摘要：目的:构建大鼠p300基因短发夹状小干扰RNA(short hairpin RNA,shRNA)真核表达质粒,观察沉默p300基因对亚溶解型(sublytic)c5b-9诱导大鼠肾小球系膜细胞(glomerular messangial cell,GMc)凋亡和激活转录因子3(activating transcription factor 3,ATF3)乙酰化水平的影响。方法:用DNA重组技术针对p300基因不同位点设计3个shRNA序列,然后分别克隆到真核表达载体pGcsi-U6/Neo/GFP/shRNA中,经电转染入GMc,再给予sublytic c5b-9刺激。Western blot筛选干涉效果最佳的p300 shRNA,流式细胞术检测GMc凋亡率,免疫沉淀(immunoprecipitation,IP)和Western blot联合检查ATF3乙酰化水平。结果:核酸测序表明p300 shRNA重组质粒构建成功。Western blot显示p300 shRNA-2具有最佳沉默效率。p300 shRNA处理GMc后,由sublytic c5b-9诱导的GMc凋亡率显著下降,同时ATF3乙酰化水平也明显降低。结论:成功构建了大鼠p300 shRNA真核表达质粒,并初步证实了p300能够促进sublytic c5b-9诱导的GMc凋亡,其机制可能与p300乙酰化修饰ATF3有关。