摘要：为了研究WRKY33基因在丹参非生物胁迫中的作用机制,以白花丹参为试验材料,对丹参转录组数据进行分析,挖掘出丹参WRKY33基因参考序列并设计特异性引物,利用基因克隆技术从丹参中克隆出WRKY33基因的全长cDNA,命名为SmWRKY33。对SmWRKY33基因进行生物信息学分析,同时利用荧光定量方法探究SmWRKY33基因在逆境胁迫下的表达模式。结果表明,SmWRKY33基因核苷酸长度为1 635 bp,编码544个氨基酸。生物信息学分析显示,SmWRKY33基因的理论相对分子量为60 835.66,等电点为7.00,定位于细胞核,不存在跨膜区及信号肽,SmWRKY33蛋白为不稳定亲水蛋白。亲缘关系显示,SmWRKY33与紫苏、芝麻、白花泡桐的WRKY33亲缘关系较近。密码子偏好性分析得出拟南芥真核表达最适应丹参SmWRKY33基因的外源表达。qRT-PCR结果表明,SmWRKY33基因在低温、高温、PEG、NaCl等逆境胁迫诱导下具有不同的表达模式,其中低温、NaCl能显著诱导SmWRKY33基因的高表达,说明该基因对温度调节、盐胁迫较为敏感,猜测其参与温度、盐胁迫调控反应机制。本试验首次从丹参中克隆出SmWRKY33基因,探讨了该基因在丹参逆境胁迫下的作用机制,旨在为培育丹参的抗逆新品种提供参考基因。

摘要：目的以丹参有效成分组合活性评价为切入点,建立一种多因素多水平的均匀设计-高通量筛选(UD-HTS)中药研究新的模式。方法选择具有药理活性的丹参有效成分11种(其中脂溶性成分4种,水溶性成分7种),通过均匀设计,进行各种成分及不同浓度之间相互作用的组合,以DPPH氧化法评价各种有效成分组合对药效的影响。结果经过初筛和复筛,初步得到了丹参最佳水溶性配伍、水溶性+脂溶性配伍及优化组合配伍的组合样品。结论均匀设计-高通量筛选技术是适用于传统多因素多水平组合特点的大规模药效筛选研究新方法。

摘要：目的基于网络药理学方法及动物实验验证探讨天麻-丹参药对治疗高血压的作用机制。方法(1)通过TCMSP、BATMAN及TCMIP数据库筛选天麻-丹参药对活性成分及其作用靶点;通过Drugbank、Genecard、TTD、Disgenet数据库检索获得高血压疾病相关靶点;对药对的活性成分作用靶点与高血压疾病相关靶点取交集(共同靶点),所得交集靶点即为天麻-丹参药对治疗高血压的潜在作用靶点。将天麻-丹参药对活性成分及其作用靶点导入Cytoscape 3.9.1软件,构建“中药-活性成分-靶点”网络,筛选关键活性成分;构建潜在作用靶点的蛋白互作(PPI)网络,筛选潜在核心靶点;使用Metascape平台对潜在作用靶点进行GO功能及KEGG通路富集分析。选择关键活性成分与潜在核心靶点进行分子对接验证。(2)将30只雄性自发性高血压大鼠(SHR)随机分为模型组、西药组(坎地沙坦酯,0.72 mg·kg^(-1))及天麻-丹参药对低、中、高剂量组(2.25、4.50、9.00 g·kg^(-1)),另选雄性WKY大鼠为空白组,每组6只,每日1次,连续灌胃给药8周。分别在给药前及药物干预2、4、6、8周后检测大鼠尾动脉收缩压;采用HE染色法观察胸主动脉组织病理变化;Western Blot法检测腹主动脉中GRP78、CHOP、Caspase-12蛋白表达水平。结果(1)共得到天麻-丹参药对活性成分83个,筛选出天麻-丹参药对治疗高血压的潜在作用靶点(交集靶点)158个;5个关键活性成分:对羟基苯甲酸、4-羟基苄胺、丹参酮Ⅰ、丹参酮、γ-谷甾醇;6个潜在核心靶点:IL6、TNF、CASP3、JUN、PTGS2、IL1B;GO功能富集分析得到1826条生物学过程条目、89条细胞组分条目、199条分子功能条目;KEGG通路富集分析获得186条通路,主要涉及神经活性配体-受体相互作用、钙信号通路、炎症应答(如TNF和MAPK信号通路)、血管保护(如HIF-1和cAMP信号通路)、氧化应激(如PI3K-Akt信号通路)等信号通路;丹参酮Ⅰ、丹参酮对6个潜在核心靶点均有较强的结合力,γ-谷甾醇对IL6、CASP3、JUN、PTGS2、IL1B具有较强的结合力。(2)与空白组比较,模型组大鼠的收缩压显著升高(P<0.01);胸主动脉内皮损伤明显,内皮细胞形态异常,可见肿胀、脱落细胞,组织内膜排序紊乱,内膜结构不完整,出现内膜增厚;腹主动脉中GRP78、CHOP、Caspase-12蛋白表达量显著升高(P<0.01)。与模型组比较,给药组大鼠的收缩压均显著下降(P<0.01);胸主动脉损伤减轻,内皮细胞形态、内膜结构及厚度等均得到不同程度改善;腹主动脉中GRP78、CHOP、Caspase-12蛋白表达量显著降低(P<0.01)。结论天麻-丹参药对可能是通过对羟基苯甲酸、丹参酮、γ-谷甾醇等关键活性成分,作用于IL6、TNF、CASP3、JUN、PTGS2、IL1B等核心靶点,调控TNF信号通路、MAPK信号通路、PI3K-Akt信号通路、PERK信号通路等关键信号通路,发挥改善血管内皮功能障碍、抑制内质网应激及降血压的作用。

摘要：目的考察山楂丹参分散片最佳制备工艺。方法以丹参药材中丹参素钠、山楂药材中金丝桃苷为指标,采用L_(9)(3^(4))正交试验设计,对丹参、山楂提取工艺开展研究;通过对山楂丹参分散片中填充剂、润湿剂、崩解剂的考察,以分散均匀度为考察指标,对山楂丹参分散片处方和工艺进行筛选。结果山楂丹参分散片的最佳制备工艺为取丹参药材,加10倍量水回流提取3次,每次2 h,取山楂药材,用10倍量75%乙醇回流提取2次,每次1 h,分别将药液浓度至1.0 g/mL,并通过AB-8型大孔吸附树脂柱洗脱、浓缩、干燥,将上述丹参、山楂提取物混匀,过80目筛,再分别加入微晶纤维素、硫酸钙、羧甲基纤维素钠、交联羧甲基纤维素钠(过100目筛),混合均匀,以50%乙醇为黏合剂,24目筛制粒,60℃干燥。结论按最佳制备工艺制备的丹参、山楂提取物中丹参素钠、金丝桃苷含量较高;山楂丹参分散片在3 min内分散均匀,各项指标均符合2020年版《中华人民共和国药典》(四部)规定,表明山楂丹参分散片制备工艺稳定可行,筛选处方合理,可进一步研发。

摘要：为了建立丹参花药培养再生体系,进行了丹参花药组织培养技术研究。以丹参花蕾为试验材料,研究了小孢子发育时期的确定方法,明确了小孢子处于单核靠边期的花蕾长度,结果显示,丹参花蕾长度为5.0~7.9 mm时小孢子处于单核靠边期。并利用小孢子处于单核靠边期的花药做外植体,采用正交试验设计,分别比较了不同激素种类及配比对愈伤组织诱导和不定芽诱导的影响。结果显示,6-BA浓度为1.50 mg/L、2,4-D浓度为0.25 mg/L时,愈伤组织诱导率最高,达到83.33%,且愈伤组织长势较快,体积均匀,呈明显的颗粒状;6-BA浓度为1.25 mg/L、NAA浓度为0.05 mg/L、IBA浓度为0.25 mg/L时,不定芽诱导率最高且明显>其他处理,达到70.00%,且愈伤组织大部分呈鲜绿色,颗粒状明显,丛生苗较多,芽生长速度较快。丹参花蕾长度为5.0~7.9 mm时,小孢子处于单核靠边期,适合进行花药培养;适宜愈伤组织诱导的最佳培养基为MS+6-BA 1.50 mg/L+2,4-D 0.25 mg/L+糖30 g/L+琼脂6.5 g/L;适宜不定芽诱导的最佳培养基为MS+6-BA 1.25 mg/L+NAA 0.05 mg/L+IBA 0.25 mg/L+糖30 g/L+琼脂6.5 g/L。

摘要：目的：通过丹参七种水溶性有效成分多水平均匀设计配伍的血管内皮细胞保护作用筛选研究,评价中药有效成分的均匀设计-高通量筛选技术（uniform design-high throughput screening,UD-HTS）的应用.方法：选取原儿茶醛、原儿茶酸、咖啡酸、丹参素钠、迷迭香酸、丹酚酸A、丹酚酸B七种丹参水溶性单体有效成分七个水平（1×10-4～1×10-10 mol·L-1）进行均匀设计配伍组合,通过H2O2诱导的氧化应激损伤血管内皮细胞模型、血管内皮细胞营养剥夺模型评价各种有效成分配伍组合对药效的影响.结果：经过初筛和复筛,初步得到了2个最佳配伍组合样品（A2、B4）,其细胞存活率分别为（70±4）％,（76±3）％.不同的细胞损伤模型筛选出不同的最优配比.结论：均匀设计配伍与中药复方配伍有相似之处,均匀设计-高通量筛选技术是适用于传统多因素多水平组合特点的大规模药效筛选研究新方法.

摘要：目的:非酒精性脂肪性肝炎的发展不仅是一个重要的病理阶段,而且也是治疗的关键时期,其发展可能会发生可逆的变化,但也可以演变为纤维化、肝硬化或原发性肝癌。网络药理学是对“药物-成分-靶点-疾病”进行直接的数据分析,表明一味药可以通过多途径协同作用于人体的药效机制。而分子对接技术被广泛认为是药物设计有力的工具,它能够从分子水平预测药物与疾病的结合构象。通过对网络药理学、分子对接的研究,探讨丹参在非酒精性脂肪性肝炎的作用机制。方法:借助中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)、Gene Cards、DisGeNET、TTD、DrugBank和OMIM等数据库,确定丹参主要活性成分及治疗非酒精性脂肪性肝炎的作用靶点。研究使用Cytoscape3.7.2软件系统,构建成分-靶点网络图,并使用Venny 2.1.0在线工具取其交集靶点,再使用STRING系统进行蛋白质-蛋白质相互作用网络分析,并使用Metascape平台进行基因本体论(GO)和京都基因与基因组百科全书(KEGG)富集分析,最终用AutoDock Tools进行分子对接,运用PyMOL软件对结果进行可视化分析。结果:得到丹参干预非酒精性脂肪性肝炎的活性成分共计62个,α-香树精、丹参酮ⅡA、木犀草素、鼠尾草酚酮等成分较为关键;与非酒精性脂肪性肝炎有关的靶点86个,其中最为重要的是为前列腺素氧化环化酶2(Prostaglandin-Endoperoxide Synthase 2,PTGS2)、核受体辅激活蛋白1(Nuclear Receptor Coactivator 1,NCOA1)、β2肾上腺素受体(Adrenoceptor Beta 2,ADRB2)等;GO显示出细胞对脂质的反应、氧气水平降低的反应等;KEGG主要与缺氧诱导因子-1(Hypoxia Inducible Factor-1,HIF-1)、松弛素、过氧化物酶体增殖物激活受体(Peroxisome Proliferator Activated Receptor,PPAR)、腺苷酸活化蛋白激酶(AMP-activated Protein Kinase,AMPK)、Wnt、核因子-κB(Nuclear Factor-κB,NF-κB)等信号途径相关;分子对接也证实了两者间有较好的结合力。结论:丹参可通过多分子、多途径发挥改善非酒精性脂肪性肝炎的作用,包括癌症途径、脂质和动脉粥样硬化、内分泌抵抗、胰岛素抵抗、脂肪细胞中脂解的调节等机制。

摘要：目的:运用定量结构-活性关系(QSAR)机器学习模型和分子对接技术预测丹参治疗慢性疼痛相关的活性成分,并结合“久病致瘀”理论以及网络药理学探讨丹参治疗慢性疼痛的分子机制。方法:首先通过中药系统药理学数据库与分析平台(TCMSP)和人类基因组数据库(GeneCards)收集丹参化学成分和慢性疼痛作用靶点,筛选核心靶标,通过STRING数据库进行蛋白质相互作用(PPI)网络分析;然后对交集靶标进行基因本体(GO)富集分析和京都基因与基因组百科全书(KEGG)通路富集分析;最后运用QSAR机器学习模型以及分子对接技术筛选丹参治疗慢性疼痛的活性成分和核心靶点。结果:(1)筛选获得丹参与慢性疼痛的交集靶标55个、潜在活性成分55个,通过PPI分析发现丝氨酸/苏氨酸激酶1(AKT1)、表皮生长因子受体(EGFR)、白介素(IL)-6等核心靶标;(2)通过功能富集分析得到细胞组成45个,分子功能87个,生物过程1 450个,信号通路140条,涉及磷脂酰肌醇-3-激酶/蛋白激酶B(PI3K/AKT)、IL-17、缺氧诱导因子1(HIF-1)、环磷腺苷(cAMP)、丝裂原活化蛋白激酶(MAPK)等信号通路;(3)通过QSAR模型和分子对接发现丹参中的鼠尾草呋萘嵌苯、表丹参螺缩酮内脂、salvianan A、异丹参酮Ⅱ和丹酚酸C是治疗慢性疼痛的活性成分。结论:丹参治疗慢性疼痛的活性成分为二萜类化合物,其作用机制可能与调节AKT1介导的信号通路密切相关。

摘要：目的:通过均匀设计-高通量筛选(uniform design-high throughput screening,UD-HTS)技术,对丹参多种有效单体成分进行多因素多水平配伍组合样品抗氧化及海马神经细胞保护作用的筛选。方法:具有生物活性的丹参多种有效单体(脂溶性7种和水溶性7种)。按照均匀设计方案,得到各单体之间不同浓度配比的组合样品,通过抗2,2-二苯基-1-苦肼基自由基(2,2-Di(4-tert-octylphenyl)-1-picrylhydrazyl,DPPH)氧化法和细胞学实验检测各组合样品药物活性。结果:通过初筛和复筛,得到A13、PA两个抗氧化及海马神经细胞保护作用最佳配伍组合样品。结论:均匀设计-高通量筛选技术可快速筛选出药效较好的组合样品,适合多因素多水平配比的大规模药物筛选。

摘要：目的:在前期研究的基础上,以丹参及复方制剂复方丹参片有效成分组合活性评价为切人点,通过已经建立的多种抗氧化微孔板实验方法,探讨多因素、多水平均匀设计-高通量筛选(uniform design-high throughput screening,UD-HTS)中药研究的新模式。方法:通过SpcctraMax M5连续光谱酶标测试仪选择具有药理活性的丹参有效成分11种(其中脂溶性成分4种,水溶性成分7种)及复方丹参片有效成分6种,通过均匀设计,进行各种成分及不同浓度之间相互配伍组合,以抗2,2-二苯基-1-苦肼基自由基(2,2-diphenyl-1-picrylhydrazyl,DPPH)氧化活性、邻二氮菲-Fe^(2+)氧化法、还原能力测定及抗脂质过氧化法,评价各种有效成分组合对药效的影响。结果:经过初筛和复筛,初步得到了丹参最佳水溶性配伍、水溶性+脂溶性配伍及优化组合配伍的组合样品。结论:丹参各有效成分不同浓度均匀设计配伍,结合抗氧化高通量筛选技术可适用于传统多因素、多水平组合特点的大规模药效筛选研究的新方法。