摘要：目的研究人生长激素(hGH)基因在原核中的高效表达、纯化及鉴定.方法设计带双酶切位点引物,采用逆转录-聚合酶链反应(RT-PCR)方法获得hGH cDNA片段,并亚克隆入pUC19质粒中进行DNA序列测定.将hGH cDNA片段克隆入原核表达载体pBV220中进行表达.表达产物经7mol/L盐酸胍裂解变性、复性、层析等一系列纯化研究,纯化产物经SDS-PAGE电泳,高压液相色谱法(HPLC)纯度分析及活性测定,并通过N末端氨基酸序列测定鉴定表达产物.结果 RT-PCR扩增所得片段大小与预期值一致.pBV220-hGH表达产物经SDS-PAGE电泳显示,分子量为22×103与预计结果相符.rhGH表达量占菌体总蛋白量的40%.表达产物纯化后,纯度达97%以上,比活性大于3.0IU/mg.纯化产物经N末端15个氨基酸测定验证,为重组人生长激素.结论成功构建了pBV220-hGH原核表达质粒,并在大肠杆菌中高效表达,表达产物经纯化得到纯度≥97%的rhGH,比活性大于3.0 IU/mg.该研究为rhGH的中试生产奠定了基础.

摘要：目的酿酒酵母已被证实可作为载体应用于口服基因治疗及免疫中。为研究人生长激素(HGH)以酿酒酵母作为运送载体的口服基因药物,需要构建一种能够在酵母中复制而在哺乳动物细胞表达的HGH穿梭载体。方法利用ECHO克隆系统先构建出HGH的哺乳动物表达载体,使HGH处于CMV启动子的调控下;然后设计引物扩增CMV-HGH片段,连接到酿酒酵母表达载体pESC-URA中,构建HGH的酵母/哺乳动物穿梭载体。结果经EcoRI单酶切、EcoRI/SpeI双酶切、菌落PCR以及序列测定鉴定,确认所构建的确为酵母/哺乳动物穿梭载体pESC-CMV-HGH。结论成功构建的穿梭载体可在酿酒酵母中复制,在哺乳动物中受CMV启动子的调控进行表达,为HGH的口服基因药物研制打下了基础。

摘要：反义技术能够真正指导合理的药物设计和成功的药物开发吗?Andos Associates Inc.公司(Upp-er Saddle River,NJ)的总裁Andre Brilland 提醒说,尽管表面上的措词自相矛盾,回答仍然是肯定的,但不要过于乐观。*** 及其同事John Osark 是生物技术工业的管理和经营顾问,他们与许多从事新兴的反义技术的公司合作过。