摘要：为探明井冈霉素a在玉米幼苗中的吸收机理,通过把药液喷施在玉米叶片上,采用HPLC-MS/MS检测玉米基部茎中井冈霉素a含量,研究了pH、温度、底物浓度及抑制剂对玉米幼苗吸收井冈霉素a的影响。结果表明:井冈霉素a能被玉米幼苗吸收,并能向下转运至基部茎;玉米幼苗对井冈霉素a的吸收符合酶促反应动力学模型,其动力学参数为:Km=0.001mmol/L,Vmax=0.04 mmol/(L/h)。温度对吸收的影响显著,24℃井冈霉素a吸收量是453.47μg/L,4℃仅为155.31μg/L;在pH=5时的吸收量是pH=9时的3倍;能量抑制剂二硝基苯酚(DNP)、羰基氰化物间氯苯腙(CCCP)对玉米叶片吸收井冈霉素a的抑制率分别为35.13%、60.25%;单糖转运蛋白竞争性底物根皮苷、D-葡萄糖对玉米叶片吸收井冈霉素a的抑制作用显著,抑制率分别达66.87%、42.26%,推测单糖转运蛋白介导了玉米幼苗对井冈霉素a的主动吸收过程。该结果为井冈霉素a防治作物病害提供科学依据,及后续靶向性农药分子的设计提供信息支撑。

摘要：以一株井冈霉素生产菌株吸水链霉菌井冈变种(Streptomyces hyroscopicus *** yen)SHJ001为出发菌株,经能量10 keV,剂量80×2.6×10^(13)ion/cm^2氮离子注入诱变,摇瓶筛选得到一株高产菌株SHJ381,其有效成分井冈霉素a(VAL-A)含量比出发菌株提高了13%。高产菌株具有良好的遗传稳定性。通过正交设计优化发酵培养基后,井冈霉素a含量由24 823 mg/L提高到34 488 mg/L,增加了38%。通过菌种选育和发酵优化,发酵液中VAL-A含量较最初提升了约56%,具有显著的增产效果。

摘要：为提高井冈霉素a的产量,本实验尝试构建吸水链霉菌的多拷贝基因菌株。根据吸水链霉菌(Streptomyces hygroscopicus ***)的糖基转移酶基因(valG)序列设计了1对引物。PCR扩增编码糖基转移酶(ValG)的1269 bp基因后,利用TA克隆构建克隆质粒pMD-19-valG。测序正确后经双酶切构建穿梭质粒pIJ8630-valG。再次测序验证后,经质粒DNA转化吸水链霉菌感受态细胞将pIJ8630-valG导入吸水链霉菌中。PCR检测证实重组菌构建成功。HPLC检测发酵产物,发现井冈霉素a的产量达到了1.17 mg/mL,比出发菌株提高了11.2%,valG基因得到表达,为进一步利用valG构建新的高产菌株奠定了基础。