摘要：为了实现人乳头瘤病毒(Humanpa pillomavirus,HPV)16亚型衣壳蛋白L1在多形汉逊酵母(Hansenula polymorpha)中的高效表达,根据L1蛋白的氨基酸序列及多形汉逊酵母的密码子偏爱性,对L1蛋白的编码序列进行优化设计,合成了完整的编码序列,命名为HPV16L1。以甲醇诱导型启动子MOXp和终止子AOXTT为表达调控元件,以尿嘧啶合成相关基因URA3为筛选标记,构建了HPV16L1的重组表达质粒pYMOXU-HPV16。用SacII酶切质粒pYMOXU-HPV16使其线性化,电转化多形汉逊酵母菌株H-ura3,依据营养缺陷互补筛选重组菌株。通过PCR扩增及HPV16L1蛋白表达量分析表明已获得稳定高表达L1蛋白的重组汉逊酵母菌株HP-U-16L。摇瓶发酵条件的初步优化表明,以YPM(pH7.0)为基础培养基进行诱导培养,控制接种量使初始培养液OD600为1.0,每隔12h补加甲醇至终浓度为1%(V/V),37oC、200r/min条件下诱导培养72h后,HPV16L1蛋白的最高表达量为78.6mg/L。本研究为多形汉逊酵母源HPV16L1疫苗的研制奠定了基础。

摘要：目的:比较宫颈组织人乳头瘤病毒16亚型中HPV早期基因(E6/E7)和晚期基因(L1)的检出情况,并分析其作为宫颈癌及癌前病变评价的意义。方法:选择高危型(HR)-HPV16亚型的E6/E7区基因和HR-HPV的L1区基因设计特异性引物,优化条件,建立高危型HPV16分型检测方法。分别收集宫颈组织慢性宫颈炎22例,宫颈上皮内瘤变、宫颈鳞癌54例共76例组织标本,根据病理学诊断结果分为两组,对照组(慢性宫颈炎、宫颈上皮内瘤变(CINⅠ级)和高级别宫颈病变组(CINⅡ级、CINⅢ级、宫颈鳞癌),抽提DNA,采用新建立的方法对HPV早、晚期基因进行PCR检测,同时与临床的杂交捕获二代法(HCⅡ)检测的HPV L1基因进行比较。结果:成功建立了敏感、特异的基于E6/E7和L1基因的PCR检测方法,E6/E7基因HPV16分型检测阳性率为55.3%(42/76),HPV L1和HCⅡ-HPV L1检测阳性率均为25.0%(19/76),E6/E7基因阳性率明显高于HPV L1和HCⅡ-HPV L1,差异有统计学意义(P0.05)。对照组的HPV E6/E7、HPV L1和HCⅡ-HPV L1阳性率分别为29.0%、9.7%和12.9%,显著低于高级别宫颈病变组的73.3%、35.6%和33.3%(P0.05)。结论:HPV E6/E7基因比L1基因检测更具灵敏、高效、实用的特点,将E6/E7基因HPV16亚型阳性检测结果与CINⅡ以上病理诊断结果相结合,可作为预测评价临床早期宫颈病变及宫颈癌的有效方法之一。