摘要：目的探讨乙型肝炎病毒相关慢加急性肝衰竭(HBV-ACLF)不同分期患者证素、证型的演变规律。方法收集2012年1月1日至2015年2月28日来自全国18家临床中心的HBV-ACLF住院患者1058例的临床资料,包括早期患者618例,中期患者355例,晚期患者85例。设计乙型肝炎相关慢加急性肝衰竭中医证候临床调查表,调查患者基本信息、中医四诊信息(症状、舌象、脉象),统计四诊信息出现的频率。基于因子分析及聚类分析,对早期、中期、后期HBV-ACLF患者的病性证素、病位证素、证型进行判定。结果1058例HBV-ACLF患者四诊信息76个,以出现频率≥5%的四诊信息53个作为因子分析条目,其中症状信息36个、舌象信息12个、脉象信息5个。得到HBV-ACLF中医证型4个,分别为肝胆湿热证、气虚血瘀证、肝肾阴虚证、脾肾阳虚证。早期的病性证素分布以热(39.4%,359/912)、湿(27.5%,251/912)多见,证型主要以肝胆湿热证(74.6%,461/618)为主;中期的病性证素分布以湿(30.2%,187/619)、血瘀(20.7%,128/619)多见,证型以肝胆湿热证(53.2%,189/355)、气虚血瘀证(27.6%,98/355)多见;晚期的病性证素分布以气虚(26.3%,40/152)、阴虚(20.4%,31/152)多见,证型以气虚血瘀证(36.5%,31/85)、肝胆湿热证(25.9%,22/85)多见。结论HBV-ACLF不同分期的证素、证型分布差异较大,整体呈现湿热→血瘀→气血阴阳亏虚的虚实夹杂、由实转虚的证候演变趋势。

摘要：为解决当前乙型肝炎病毒(HBV)基因检测技术在一定程度上存在成本高、操作繁琐、误诊率高等问题,在此提出了一种便携式生物传感平台用于HBV基因的超灵敏检测,可检出低至2 copies/μL的HBV基因。首次通过设计针对HBV检测序列的环介导等温扩增(LAMP)反应,实现了在40 min之内对HBV基因型单拷贝基因的检测。然后,通过在磁球上固定LAMP产物的捕获探针FP(F-Probe),同时在与FP部分互补的FPc(Complementary probe of F-Probe)链上修饰耐热蔗糖转化酶(Inv)构成Inv-FPc信号探针,Inv-FPc与FP杂交后组成信号转导探针。HBV基因的LAMP扩增产物与信号转导探针发生核酸链置换反应,使Inv-FPc信号探针脱离信号转导探针,磁性分离后溶液中的Inv-FPc信号探针可催化蔗糖转化为葡萄糖,最后通过血糖仪进行信号输出,即可间接实现对HBV基因的超灵敏检测。结果表明,所构建的生物传感平台在10~500 nmol/L浓度范围内对HBV基因片段具有良好的信号响应。选用诺如病毒基因对传感器的检测特异性进行验证,其信号与背景信号几乎一致。最后,通过对含10%体积分数人血清中的HBV基因进行检测,传感器依然展现了良好的“是/否”的特异性信号响应。为HBV的分子诊断提出一种新思路,所提出的新式传感器有望应用于HBV的现场即时(point-of-care,POC)诊断。

摘要：乙型肝炎病毒(hepatitis B virus,HBV)是一种小的DNA包膜病毒,属于嗜肝DNA病毒科.在细胞核内,HBV部分双链的DNA基因组修复为共价闭合环状DNA(covalently closed circular DNA,cccDNA),后者作为HBV复制的原始模板起始病毒转录.cccDNA具有显著的稳定性,是HBV持续感染的分子基础,也是抗病毒药物设计的关键靶点.HBV cccDNA研究常受限于细胞内较低的拷贝数,以及缺乏灵敏、可靠的检测方法,因此,建立合适的cccDNA实验模型具有重要意义.本文对近年来HBV cccDNA体外实验模型方面的主要研究进展进行综述,以期为深入研究HBV病毒学和抗病毒药物研发提供帮助.

摘要：目的　设计合成乙型肝炎病毒多表位抗原基因并在大肠杆菌中表达 ,以期获得兼具预防和治疗作用的新型乙肝疫苗。方法　设计并合成一条乙型肝炎病毒 (HBV)多表位抗原基因 (P T) ,该基因包括HBV前S2区的核苷酸序列 ,和分别来自乙型肝炎表面抗原、乙型肝炎核心抗原、乙型肝炎DNA聚合酶的其它 4个连续的HLA限制性抗原表位的核苷酸序列。基因合成后克隆入载体质粒pWR4 5 0 1,转化大肠杆菌BL2 1,IPTG诱导P T基因与载体质粒的 β 半乳糖酐酶基因融合表达。结果　成功合成并拼接出乙型肝炎多表位抗原基因P T ,阳性重组子PWR HBV P T构建成功 ,并在大肠杆菌中融合表达出相对分子质量 (Mr)约 75× 10 3的碱性蛋白质。结论　初步设计成功HBV多表位抗原基因 ,在大肠杆菌中可表达出具有良好抗原性的重组融合蛋白 ,可能是较理想的HBV预防、治疗性疫苗候选物。

摘要：目的建立一种灵敏特异且简便易行的乙型肝炎病毒（HBV）B基因Ba和Bj亚型分型方法。方法用DNAStar软件比较分析GenBank中登录的B基因型HBV（HBV／B）和C基因型HBV（HBV／C）的基因序列，分别设计出HBv／B型特异性引物HB及Ba和目基因亚型特异性引物BA和BJ。第一轮PCR反应以HBV／B型特异性引物HB作为上游引物，以日本学者Sugauchi等设计的引物HBAS-4V作为下游引物（外引物）；第二轮PCR反应同样以HB作为上游引物，亚型特异性引物BA和BJ作为下游引物（内引物），在同一个反应管中进行。根据PCR产物片段的大小判定B基因亚型。随机选取实验室内经型特异性引物PCR法鉴定为HBv／B（56份）及经preS／S区序列测定证实为HBV／C（15份）的HBV慢性感染者血清标本共71份，以研究设计的引物进行半巢式PCR反应，检测Ba和Bj基因亚型，并以载有HBVBi亚型基因组的质粒作为尉亚型的阳性对照。然后随机选取15份B型样本的第一轮PCR产物直接测序，利用Blast和DNAStar软件将测序结果与GenBank中登录的Ba及Bj亚型序列进行同源性分析，验证该半巢式PCR法的准确性。结果56份HBV／B血清标本经该半巢式PCR法检测，均为Ba亚型，随机选取的15份B型PCR产物直接测序，结果均为Ba亚型，与研究中应用的半巢式PCR方法检测结果一致。15份HBV／C的血清标本检测结果均为阴性。结论建立了HBVBa和Bi亚型半巢式PCR法。该方法灵敏、特异、简便、易行，可用于临床和流行病学大样本检测。

摘要：目的研究乙型肝炎（乙肝）病毒（HBV）“a”决定簇热点突变对乙肝疫苗保护效果的影响。方法根据HBV基因保守序列设计PCR扩增引物,针对“a”决定簇突变设计简并探针,制备检测HBV“a”决定簇16种热点突变的基因芯片,并用克隆测序对芯片检测结果进行验证。基因芯片法检测47对乙肝疫苗阻断失败的母婴配对样本和323例阻断成功的母亲样本。结果克隆测序证明,基因芯片法具有特异性。应用该法检测发现,野生株（阳性率为78．66%）仍为主要流行株,依次为126A（11．27%）、145R（5．76%）、126S-1（5．28%）、126S-2（4．56%）、129H（1．20%）、144A（0．72%）、129R（0．24%）,但126A阳性率显著高于其他突变（P值均＜0．01）。阻断失败组母婴均感染的样本与阻断成功组的126A、126S-1、126S-2和145R检出率的差异无统计学意义。结论现有乙肝疫苗可阻断126A、126S和145R突变株的母婴传播,目前毋需研制针对126和145位点突变的新型乙肝疫苗,但需加强对突变株的流行病学监测。

摘要：目的综述了近年来乙型肝炎病毒(HBV)选择性抑制剂的研究现状及发展趋势。方法查阅最新国外相关文献,按照化合物结构的不同分别对核苷类和非核苷类化合物的抗HBV活性、选择性和作用机制进行分析、归纳和总结。结果与结论抗HBV药物的设计主要应寻找新的药物作用靶点,设计作用机制不同的药物,从而有利于遏制单独应用核苷类药物引起的耐药性HBV变种的增长。

摘要：目的　探讨基于乙型肝炎 (Hepatitisbvirus,HBV)核心抗原免疫优势细胞毒性T淋巴细胞 (CytotoxicTlympho cyte,CTL)表位的治疗性多肽抗原组分、结构以及在HBV转基因小鼠体内的免疫学功能。方法　用分子设计的理论和方法 ,设计基于HBV核心抗原免疫优势性CTL表位、Pre S2B细胞表位及破伤风类毒素通用TH 表位的治疗性多肽疫苗候选分子 ,经Merrifield固相多肽合成技术合成 ,经高效液相色谱 (HPLC)纯化、鉴定。以HBV转基因小鼠为试验对象 ,进行体内免疫学功能研究。结果　所设计治疗性多肽分子可在体诱导较强的抗原特异性CD8+ T细胞应答和适度的抗体反应 ,并抑制HBV特异性抗原的分泌和乙型肝炎病毒复制。结论　提示所设计基于HBV核心抗原免疫优势性CTL表位、Pre S2B细胞表位及破伤风类毒素通用TH 表位的多肽分子可作为乙型肝炎治疗性多肽疫苗候选分子。

摘要：目的　应用分子设计技术设计治疗性多肽 ,以探讨基于乙型肝炎病毒 (HepatitisBvirus,HBV)核心抗原优势细胞毒性T淋巴细胞 (CytotoxicTlymphocyts,CTL)表位的多肽设计与启动HLA Ⅰ限制性HBV特异性CD8+ T细胞应答的关系。方法　合成含HBcAg免疫优势CTL表位、Pre S2蛋白优势B细胞表位和破伤风类毒素通用TH 表位的多肽 ,并进行HLA A2 + 人PBMC体外和Balb/c小鼠体内免疫学功能研究。结果　上述多肽可在体内外诱导CD8+ CTL应答。以棕榈酸为分子内佐剂的Palm p4 4可诱导较强的CD8+ CTL应答 ,与单纯多肽比较不需另加佐剂。结论　脂类分子内佐剂可显著提高多肽的免疫原性 ;Palm p4 4可作为乙型肝炎治疗性多肽疫苗设计较有效的候选分子。

摘要：目的　建立简便、准确、实用的检测乙型肝炎病毒耐拉米夫定多聚酶 (P)基因变异的方法。方法　根据HBV基因序列 ,设计 5只寡核苷酸引物 ,用巢式聚合酶链反应 (nestedPCR)分别扩增HBVP基因B区和C区片段 ,产物用NdeⅠ或NIaⅢ酶切 ,琼脂糖胶电泳 ,分析酶切产物长度多态性(RFLP) ,建立检测P基因变异的方法。对 30例长期服用拉米夫定的慢性乙型肝炎 (慢乙肝 )患者检测YMDD基序及 5 2 6位点变异 ,16例未用拉米夫定的慢乙肝患者为对照。 4份PCR产物作克隆测序以验证方法的准确、可靠。结果　所建的巢式PCR RFLP方法操作简便、快速 ,从模板提取到酶切后电泳分析仅需 11h ;灵敏度高 ,可检测到 10 3拷贝 ml的HBVDNA ;结果准确 ,4份经酶切分别判断为野毒株或变异株的标本经测序证实。 30例用拉米夫定的慢乙肝患者中 ,发现单纯YMDD变异 8例(2 6 7% ) ,YMDD联合L5 2 6M变异 3例 (10 0 % ) ,16例对照未检出上述位点的变异。结论　本方法简便、准确 ,适合较大样本检测。可用于临床筛检常见拉米夫定耐药性HBVP基因变异。