摘要：研究根据雷公藤悬浮细胞转录组数据库设计引物,对雷公藤悬浮细胞乙酰辅酶A酰基转移酶(acetyl-Co A C-acetyltransferase)基因Tw AACT进行全长c DNA(Gene Bank:KP297934)克隆以及生物信息学分析和基因表达分析。克隆得到Tw AACT c DNA全长为1 704 bp,编码405个氨基酸,等电点为6.10,相对分子质量为41.20 k Da,在线预测表明Tw AACT具有2个催化活性位点。雷公藤悬浮细胞经茉莉酸甲酯(Me JA)外源诱导后,通过荧光定量PCR表明,Tw AACT相对表达量明显增加,在24 h达到最高。研究首次克隆得到雷公藤AACT基因,为进一步阐述雷公藤萜类生物合成途径奠定基础。

摘要：在已知油茶乙酰coa酰基转移酶基因EST序列基础上,设计6条特异引物,以油茶优良无性系‘湘林1号’种仁总RNA为模板,通过反应体系和反应条件优化,最终扩增出一条700 bp左右的目的片段,将该片段回收、克隆、测序,获得718 bp的cDNA序列,将该序列与油茶乙酰coa酰基转移酶基因进行序列拼接,确定了油茶乙酰coa酰基转移酶基因的全长cDNA序列,将该序列提交至GeneBank,登录号为GU594059。油茶乙酰coa酰基转移酶基因全长cDNA序列为1 495 bp,含有一个1 227 bp的ORF,编码408个氨基酸残基。在氨基酸序列水平上,该基因与胡黄连(***)的乙酰coa酰基转移酶基因的相似性最高,为86%,与稻瘟病菌(***)的最低,为65%。通过在线预测,油茶乙酰coa酰基转移酶基因编码蛋白的等电点pI为6.19,分子量Mw为41 628.6 Da。本研究为揭示油茶油脂合成规律和油茶的分子育种提供了理论依据和科学基础。

摘要：目的:对茅苍术乙酰辅酶A酰基转移酶基因(AlAACT)全长进行克隆,并分析其序列特征,为后期解析茅苍术萜类次生代谢产物的生物合成机制提供实验依据。方法:根据转录组测序所得的AACT基因片段设计引物,利用逆转录PCR技术获得全长cDNA序列,并采用生物信息学手段分析其序列特征。结果:克隆获得AlAACT基因的全长cDNA序列为1227 bp,编码408个氨基酸,理论相对分子质量为41.98 kDa,等电点为5.82,不存在跨膜区以及信号肽,为亲水性蛋白,具有多个磷酸化位点。进化树分析发现AlAACT基因与其他植物AACT基因具有较高相似性,尤其是菊科蓟属植物洋蓟,表明该基因保守性高。结论:成功获得茅苍术AlAACT基因序列,并掌握其序列特征,为后续深入研究该序列在茅苍术萜类化合物合成途径中的功能提供了必要的实验基础和理论依据。

摘要：根据滇龙胆转录组乙酰coa酰基转移酶基因GrAACT序列设计引物,使用逆转录PCR(RT-PCR)技术从滇龙胆幼叶扩增该基因,并进行序列分析、原核表达和组织特异性分析。结果表明:GrAACT基因(登录号KJ917163)开放阅读框长1 215 bp,编码404个氨基酸;GrAACT蛋白相对分子质量41.41 ku,p I值为6.25,属于AACT蛋白家族成员,无信号肽,为疏水稳定蛋白,主要由α-螺旋、无规则卷曲构成;GrAACT蛋白具有AACT蛋白保守结构域:硫解酶N端结构域(第12~272位氨基酸)、硫解酶C端结构域(第282~402位氨基酸)、类硫解酶结构域(第13~403位氨基酸);在硫解酶C端结构域中,包含硫解酶保守位点(第350~366位氨基酸)、硫解酶活性位点(第385~398位氨基酸);滇龙胆GrAACT蛋白与长春花CrAACT蛋白亲缘关系最近;GrAACT基因在大肠杆菌中表达的重组蛋白相对分子质量约为67.41 ku;组织特异性表达分析结果表明,GrAACT基因主要在茎、根中表达。