摘要：背景:生物活性玻璃是一种修补骨缺损和促进骨生长的生物活性材料,很多实验关注其促进成骨细胞增殖的作用及机制,经作者检索未见对人成骨细胞生长周期改变的报道。目的:认识生物活性玻璃对体外人成骨细胞生长周期的影响。设计、时间及地点:成骨细胞生长周期,体外培养观察实验,于2005-10/2006-03在江苏省血液病研究所,苏州大学附属一院血液病研究所血栓室完成。材料:取人工全髋关节置换中股骨头中内松质骨9例,人工全膝关节置换中股骨髁松质骨3例。生物活性玻璃条件培养液为美国Gibco公司产品,DMEM培养液为杭州四季青生物工程材料有限公司产品。方法:将生物玻璃晶体加入DMEM培养液内,37℃水浴24h获得生物活性玻璃离子产物。含有生物活性玻璃离子产物的DMEM培养液作为实验组培养液,不含生物玻璃离子产物的培养液作为对照组培养液。再将人松质骨源性成骨细胞以培养液培养,测定成骨细胞生长周期;用2种培养液分别培养成骨细胞7d。主要观察指标:用MTT比色法获得细胞生长指数;流式细胞仪测定每天成骨细胞DNA合成前期、DNA合成期、DNA合成后期的百分比近而侧得细胞增殖活性指标、DNA合成期细胞比率和增殖指数。结果:Si离子的浓度在生物活性玻璃条件培养液内是对照培养液的26.12%(P<0.01),Ca是88.03%(P<0.01),P是73.23%(P<0.01)。细胞生长指数在培养第2天时即出现明显的差异(P<0.01),实验组成骨细胞生长数较对照组多。对照组人成骨细胞生长周期约4d,实验组在培养2d时细胞的DNA合成期细胞比率和增殖指数比对照组高(P<0.05),提示实验组人成骨细胞生长周期缩短。结论:生物活性玻璃能促进成骨细胞的增殖,使细胞快速进入DNA合成前期、合成期及合成后期,缩短了成骨细胞生长周期。

摘要：目的观察铁过载对人成骨细胞(hFOB1.19)生物活性的影响,同时观察活性氧在这一实验变化过程中的作用。方法体外培养成骨细胞,一组运用200μmol/L枸橼酸铁铵(FAC)干预,一组运用2.5 mmol/L抗氧化剂N-乙酰半胱氨酸(NAC)干预,一组NAC预处理1 h后运用相同浓度FAC干预,一组为正常对照;细胞培养48 h后,流式细胞仪检测各组细胞内活性氧(ROS)的水平;CCK-8法检测各组细胞活力;RT-PCR法检测各组细胞OPG、BGP和COL1 mRNA表达的变化;碱性磷酸酶活性试剂盒检测各组细胞碱性磷酸酶活性。结果不同干预组成骨细胞内活性氧含量差异显著不同(P<0.05),FAC组显著高于对照组,FAC+NAC组低于FAC组、高于NAC组;各组间活性氧含量的变化与成骨细胞活力、OPG、BGP和COL1 mRNA表达光密度比值、碱性磷酸酶活性呈负相关性,组间比较有统计学差异(P<0.05)。结论铁过载降低成骨细胞生物活性可能与铁过载增加成骨细胞内活性氧水平有关。

摘要：目的:探讨利用RNA干扰(RNA interference,RNAi)技术稳定抑制雌激素受体β(Estrogen receptorβ,ERβ)表达建立人成骨细胞株hFOB 1.19细胞模型的可行性。方法:设计3种特异性ERβ-shRNA,体外合成后将其克隆人pRNAT-H1.4/Retro逆转录病毒质粒中,并包装成逆转录病毒;ERβ-shRNA逆转录病毒瞬时感染hFOB l.19细胞后,通过流式细胞仪检测感染效率,并使用半定量RT-PCR和Western blot检测对ERβmRNA和蛋白表达的抑制效率;然后取ERβ抑制效率最高的hFOB l.19细胞,通过抗性筛选,将得到稳定感染的细胞扩大培养,再通过半定量RT-PCR和Western blot检测ERβ稳定抑制的效率;并应用MTT法检测ERβ稳定抑制后对细胞增殖的影响。结果:成功构建了3种ERβ-shRNA逆转录病毒载体;流式细胞仪检测结果显示,瞬时感染效率均高达70%以上;ERβ-shRNA-1、ERβ-shRNA-2、ERβ-shRNA-3逆转录病毒载体对hFOB l.19细胞中ERβmRNA的抑制率分别为(54.56±0.95)%、(69.60±1.12)%、(76.49±1.15)%,蛋白的抑制率分别为(59.21±4.44)%、(78.35±2.00)%、(85.60±2.66)%(均P0.05)。结论:利用RNAi技术可成功建立ERβ稳定抑制的hFOB l.19细胞模型。

摘要：目的了解铁过载对成骨细胞铁稳态及生物活性的影响。方法 34℃条件下体外培养人成骨细胞(hFOB1.19),以不同浓度(50、100、200μmol/L)枸橼酸铁铵(FAC)干预,用RT-PCR检测成骨细胞铁调节基因膜转铁蛋白(FPN1)、转铁蛋白受体(TfR)和二价金属转运蛋白1(DMT1)表达的变化;用激光共聚焦扫描显微镜(CLSM)观察成骨细胞铁离子荧光强度;流式细胞仪检测成骨细胞活性氧(ROS)水平;碱性磷酸酶活性试剂盒检测碱性磷酸酶活性;Vonkossa染色法行钙结节染色。结果与对照组相比,FAC干预48h后FPN1mRNA的表达随FAC干预浓度增加呈剂量依赖性上调,TfR、DMT1mRNA的表达呈剂量依赖性下调(P<0.05);FAC干预48h后成骨细胞铁离子荧光强度剂量依赖性减弱,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.05);48h后成骨细胞ROS水平随FAC干预浓度增加呈剂量依赖性升高(P<0.05);FAC干预10d后各组成骨细胞碱性磷酸酶活性均随FAC浓度增高而降低,差异有统计学意义(P<0.05);与对照组相比,FAC干预17d后成骨细胞钙结节染色显示矿化面积和钙结节形成随FAC浓度增加而减少。结论铁过载对成骨细胞生物活性有明显抑制作用,其机制可能与细胞内铁离子浓度增加及活性氧水平升高有关。