摘要：目的·探究不同剂量的亚砷酸钠暴露对人肝癌细胞株LM3细胞的影响,分析亚砷酸钠促进肝癌细胞恶性迁移的分子机制。方法·建立细胞亚砷酸钠染毒模型,分别用含0、1、10μmol/L亚砷酸钠的DMEM高糖培养基连续培养LM3细胞14周。暴露结束后,从细胞培养基中去除亚砷酸盐,用不含亚砷酸钠的培养基培养细胞1周使其恢复。以同一批次传代未经过亚砷酸钠处理的细胞作为对照组。分别用CCK-8增殖实验、Transwell迁移实验、DCFH-DA活性氧荧光探针实验验证慢性亚砷酸钠暴露对LM3细胞增殖、迁移和氧化应激的影响;用实时荧光定量PCR和蛋白质印迹法验证慢性亚砷酸钠暴露对LM3细胞相关基因的mRNA和蛋白表达水平的影响。结果·相比对照组,1μmol/L和10μmol/L亚砷酸钠染毒能显著增强LM3细胞内的活性氧水平(均P<0.05),并促进LM3细胞的恶性迁移(均P<0.05),且该作用呈剂量依赖性,但亚砷酸钠对LM3细胞的增殖并无显著影响。亚砷酸钠染毒可以上调血管内皮生长因子(vascular endothelial growth factor,VEGF)、还原型烟酰胺腺嘌呤二核苷酸磷酸氧化酶2 (nicotinamide adenine dinucleotide phosphate oxidases 2,NOX2)、促分裂原活化蛋白激酶8 (mitogen-activated protein kinase 8,MAPK8)基因表达水平,上调NOX2、MAPK8蛋白的表达水平。结论·亚砷酸钠暴露能增强LM3细胞的迁移能力和氧化应激水平,也能上调VEGF、NOX2、MAPK8基因的表达,提示亚砷酸钠促进LM3细胞恶性迁移的机制可能与氧化损伤及这些基因的表达上调有关。

摘要：目的探讨亚砷酸钠及其甲基化代谢产物诱导16HBE细胞融合基因B淋巴细胞瘤-2样蛋白2(BCL2L2)-多聚(A)结合蛋白核1(PABPN1)表达的差异及相关机制。方法(1)分别以浓度为1.5、3.0、4.5μmol/L的亚砷酸钠染毒16HBE细胞(设为低、中、高剂量砷染毒组),以浓度为4.5μmol/L一甲基胂酸(MMA)、二甲基胂酸(DMA)和亚砷酸钠染毒16HBE细胞(设为MMA组、DMA组和亚砷酸钠组),并设无毒物刺激的对照组。培养48 h后,以实时荧光定量聚合酶链式反应法(qRT-PCR)检测BCL2L2-PABPN1的表达。(2)设计两种小干扰RNA(siRNA)沉默片段转染16HBE细胞,以敲减BCL2L2-PABPN1,分别设为siRNA-1组和siRNA-2组;另设无敲减BCL2L2-PABPN1转染的对照组。培养48 h后,以qRT-PCR检测3组细胞中BCL2L2-PABPN1的表达,分别以MTS法、JC-1线粒体膜电位检测法检测细胞存活率和早期凋亡率,以Hoechest33342/碘化丙啶(PI)双重染色法观察细胞凋亡情况,以蛋白质免疫印迹法检测P53信号通路相关蛋白表达。结果(1)随着亚砷酸钠染毒剂量的增加,16HBE细胞BCL2L2-PABPN1相对表达水平增加(P0.05)。(2)siRNA-1组、siRNA-2组16HBE细胞中BCL2L2-PABPN1相对表达水平和细胞存活率均低于对照组(P值均0.05)。Hoechest33342/PI双重染色结果显示,siRNA-1组、siRNA-2组16HBE细胞核固缩和早期凋亡细胞的数量均较对照组增多。siRNA-1组、siRNA-2组16HBE细胞中P53、Ser392位点磷酸化P53、B淋巴细胞瘤-2相关死亡启动子、P21和细胞色素C的蛋白相对表达水平均高于对照组(P值均<0.05),P53上调凋亡因子蛋白相对表达水平均低于对照组(P值均<0.05)。结论亚砷酸钠可能通过诱导融合基因BCL2L2-PABPN1的表达,阻滞16HBE细胞凋亡;其机制与激活P53信号通路有关。亚砷酸钠甲基化代谢产物MMD和DMA对BCL2L2-PABPN1的表达无影响。BCL2L2-PABPN1可能通过BCL2L2和PABPN1基因的协同作用发挥抗凋亡效应。

摘要：目的构建亚砷酸钠(SA)与环磷酰胺(CTX)联合染毒模型,探究SA与CTX对雄性小鼠生殖及肝功能的联合毒性。方法将40只成年健康雄性昆明小鼠以体重作为分组因素,按完全随机分组设计分为SA组、CTX组、SA+CTX组(联合组)、对照组,采用腹腔注射法染毒,共持续5周。结果体重:对照组和SA组小鼠体重呈时间-效应关系增长。小鼠染毒期间,SA组体重变化与对照组相比差异无统计学意义;CTX组(P<0.05)与联合组(P<0.05)小鼠体重呈波动下降趋势。生殖系统:与对照组相比,CTX组(P<0.05)与联合组(P<0.05)小鼠睾丸脏器系数均明显降低。联合组精子密度、精子总数介于单染毒实验组之间。苏木精-伊红(HE)染色结果显示,CTX组小鼠睾丸内生精细胞数量减少、生精小管管径减小。肝:与对照组相比,CTX组的血清谷丙转氨酶(ALT)(P<0.05)和谷草转氨酶(AST)(P<0.05)明显升高,联合组与CTX组相比,ALT(P<0.05)和AST(P<0.05)降低;与对照组相比,联合组肝超氧化物歧化酶(SOD)活力升高(P<0.05),CTX组肝丙二醛(MDA)含量增加(P<0.05);相比于CTX组,联合组肝MDA降低(P<0.05)。结论SA与CTX均可对小鼠造成生殖损伤和肝损伤,而SA和CTX共同染毒则可能具有拮抗作用。

摘要：为确定亚砷酸钠染毒人胚肺成纤维(HELF)细胞的最佳实验条件,本研究以噻唑蓝(MTT)法检测的细胞抑制率为指标,以细胞密度、血清浓度、加药染毒时间为影响因素进行正交试验。结果显示,最佳的实验条件为细胞密度105个/ml,血清浓度10%,培养时间24 h。提示正交设计有助于细胞实验中实验条件的优化。

摘要：目的研究亚砷酸钠(NaAsO 2)对人肝星状细胞(LX-2)铁死亡的影响。方法体外培养LX-2细胞,采用成组设计将不同浓度NaAsO 2(5μmol/L、10μmol/L、15μmol/L)染毒LX-2细胞24h,构建体外NaAsO 2致LX-2活化模型,同时设立对照组;透射电子显微镜(transmission electron microscope,TEM)观察NaAsO 2处理LX-2细胞线粒体结构变化情况;荧光显微镜和荧光酶标仪检测细胞Fe 2+水平;比色法检测丙二醛(malondialdehyde,MDA)含量;蛋白免疫印迹法检测溶质载体家族7号成员11(solute carrier family number 7member 11,SLC7A11)、谷胱甘肽过氧化物酶4(glutathione peroxidase 4,GPX4)、α-平滑肌肌动蛋白(α-SMA)蛋白表达水平。结果TEM结果显示,NaAsO 2组细胞线粒体膜完整性破损,线粒体嵴减少和消失;此外,与对照组比较,NaAsO 2处理组Fe 2+水平均升高(P<0.05);不同剂量NaAsO 2组MDA含量差异均有统计学意义(F=7.18,P均<0.05)。其中,与对照组比较,5、15μmol/L NaAsO 2组LX-2细胞MDA含量均高于对照组(P<0.05);在翻译水平上,纤维化指标α-SMA蛋白表达水平随着NaAsO 2剂量的升高而表达上调(P<0.05),铁死亡指标SLC7A11和GPX4蛋白表达水平随着NaAsO 2剂量的升高而减少(P<0.05)。结论铁死亡参与NaAsO 2致LX-2细胞活化过程。

摘要：目的研究香烟烟气溶液和亚砷酸钠联合作用对大鼠淋巴细胞DNA的损伤,并探讨两者对DNA的损伤是否存在交互作用。方法大鼠淋巴细胞分为4组:亚砷酸钠单独作用组、香烟烟气溶液单独作用组、两者联合作用组和对照组,染毒后用单细胞凝胶电泳试验(彗星试验)检测淋巴细胞DNA的损伤,并检测细胞内丙二醛含量,同时采用2×2析因设计研究两者的交互作用。结果亚砷酸钠单独作用组、香烟烟气溶液单独作用组和两者联合作用组的彗星尾长和细胞拖尾率分别为[(11.68±3.79)μm,36%;(17.26±5.57)μm,75%;(32.10±6.18)μm,96%]均大于对照组[(6.74±1.09)μm,10%],差异均有统计学意义性(P<0.01)。而各染毒组细胞内丙二醛含量也高于对照组,差异有统计学意义(P<0.01)。析因设计分析结果表明,香烟烟气溶液和亚砷酸钠对彗星尾长的影响存在交互作用(P<0.01),对细胞内丙二醛含量的影响也存在交互作用(P<0.01),交互作用方式均为协同作用。结论香烟烟气溶液和亚砷酸钠对大鼠淋巴细胞DNA损伤存在交互作用,交互作用方式为协同作用。

摘要：目的 研究亚砷酸钠和香烟烟气溶液（CSS）联合作用对Wistar大鼠淋巴细胞凋亡的影响。方法 按2×2析因设计将大鼠淋巴细胞分为4组：对照组、亚砷酸钠组、CSS组、联合作用组。磷脂酰丝氨酸外翻分析法检测各组细胞凋亡情况，并检测各组细胞的Alamar Blue还原率以反映细胞生长代谢情况。结果亚砷酸钠组（1043．47±55．25）、CSS组（1186．52±48．90）和联合作用组（1650．64±89．65）凋亡细胞数明显高于对照组（861．22±42．67，P〈0．05）；各染毒组的细胞Alamar Blue还原率均明显低于对照组（P〈0．05）。析因设计方差分析结果表明亚砷酸钠和CSS对细胞凋亡具有协同式交互作用（F=10．39，P〈0．05）：而二者对细胞Alamar Blue还原率的影响未见交互作用（F=0．00，P〉0．05）。结论 亚砷酸钠和CSS均促进大鼠淋巴细胞凋亡，并存在协同式交互作用。

摘要：目的研究亚砷酸钠和香烟烟气溶液联合作用对凋亡相关基因Bcl-2和Bax表达的影响,并探讨它们对这2种基因表达的影响是否存在交互作用。方法按照2×2析因设计将大鼠淋巴细胞分为4组:亚砷酸钠单独作用组、香烟烟气溶液单独作用组、两者联合作用组和对照组。利用免疫印迹法检测细胞的Bcl-2和Bax表达,利用磷脂酰丝氨酸外翻分析法检测各组细胞凋亡,同时采用2×2析因设计的方差分析研究两者的交互作用。结果亚砷酸钠和香烟烟气溶液单独作用或者联合作用都能够使细胞Bcl-2蛋白表达减少、Bax蛋白表达增加、凋亡细胞数增加。析因设计的方差分析结果表明,2种毒物对Bcl-2蛋白表达、Bax蛋白表达、凋亡细胞数均存在交互作用,交互作用方式为协同作用。结论亚砷酸钠和香烟烟气溶液对大鼠淋巴细胞的Bcl-2蛋白表达、Bax蛋白表达的影响存在交互作用,交互作用方式为协同作用。

摘要：目的研究香烟烟气溶液和亚砷酸钠联合作用对大鼠淋巴细胞活力和氧化应激反应的影响,并探讨两者之间是否存在交互作用。方法香烟烟气溶液和亚砷酸钠单独作用或联合作用于大鼠淋巴细胞,用AlamarBlue还原法定量评价细胞活力变化,用细胞内还原型谷胱甘肽含量和丙二醛含量评价细胞内的氧化应激反应,并利用2×3析因设计研究两者的交互作用。结果染毒各组的AlamarBlue还原率以及细胞内还原型谷胱甘肽含量显著降低,细胞内丙二醛含量显著升高。析因设计分析结果表明,香烟烟气溶液和亚砷酸钠对AlamarBlue还原率的影响不存在交互作用,而对细胞内还原型谷胱甘肽含量和细胞内丙二醛含量的影响存在交互作用。结论在本研究中香烟烟气溶液和亚砷酸钠单独作用或联合作用均能够降低大鼠淋巴细胞活力,增强细胞内的氧化应激反应,且两者对细胞内的氧化应激反应的影响存在交互作用。