摘要：目的 建立HPV基因分型质控品.方法 收集宫颈脱落细胞标本300份,通过表面等离子谐振法和测序法检测标本型别,根据GenBank中参考序列设计各型别L1基因扩增引物,通过PCR扩增、连接转化构建包含不同型别L1基因重组质粒,通过30个重组质粒PCR鉴定和序列测定,并将测定序列用BLAST软件进行比对.结果 收集的标本包含了HPV 6、16、18等30种不同型别HPV感染.PCR扩增片段大小和设计引物扩增片段长度相符,除了HPV CP8304外,其余型别均在1 500～2 000 bp之间.重组质粒PCR鉴定与目的 片段相符,测序结果 与GenBank中的参考序列一致性在99%以上,在碱基数为1 500 bp的比对序列中不一致碱基数为11个.结论 建立了30种不同型别HPV L1基因分型质控品,覆盖了所有最常见型别,涵盖了14种高危型、3种中危型和13种低危型.

摘要：目的探讨人乳头状瘤病毒（HPV）E6／E7mRNA在筛检宫颈癌前病变-子宫颈上皮内瘤变（CIN）2级及以上CIN2＋（CINⅡ和CIN11I）病变的应用价值。方法横断面调查设计，标本来源于2011年12月至2013年12月期间惠州市第一人民医院和惠州市第三人民医院妇产科门诊和住院部宫颈疾病疑似患者，采集345例妇女宫颈脱落细胞用支链DNA（b-DNA）技术检测高危HPVE6／E7mRNA，以液基细胞学（thin—prepcytologictest，TCT）和组织病理学结果为参照，对HPVE6／E7mRNA的临床CIN诊断价值进行效能分析。结果（1）与TCT比较：325例HPVE6／E7mRNA阳性率分别为：未见上皮内病变细胞（NILM）21．1％（40／190）、非典型鳞状细胞（ASC）38．5％（15／39）、低度鳞状上皮内病变（LSIL）76．9％（30／39）、非典型鳞状细胞不能排除高级别上皮内病变（ASC—H）8／10、高度鳞状上皮内病变（HSIL）72．3％（34／47），TCT分级与HPVE6／E7mRNA阳性率呈线性关联（x。=67．654，P〈0．01；r=0．497，P〈0．01）；与HPVE6／E7mRNA拷贝数也具有相关性（r=0．511，P〈0．01）。（2）与病理结果比较：164例HPVE6／E7mRNA阳性率分别为NILM27．8％（10／36）、CINI65．9％（29／44）、CIN1180．6％（54／67）、CINⅢ82．4％（14／17），病理分级与HPVE6／E7mRNA阳性率呈线性关联（x。=26．426，P〈0．01；r=0．438，P〈0．01）；与HPVE6／E7mRNA拷贝数具有相关性（r=0．543，尸〈0．01）。（3）筛检效能分析：HPVE6／E7mRNA敏感度为84．6％、TCT敏感度为47．7％，联合序贯检测时敏感度为40．0％，特异度为91．1％；受试者工作特征曲线确定的CIN2＋（CINn和CINHI）最佳诊断临界点为890．26个拷贝／ml，敏感度为58．5％，特异度为93．7％。结论HPVE6／E7mRNA检测对宫颈病变检出率优于TCT，联合序贯检测时特异度明显提高；采用最佳诊断临界点进行分析时，检出CIN2-4-病变的敏感度和特异度均较高；可能对宫颈癌癌前病变的筛检及风险评估具有一定临床价值。

摘要：目的探讨高危型人乳头瘤病毒(HR-HPV)E6/E7mRNA检测法,在宫颈病变筛查中的临床价值。方法选择2013年1月至2015年12月,在青岛市市立医院及青岛市城阳人民医院妇科门诊进行宫颈癌联合筛查,并进行阴道镜宫颈活组织检查的1 659例女性受试者为研究对象。统计学比较不同病理学检查结果中,第二代杂交捕获技术(HC2)法、HPV基因分型法及HPV E6/E7mRNA检测法3种HPV检测方法检测的HPV阳性率变化及其差异,并对HPV E6/E7mRNA检测法与HPV检测的金标准HC2法,在宫颈上皮内瘤变(CIN)2+(对宫颈病变病理学诊断结果≥CIN2者,则记为CIN2+)患者中HPV阳性率的诊断一致性进行分析。本研究与所有受试者签署知情同意书,研究方案及试验设计经过青岛市市立医院及青岛市城阳区人民医院院伦理委员会批准。结果 (1)3种HPV检测方法在不同宫颈活组织检查结果中的HPV阳性率两两比较结果均显示,HPV阳性率在正常或CIN1中,均低于CIN2或3,并且差异均有统计学意义(P0.05)。HPV E6/E7mRNA检测法的HPV阳性率在CIN1中显著高于正常宫颈组织,并且差异有统计学意义(P<0.05)。(2)仅在病理学结果为正常宫颈组织中,HPV E6/E7mRNA检测法的HPV阳性率(61.4%)低于HC2法(73.7%)或HPV基因分型法(77.3%),并且差异有统计学意义(P<0.05)。(3)HC2法和HPV E6/E7 mRNA检测法在CIN2+患者中HPV阳性率的粗符合率为82.6%(100/121),Kappa值为0.69。结论 HPV E6/E7mRNA检测法较HC2法,能更好反映宫颈病变的程度。这2种检测方法在宫颈病变CIN2+中HPV阳性率的诊断一致性较好。