SAG1基因 ,该基因在原核系统中经诱导表达出一分子量约 3 70 0 0大小的融合蛋白 ,表达产物以包涵体的形式存在。结论　SAG1是弓形虫主要的表面抗原 。

摘要：目的建立能直接快速应用于临床检测洋葱伯克霍尔德菌的巢式荧光定量PCR法。方法根据洋葱伯克霍尔德菌recA基因序列设计用于普通PCR扩增的外引物,同时设计用于荧光定量PCR的内引物。分别以洋葱伯克霍尔德菌等细菌的标准株为模板,以外引物进行第一轮PCR扩增;所得PCR产物为模板,以内引物进行染料法荧光定量PCR检测recA基因表达水平,评估巢式荧光定量PCR法的特异性。同时将洋葱伯克霍尔德菌的菌液和基因组DNA进行浓度梯度稀释,继续进行巢式荧光定量PCR,确定此方法的灵敏度。最后用巢式荧光定量PCR法和Vitek 2 Compact仪器分别鉴定35例临床标本,比较两者的检出能力。结果巢式荧光定量PCR法只针对洋葱伯克霍尔德菌有扩增曲线,而对其他菌株无检测信号。同时,巢式荧光定量PCR法的检测下限是1×10^1 CFU/mL的菌液和1×10^⁃5 ng/μL的基因组DNA,具有较高的灵敏度。巢式荧光定量PCR法能有效检测出14例临床标本存在洋葱伯克霍尔德菌感染(检出率为40.0%),而Vitek 2 Compact仪器仅检测出10例(检出率为28.6%),其中4例无法识别。结论巢式荧光定量PCR法具有有效、快速和直接应用于临床检测的优点,并且特异、灵敏和准确等特点,值得在临床推广。

摘要：猪丁型冠状病毒(PDCoV)与猪流行性腹泻病毒(PEDV)均为致病性冠状病毒,可以引起猪呕吐、腹泻脱水和新生仔猪死亡。为了建立一种快速检测PDCoV和PEDV的双重SYBR Green I荧光定量RT-PCR方法,根据GenBank登录的2种病毒基因的保守序列,设计了两对特异性引物,分别扩增其N、M基因保守区,并将其克隆至pMD19-T载体;将10倍梯度稀释的混合重组质粒作为标准品模板,建立了一种检测PDCoV和PEDV的双重的SYBR Green I荧光定量RT-PCR方法,并对其反应的敏感度、特异性和重复性进行了检测。结果表明,本试验所建立的双重荧光定量RT-PCR检测方法对PDCoV和PEDV的最低检测量分别为51和32拷贝·μL-1,且与PBoV、TGEV、PRV、PCV2无交叉反应,特异性较好;对2016年至2017年在河北省收集的130份仔猪腹泻样本检测,结果显示,PDCoV的检出率为16.9%,PEDV的检出率为66.2%,二者同时感染的检出率为2.3%,与普通RT-PCR检测方法相比,敏感性更高。本研究为PDCoV和PEDV的诊断及分子流行病学调查提供了一种快速、定量检测方法。

摘要：环孢子虫是一类可引起人和动物腹泻的重要寄生性原虫。为建立猴源环孢子虫的巢式PCR检测方法,根据该环孢子虫18S rDNA基因序列,设计一对保守引物N18SA/N18SS和一对特异性引物CYJS/CYJA,通过阳性质粒摸索该检测方法的最佳反应条件,进行特异性和敏感性试验,并应用该方法对87份猴粪样本进行了临床检测。结果显示该巢式PCR能特异性地扩增出猴源环孢子虫目的片段,与微小隐孢子虫、阿米巴原虫等8种DNA无交叉反应,最低能检测0.2 fg的阳性质粒DNA,对临床样本的检出率比传统方法（饱和蔗糖漂浮法和改良抗酸染色法）提高2.3%~3.4%。可见,该巢式PCR方法具有较高的特异性和敏感性,对于环孢子虫病的诊断和分子流行病学调查具有重要的应用价值。

摘要：根据伪狂犬病病毒gE基因的序列,设计和合成了一对特异的可用于检测伪狂犬病病毒野毒的PCR引物和一条Taqman荧光探针,采用Li ght Cycl e 480荧光定量PCR仪,建立了一种可实时定量检测伪狂犬病病毒野毒的荧光定量PCR技术。该方法的线性范围为1.0×102～1.0×1010拷贝,灵敏度可达4拷贝。检测速度快,仪器的运行时间仅为1 h。对13株猪伪狂犬病病毒野毒进行了检测,结果均为阳性;与伪狂犬病gE基因缺失疫苗、猪细小病毒和鸭瘟病毒无非特异性反应。与病毒分离培养比较,该方法具有快速、灵敏、特异、定量、重复性好等优点,可望用于临床上伪狂犬病病毒野毒与疫苗毒的区分,伪狂犬病病毒野毒的检测和病毒分布的研究等。