摘要：为了在感染猪繁殖与呼吸综合征病毒(PRRSV)的Marc-145细胞模型上,探讨人参皂苷rb1(Ginsenoside rb1, GSR1)抑制PRRSV能力及其作用机制。采用MTT法测定GSR1在Marc-145细胞上的最大安全浓度(Maximum no-cytotoxic concentration, MNTC)和半数毒性浓度(50%Cytotoxic concentration, CC_(50))。建立PRRSV感染Marc-145细胞模型,设计阻断PRRSV复制和直接杀灭PRRSV试验,确定GSR1体外抗PRRSV的作用方式;利用FQ-PCR检测GSR1对病毒N基因的影响,间接免疫荧光试验(Indirect immunofluorescence assay,IFA)和Western Blot技术测定GSR1对PRRSVN蛋白表达的影响。结果表明,GSR1在直接杀灭PRRSV试验中最高抑制率为54.65%,在阻断PRRSV复制试验中前12 h起抗病毒作用,且最高抑制率达60.01%,推测GSR1主要通过直接使病毒灭活或干扰病毒的早中期复制来发挥其抗病毒作用。此外,在设定12～72 h试验时间内,阳性药物利巴韦林组,4 mg/mL、2 mg/mL GSR1组PRRSV N基因拷贝数显著低于病毒组(P<0.05)。在对N蛋白含量影响试验中4 mg/mL GSR1和阳性药物可以减少N蛋白载量。表明GSR1可以通过抑制病毒N蛋白的表达来抑制病毒的复制,并可作为抗PRRSV的候选药物或先导物。

摘要：目的观察人参皂苷rb1对H9c2细胞缺氧复氧的作用。方法采用人参皂苷rb1对H9c2细胞缺氧复氧进行预处理,通过检测氧化应激、凋亡指标观察人参皂苷rb1的作用。将细胞随机分为对照组、缺氧复氧组、缺氧复氧加人参皂苷rb1(50、100、200μmol/L),按实验设计因素处理后,通过蛋白电泳检测凋亡相关蛋白caspase-3,检测氧化应激指标丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)、活性氧(ROS),TUNEL法检测细胞凋亡。结果缺氧复氧处理可使H9c2心肌细胞的ROS和MDA水平显著增加,SOD活性显著下降,上调caspase-3的表达,增加H9c2心肌细胞的凋亡。人参皂苷rb1预处理可减少缺氧复氧H9c2细胞MDA表达量,增加SOD活性,降低ROS水平,且人参皂苷rb1预处理可减少缺氧复氧H9c2细胞caspase-3的表达量及凋亡细胞数量。结论人参皂苷rb1可降低缺氧复氧对H9c2心肌细胞的氧化应激损伤及凋亡,从而对缺氧复氧H9c2心肌细胞起保护作用。

摘要：目的:探讨人参皂苷rb1对慢性吗啡作用的SK-N-SH细胞钙调蛋白激酶Ⅱβ(CaMKⅡβ)mRNA、蛋白及cAMP反应原件结合蛋白磷酸化(pCREB)表达的影响。方法:用终浓度为100 μmol&#183;L-1的吗啡、不同浓度人参皂苷rb1及终浓度为10 μmol&#183;L-1的纳络酮,单独或共同作用于SK-N-SH细胞,采用RT-PCR、Western-blot及免疫组织化法分别研究人参皂苷rbl对慢性吗啡及纳洛酮作用于SK-N-SH细胞时,CaMKⅡβmRNA、蛋白表达及核转录因子pCREB表达的影响。结果:与对照组相比,终浓度为100 μmol&#183;L-1的吗啡,作用48 h可以显著增加CaMKⅡβmRNA、CaMKⅡβ蛋白及pCREB表达;吗啡作用完毕,再加入终浓度为10 μmol&#183;L-1的纳络酮,作用30 min,CaMKⅡβmRNA、CaMKⅡβ蛋白及pCREB表达进一步增加;8 μmol&#183;L-1、16 μmol&#183;L-1、32 μmol&#183;L-1的rb1可以显著抑制上述指标。结论:人参皂苷rb1可能通过调控CaMKⅡβmRNA、CaMKⅡβ蛋白表达及核转录因子CREB的磷酸化,对慢性吗啡作用的SK-N-SH细胞产生影响。

摘要：目的:优化甘露糖(MAN)修饰姜黄素(Cur)/人参皂苷rb1(GS-rb1)共载脂质体(Lip)的处方,考察其体外靶向能力。方法:通过薄膜分散法-硫酸铵梯度法制备MAN-Cur/GS-rb1-Lips,以包封率为考察指标,采用星点设计响应面法确定MAN-Cur/GS-rb1-Lips最佳处方。采用荧光显微镜法考察了MAN-Cur/GS-rb1-Lips在小鼠脑微血管内皮细胞(bEND.3)和小鼠来源神经瘤母细胞(N2a)主动靶向性。结果:通过Box-Behnken响应面法,最终确定脂质体的最优处方为DSPE-PEG_(2000)-MAN 2 mg、卵磷脂88 mg、胆固醇10 mg、姜黄素1 mg、人参皂苷rb11 mg、超声间隔7 s。经验证GS-rb1和Cur的包封率分别为(89.97±2.74)%和(90.98±1.32)%。体外细胞摄取实验结果表明,bEND.3和N2a细胞对MAN-Cur/GS-rb1-Lips的摄取效率相比于Cur/GS-rb1-Lips有明显提高。结论:成功优化用于制备MAN-Cur/GS-rb1-Lips的处方,经MAN修饰的Cur/GS-rb1-Lips,其脑靶向能力显著提高,被认为是一种很有潜力的脑靶向纳米给药系统。

摘要：目的观察人参皂苷rb1对术后疲劳综合征(POFS)大鼠骨骼肌氧化应激的影响,探讨其抗疲劳机制。方法采用70%中段小肠切除法建立POFS大鼠模型。通过抓力测试筛选出96只SD大鼠,按体重随机分为对照组、模型组和人参皂苷rb1干预组(Grb1组,10mg/kg)。分别在术后第1、3、7、10天检测大鼠最大抓力,并检测骨骼肌内丙二醛(MDA)含量以及超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)、谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性。结果 Grb1组较模型组最大抓力在术后第7、10天明显增强(P0.05)。结论人参皂苷rb1能减轻骨骼肌的氧化应激性损伤,提高骨骼肌抗氧化酶活性,增强骨骼肌功能。这可能是其抗术后疲劳的重要途径。

摘要：目的:研究生脉拆方系列注射液人参皂苷rb1在Beagle犬体内的药代动力学。方法:采用拉丁方实验设计和交叉试验,应用LC/MS/MS分析方法测定Beagle犬血浆中人参皂苷rb1浓度,并用DAS ver 2.1软件计算其药代动力学参数。结果:人参皂苷rb1线性范围为0.002 36～9.45μg/L,方法回收率在73.31%～100.12%,日内、日间RSD值均小于15%。4种生脉拆方注射液(生脉、参麦、参味、红参注射液)中人参皂苷rb1药代动力学参数t1/2如下:(45.63&#177;11.85)、(40.48&#177;11.76)、(32.31&#177;12.60)和(28.37&#177;8.87)h。结论:该法简便、灵敏、特异,适用于血浆中人参皂苷rb1浓度测定;4种注射液中人参皂苷rb1在Beagle犬体内药代动力学行为均符合三房室模型;复方与单方注射液的人参皂苷rb1的t1/2有显著性差异(P<0.05),表明复方配伍影响其在体内药代动力学行为,显示了药物间相互作用。

摘要：为探索海藻酸钠包埋酵母菌转化人参皂苷rb1的最佳条件,选用浓度为1.2515;108个&#183;mL-1的酵母菌菌悬液进行包埋,使用紫外分光光度计测定发酵液中人参皂苷rb1含量变化计算生物转化率。通过单因素和正交设计试验分别考察海藻酸钠浓度、包埋时间、接种量和CaCl2浓度对所包埋的酵母菌转化人参皂苷的影响,最终获得了海藻酸钠包埋酵母菌转化人参皂苷rb1的最佳条件为包埋时间45min,接种量7%,海藻酸钠浓度5%,CaCl2浓度10%。在该条件下,所包埋酵母菌对人参皂苷rb1的最高生物转化率为31.51%,较以往未包埋的酵母菌转化人参皂苷rb1的生物转化率提高约3%～5%。本研究首次利用海藻酸钠包埋酵母菌转化人参皂苷rb1,解决了酵母菌种子不能重复使用等问题,简化了灭菌、菌种活化等步骤,为人参皂苷rb1等苷类物质的高效生物转化提供了很好的思路和可借鉴的成功范例。

摘要：目的:制备人参皂苷rb1磷脂复合物,并研究其理化性质。方法:以人参皂苷rb1与磷脂的复合率为评价指标,对制备工艺进行单因素考察,并采用正交实验设计对处方进行优化。利用紫外光谱法、差示扫描量热法等对所得的磷脂复合物进行鉴定。测定磷脂复合物中rb1的含量,并考察磷脂复合物在不同体系中的表观油水分配系数。结果:人参皂苷rb1与磷脂形成了分子型复合物。最佳制备方法的复合率为99.92%&#177;0.14%,其中rb1的含量在99.00%以上。磷脂复合物在不同体系中的表观油水分配系数与原药相比均显著增加。结论:确定了人参皂苷rb1磷脂复合物的最佳制备工艺,并且其磷脂复合物明显的提高了原药的脂溶性。

摘要：目的基于分析方法质量源于设计(AQbD)对复方丹参滴丸(CDDP)皂苷类成分指纹图谱的UPLC-UV方法开发进行初步研究。方法以峰个数(N)及各指标成分(三七皂苷R1、人参皂苷Rg1、人参皂苷Re和人参皂苷rb1)量为评价指标,采用Plackett-Burman设计在风险评估的基础上筛选出关键质量属性(CMAs)及关键质量参数(CMPs),然后对筛选出的显著项采用Box-Behnken设计得到CMAs及CMPs之间的响应模型。通过多变量回归分析得到最佳优化条件,并对最佳优化条件进行验证。结果在风险评估的7个因子中筛选出了3个CMPs,分别为流动相体积流量(A)、称样量(B)及C18预柱质量(C),而筛选出统计学显著的CMAs为N、三七皂苷R1量(CR1)及人参皂苷Re量(CRe)。通过响应面分析各因素与模型的变化趋势,得出其最佳优化条件为流动相体积流量为0.28 m L/min,称样量为0.30 g,C18预柱质量为1.10g。在此条件下,N为12个,CR1为1.676 5 mg/g,CRe为0.669 6 mg/g。与模型预测值相近,相对误差(RE)分别为1.34%、1.33%、2.94%。最终确立的定量方法为采用Acquity UPLC BEH C18色谱柱(50 mm15;2.1 mm,1.7μm),流动相为乙腈-水梯度洗脱,检测波长203 nm,柱温为30℃,体积流量为0.28 m L/min,进样量为2μL。结论所建立的方法可靠,为AQbD在中药分析领域的应用提供参考。

摘要：目的借助LC-MS探讨参苓白术散经粒子设计改性后在大鼠体内的药动学过程。方法采用粒子设计技术制备参苓白术粒子设计散。建立科学可行的LC-MS分析方法,对给药后不同时间点大鼠血浆中人参皂苷Re(GI-Re)、人参皂苷rb1(GI-rb1)、人参皂苷Rg1(GI-Rg1)、白术内酯I(AT-I)、白术内酯II(AT-II)、茯苓酸(PA)指标成分的血药浓度进行测定,并采用DAS 3.2.8药动学软件对数据进行智能化分析,选择非房室模式对药动学参数进行统计。结果建立的LC-MS分析方法对大鼠血浆中的指标性成分均具有良好的线性关系和专属性,且精密度、准确度、提取回收率的RSD值均小于5%,稳定性的RSD值小于10%。给药后粒子设计散中指标成分GI-Re、GI-rb1、GI-Rg1、AT-I、AT-II、PA的达峰浓度(Cmax)、药时曲线下面积(AUC0~∞)较普通散均有不同程度的增加,AUC0~∞分别为改性前的1.52、2.02、1.22、1.41、1.13、1.43倍。结论LC-MS分析方法符合《中国药典》生物样品分析要求,参苓白术散经粒子设计改性后在体内的吸收速度变快,生物利用度提高。