摘要：报道了带有人凝血因子ix cDNA的高滴度高表达安全性反转录病毒载体的构建。采用LNL6反转录病毒载体为骨架,构建了由人巨细胞病毒启动子(hCMV)驱动的反转录病毒载体LNCix,由反转录病毒LTR启动子驱动的反转录病毒载体LixSN,以及由LTR和CMV启动子共同控制转录的反转录病毒载体LCixSN,分别用电穿孔方法转导PA317辅助细胞株。LNCix和LixSN反转录病毒载体能在离体细胞中表达人ix因子蛋白,而LC'ixSN反转录病毒载体转移到离体细胞中没有检测到人ix因子蛋白。PA317/INCix细胞的产病毒滴度为8×10~5CFU/ml,该重组病毒感染人纤维肉瘤细胞HT1080及血友病B患者皮肤成纤维细胞(HSF),用ELISA方法分别测定这些细胞的ix因子蛋白产量,LNCix载体在HT-1080细胞中的人ix因子平均表达量为3.3μg/10~6细胞·d^(-1);在HSF细胞中的平均表达量为2.5μg/10~6细胞·d^(-1),其中80％以上的ix因子具有凝血活性,与过去相比,提高了产病毒滴度,增加了人ix因子的平均表达量,病毒载体骨架的设计更完善,降低了产生野生型病毒的概率,提高了安全性,对于进一步开展血友病B的基因治疗具有重要的意义。