摘要：大黄鱼虹彩病毒(large yellow croaker iridovirus,LYCIV)引起的虹彩病毒病是大黄鱼夏季高温期的主要流行病害之一,对大黄鱼养殖业造成巨大的经济损失,早期诊断对该病的防治具有重要意义。本研究根据大黄鱼虹彩病毒基因组序列的ORF026特异性区域设计1对特异性引物,建立了可区分LYCIV不同亚型(RSIV-Ia和RSIV-Ib亚型)的PCR检测方法,该方法对RSIV-Ib亚型具有高度的检测特异性,对真鲷虹彩病毒、石斑鱼虹彩病毒、鳜蛙虹彩病毒、黄鳍鲷腹水病虹彩病毒、锦鲤疱疹病毒等病原均无交叉反应;检测灵敏性高,灵敏度可达到102copies/uL;对19份宁德大黄鱼养殖海区的临床阳性样品检测发现,15份样品呈RSIV-Ia亚型,4份样品呈RSIV-Ib亚型,说明该方法能够有效区分大黄鱼虹彩病毒两种不同亚型。

摘要：【目的】克隆陆川猪脂酰辅酶A氧化酶1(Acyl-CoA oxidase 1,ACOX1)基因不同亚型,进行生物信息学分析,并分析ACOX1基因及其亚型在不同品种猪背最长肌中的表达情况,为研究ACOX1基因在陆川猪机体内的功能作用提供参考依据。【方法】根据GenBank中ACOX1基因序列(NM_001101028.1)及所克隆获得陆川猪ACOX1基因编码区(CDS)序列,设计特异性扩增和验证引物,采用TRIzol法提取0月龄陆川猪肝脏及8月龄陆川猪、杜洛克猪、杜陆猪和陆杜猪背最长肌的总RNA,反转录合成cDNA,以0月龄陆川猪肝脏cDNA为模板进行克隆和验证,获得陆川猪ACOX1基因不同亚型序列,并利用在线工具进行生物信息学分析,利用实时荧光定量PCR检测ACOX1基因不同亚型在背最长肌组织中的表达情况。【结果】陆川猪ACOX1基因存在2种亚型结构(ACOX1-Ⅰ和ACOX1-Ⅱ),NCBI登录号分别为OQ701687和OQ701688;2种亚型CDS长度均为1986 bp,共编码661个氨基酸残基,2种异构体主要是第270~429位氨基酸进行选择性剪切,陆川猪ACOX1-Ⅰ型编码蛋白分子量为74786.50Da,理论等电点(pI)为7.36,ACOX1-Ⅱ型编码蛋白分子量为74670.49 Da,pI为8.17;ACOX1-Ⅰ型蛋白中α-螺旋占47.96%,β-转角占10.14%,延伸链占14.52%,无规则卷曲占27.38%,ACOX1-Ⅱ型蛋白中α-螺旋占47.66%,β-转角占10.89%,延伸链占14.37%,无规则卷曲占27.08%,陆川猪ACOX1蛋白不存在跨膜结构。ACOX1-Ⅰ基因在陆川猪背最长肌中的相对表达量最高,杜洛克猪中的相对表达量最低,4个品种猪之间差异不显著(P>0.05),ACOX1-Ⅱ基因在陆川猪和杜洛克猪背最长肌中的相对表达量显著高于杜陆猪和陆杜猪(P<0.05)。【结论】陆川猪ACOX1基因存在2种亚型(ACOX1-Ⅰ和ACOX1-Ⅱ),ACOX1基因及其亚型在不同品种猪中的表达存在明显差异,该结果可为阐明ACOX1基因在陆川猪脂肪沉积及代谢方面的调控机制提供参考。

摘要：目的探索不同亚型注意缺陷多动障碍(attention-deficit/hyperactivity disorder,ADHD)患者脑白质微观结构异常并建立分类模型。方法前瞻性纳入2019年1月-2021年9月就诊于四川大学华西医院的ADHD患者及经广告招募的健康对照者,所有受试者均接受弥散张量成像扫描。通过全脑基于体素的分析对混合型ADHD(combined subtype of ADHD,ADHD-C)、注意缺陷型ADHD(inattentive subtype of ADHD,ADHD-I)和对照组的各向异性分数(fractional anisotropy,FA)参数图进行组间比较。运用支持向量机分类器及特征选择方法构建个体化ADHD分类模型,并对3组受试者两两之间的分类效能进行检测。结果共纳入26例ADHD-C型、24例ADHD-I型患者及26例健康对照者。3组受试者在双侧颞叶白质矢状层及胼胝体峡部FA值差异有统计学意义(PADHD-I型患者>对照者;两组亚型之间的差异点位于右侧额中回白质,表现为ADHD-C型>ADHD-I型。基于FA图的分类模型在对两种亚型患者间的分类预测中效能最高(P<0.05,总体准确率=76.0%,灵敏度=88.5%,特异度=70.8%)。结论两种亚型患者额脑白质微观结构异常既存在共性也存在异质性。颞叶矢状层和胼胝体的白质损害可能是ADHD疾病本身的病理生理基础,而额叶区域的异常改变或为不同亚型患者间的区分点。

摘要：目的　建立一套新的亚型鉴定方法 ,仅仅使用巢式PCR ,一次扩增 ,即可对我国HIV 1主要流行株B、C和CRF0 1 AE进行亚型鉴定。方法　从HIV阳性样本中提取核酸 ,使用能覆盖HIV 1型M组gag区的引物进行第一轮扩增 ,第二轮扩增则使用分别检测B、C、CRF0 1 AE亚型的三套特异性引物进行扩增 ,三套引物放在同一个反应管中。反应产物经琼脂糖电泳后观察 ,不同亚型的位置不同 ,以此来判断亚型。另外设计一套引物 ,专门检测我国重组株CRF0 7 BC和CRF0 8 BC。所有样品均经过基因测序、系统进化树分析 ,以进行结果验证。结果　在检测的 119份样品中 ,经基因测序和系统进化树分析证实B亚型样品 4 3份 (欧美B 11份 ,泰国B 32份 ) ,C、CRF0 1 AE、A和D亚型样品分别为 5 4份、17份、3份和 2份。其中C亚型的样品 ,有 5 2份属于CRF0 7 BC和CRF0 8 BC。而经过上述多重巢式PCR方法检测到的B亚型样品为 35份 (81 4 % ) ,C亚型 4 6份 (85 2 % )和CRF0 1 AE 13份(76 5 % )。另外 ,检测CRF0 7 BC和CRF0 8 BC重组株的引物特异性地检测到 4 3份 (82 7% )样品。上述结果与基因分析结果吻合 ,各个亚型之间无交叉 ,一种亚型的特异性引物只对该亚型有反应 ,而对其他亚型无反应 ,特异性达到 10 0 %。虽然有时会有非特异扩增带 。

摘要：治疗性抗体药物针对不同的适应证具有专一性和有效性。目前已上市的治疗性抗体药物多是以Ig G为框架开发的,并且绝大部分属于Ig G1亚型。在治疗性抗体药物的开发中,由于各亚型具有不同的结构与功能,影响其理化性质、生物活性和触发效应功能的能力等,为达到期望的治疗效果并且避免不良反应,应选择适宜的抗体亚型进行抗体设计。主要综述了影响Ig G亚型选择的相关因素,以及Ig G1、Ig G2和Ig G4亚型在治疗性抗体药物开发中的应用研究,以期为治疗性抗体药物研发提供新思路。

摘要：目的利用多重PCR(multiplex PCR)技术,建立针对单增李斯特菌4b血清型亚型(ECI、ECII、ECIV、non-EC)的鉴定方法。方法以LMOf2365_2798、LMOh7858_0487、ORF2110和gtcA作为靶基因设计引物,建立同时鉴别ECI、ECII、ECIV、non-EC的多重PCR反应体系,并对16株4b血清型单增李斯特菌进行亚型鉴定。结果 16株4b血清型单增李斯特菌可用本方法进行分型:其中ECI亚型11株,ECII亚型1株,ECIV亚型2株,非流行克隆群(non-EC)2株。结论本方法能准确鉴定单增李斯特菌4b血清型菌株的4个亚型,可用于食品、临床标本的病原学诊断和疫情暴发的溯源调查。

摘要：F18菌毛是产肠毒素大肠杆菌 (ETEC)与产vero细胞毒素大肠杆菌 (VTEC)的重要致病因子 ,可介导细菌对小肠细胞的黏附 ,并具有F18ab和F18ac 2个抗原亚型。根据已发表的F18ab菌毛A亚单位 (FedA ab)的基因 (fedA ab)设计 3条引物 ,建立了 2种聚合酶链式反应 (PCR)扩增方法。通过对F18ab+ 大肠杆菌、F18ac+ 大肠杆菌、K88+ 大肠杆菌、K99+ 大肠杆菌、987P+ 大肠杆菌、F4 1+ 大肠杆菌的试验 ,结果表明所建立的PCR方法可特异性鉴定F18+

摘要：针对家禽中流行较为广泛、危害相对大的禽流感病毒(AIV)N1、N2亚型神经氨酸酶基因设计了2对引物,建立了一种RT PCR鉴别方法,其目的片段大小分别为358bp、377bp。经对A/goose/Guangdong/1/96(H5N1)、A/Turkey/England/N28/73(H5N2)、A/Africanstarling/983/79(H7N1)和A/Turkey/Wiscosin/1/66(H9N2)病毒株的鸡胚尿囊液样品进行扩增,扩增片段的大小与预期大小完全相符。经对国内不同地区分离的16株AIVN1亚型和21株AIVN2亚型用RT PCR方法检测,阳性检出率分别为87.5%(14/16)和95.2%(20/21);对50份样品进行盲检,准确率为98%(49/50)。

摘要：为建立快速、敏感并同时鉴定不同HA和NA基因亚型的猪流感病毒(SIV)的方法。本研究根据SIV的H1、H2、H3、H5、H9、N1及N2亚型基因的保守序列分别设计型特异性引物,建立了同时扩增SIV不同亚型的多重RT-PCR及变性高效液相色谱(DHPLC)的高灵敏度和高通量分型检测方法。结果显示,该方法能够特异性的检测并鉴定H1、H2、H3、H5、H9、N1、N2等亚型SIV,而对猪瘟病毒、口蹄疫病毒、猪流行性腹泻病毒、猪繁殖和呼吸综合征病毒均无交叉反应,该方法的最低检出限为100拷贝/μL核酸。对76份猪流感鼻拭子样品临床样品检测结果表明,DHPLC与商业化荧光定量PCR检测试剂盒的检测结果完全一致。本研究建立的方法,特异性强、敏感性高、自动化程度高,为快速分型检测SIV提供技术支撑,并具有良好的应用前景。

摘要：为探讨住院儿童呼吸道合胞病毒(respiratory syncytial virus,RSV)A、B亚型与特异性抗体IgM、IgG和IgA的相关性,以筛选具有早期辅助诊断意义的抗体指标,应用FQ-PCR筛选出50例住院儿童咽拭子RSV阳性标本。根据RSV的G蛋白编码基因核苷酸序列设计单管多重半巢式PCR引物进行基因分型(A、B亚型);采用ELISA检测患儿血清中的特异性抗体IgM、IgG和IgA并对结果进行分析。结果50例阳性患儿血清中IgM、IgG、IgA及三者同时出现阳性者百分率分别为24.0%(12/50)、60.0%(30/50)、22.0%(11/50)和16.0%(8/50),差异显著(P0.05)。研究发现RSV A、B亚型与特异性抗体IgM、IgG和IgA无明显相关性;A、B亚型及混合感染最快产生IgM的时间较一致;IgA产生最早且不单独存在;RSV感染出现临床症状越久,3种抗体同时出现的概率越大,且均不适合作为早期辅助诊断的特异性指标;A亚型感染均能引起急性喉气管支气管炎、支气管肺炎、急性支气管炎和急性上呼吸道感染,混合感染并未加重临床症状,B亚型的致病力可能比A亚型弱。