摘要：一、人类白细胞抗原（HLA）基因的结构和功能异基因造血干细胞移植（allo—HSCT）是治疗血液系统疾病最有效的方法。在allo—HSCT中，HLA分子是影响植入、移植物抗宿主病（GVHD）和生存率的关键因素。

摘要：目的建立可靠的人类白细胞抗原（humanleukocyteantigen，HLA）基因HLA—DPA1和HLA—DPB1同步测序分型方法，研究南方汉族人群HLA-DPA1和HLA—DPB1基因的多态性。方法根据HLA-DPA1和HLA-DPB1等位基因的全长序列，分别采用位点特异性引物扩增HLA-DPA1和HLA-DPB1目的基因片段，涵盖完整的第2外显子。PCR产物经磁珠纯化，用自行设计的测序引物及优化的测序反应体系对HLA—DPA1和HLA—DPB1第2外显子进行双向测序。纯化的测序反应产物经ABI3730测序仪测序，用Assign3．5SBT软件分析结果。结果PCR扩增获得了清晰的HLA—DPA1和HLA-DPB1基因目的片段，对HLA～DPA1和HLA—DPB1基因的第2外显子进行的双向测序结果中，序列无背景信号和杂峰。在176名南方汉族健康无关个体中，共检出了4种HLA—DPA1等位基因，其频率分布依次为：DPA1＊02：02（0．589）〉DPA1＊01：03（0．284）〉DPA1＊02：01（0．096）〉DPA1＊04：01（0．031）。HLA-DPB1检出了14种等位基因，其中频率大于5％的4种等位基因为：DPB1＊05：01、DPB1＊02：01、DPB1＊04：01和DPB1＊02：02，频率介于1％～5％的7种，其余3种等位基因的频率均为1％以下。HLA-DPB1测序分型的结果与用Atria AlleleSEQR商品化测序分型试剂盒检测的结果一致。结论建立了HLA-DPA1及HLA—DPB1测序分型的方法，在群体遗传学及疾病关联研究等领域具有广泛的实用价值。

摘要：目的探索人类白细胞抗原-A(HLA-A)基因芯片分型,为器官移植临床配型服务。方法根据中国汉族南方人常见的HLA-A位点基因及其多态性的独特序列,设计并合成48条特异性的寡核苷酸分型探针,将其点在玻片上,制成芯片。基因组DNA通过组间特异性引物扩增,并用荧光素Cy5标记。标记后的产物与结合在芯片上的探针进行杂交,通过荧光扫描仪获得杂交产生的荧光信号值,再经过计算机软件自动分析,确定样品的HLA-A基因亚型。用该方法对120份样本进行HLA-A基因分型。结果120份待检样本,其中6份因PCR无产物,不能分型。1份信号杂乱,不能分型。其余113份样本分型成功。实际检出A抗原特异性结果为A2(含A203):56;A11(含A1101):52; A24:33;A1:8;A30(含A3001):7;A33:21;A26:1;A29:2;A31:3;A68:2;A3:9;A32:1。未检出A*3002基因型。整个检测耗时约4．5 h。芯片检测的重复率为100％。结论HLA-A基因芯片是一种理想的分型方法,具有特异性高、重复性好、操作简便、所需样本量少、结果判读容易、一次可作多份样本的优点,适合临床器官移植配型应用。

摘要：目的对中国部分汉族人群人类白细胞抗原（humanleukocyteantigen，HLA）A座位常见等位基因的内含子进行全长序列研究。方法从“中国造血干细胞捐献者资料库广东分库”中抽取165份样本，用美国Gentra公司的试剂盒快速提取全血DNA。自行设计引物，特异性扩增HL艮A座位的目的3kb片段，共涵盖8个外显子和7个内含子。凝胶电泳回收目标条带，连接于T载体，***5a转化，挑选阳性克隆正反向测序。采用MEGA4．0软件进行分析，并用ClustalW比对序列，相邻连接法构建进化树。其中距离矩阵通过p-distance计算，采用自举法评价这些树的准确性，重复取样部分数据1000次。结果共获得33个HLA—A等位基因全长序列，长度为2902～2918bp。7个内含子共发现138个点突变以及9个插入或缺失，具有明显的组特异性。第1内含子的多态性、GC含量和平均遗传距离D值最高。根据全长及第1～7内含子序列分别构建进化树。其中，以全长序列构建的进化树将HLA_A基因分为5组：I组包括A＊0I／03／11／30；1I组包括A＊23／24（A9）；III组包括A＊02／68／69（A2／28）；IV组包括A＊26／34（A10）；V组包括A＊29／31／32／33／74（A19）。其中I～Ⅱ组属于同一世系，Ⅲ～V组属于另一世系。用7个内含子序列构建的进化树在结构上有小的差异，较为特殊的是Ⅱ组和A＊30。Ⅱ组的第2～5内含子与I组处于同一世系，而第1和7内含子却处于相对立的另一世系。A＊30与A＊03家族的关系最近，而与A19家族较远。结论18个等位基因全长序列填补了GenBank数据库的空白，并得到了免疫基因标记数据库的确认。HLA—A等位基因的内含子多态性具有显著的组特异性，并对基因的重组具有重要意义。A＊30可能是一个具有高突变率和高重组率的特殊组系。

摘要：目的 初步建立可靠的HLA-Cω基因第2、第3和第4外显子测序分型技术.方法 基于中国汉族人群HLA-Cω基因的全长序列,设计和合成1对PCR引物,采用Stratagene P fu Taq DNA聚合酶特异性扩增HLA-Cω基因5＇-启动子区至第4内含子目的基因片段,涵盖完整的第1～4外显子.PCR产物经纯化,采用自行设计的6条测序引物和ABI PRISM BigDye 1.1 Terminator,以及优化的测序反应体系和PCR条件,对HLA-Cω,基因第2、第3和第4外显子进行双向测序.测序反应产物纯化后,采用ABI3730测序仪电泳和Assign 3.5 SBT软件分析结果.结果 PCR扩增获得了清晰的HLA-Cu,基因日的片段,所用的6条测序引物进行HLA-Cω基因第2、第3和第4外显子测序,序列中无背景信号和杂峰.156份汉族随机骨髓志愿捐献者样本用本文的方法检测.分型结果与Atria AlleleSEQR HLA-Cw Plus测序分型试剂盒的结果相一致.结论 初步建立了可靠的HLA-Cω基因测序分型方法,在HLA-Cω基因群体遗传学及组织配型等领域,具有广泛应用前景.

摘要：背景：人类白细胞抗原（HLA）配型是影响肾移植效果的重要因素,其抗体检测有助于筛查术前致敏者。目的：探讨人类白细胞抗原配型联合抗人类白细胞抗原抗体监测在亲属活体供肾移植中的应用价值。设计、时间及地点：单一样本观察,病例回顾性分析,于2004-02/2007-09在中山大学附属第一医院完成。对象：选择同期中山大学附属第一医院行亲属活体供肾者、首次肾移植者66例,供者男27例,女39例,年龄19-66岁;受者男50例,女16例。方法：采用序列特异性引物聚合酶链反应法测定拟行亲属活体肾移植的供、受者人类白细胞抗原A,B,DR抗原分型,采用补体依赖微量细胞毒性试验于术前行交叉配型。采用甲泼尼龙联合抗CD25单克隆抗体或抗胸腺细胞球蛋白于术中和术后早期作免疫诱导治疗,采用以环孢素A或他克莫司为主联合吗替麦考酚酯和泼尼松的三联方案作维持性免疫抑制治疗。主要观察指标：采用酶联免疫吸附法筛查和监测受体的群体反应性抗体;检测肾移植效果及不同免疫抑制方案患者急性排斥情况。结果：66例亲属活体供肾移植中,供受者人类白细胞抗原A,B,DR配型错配数分别为0-3个60例,4-6个6例。在0-3错配数受体中,术后3例（5%）发生移植肾功能延迟恢复,4例（7%）发生急性排斥。在4-6错配数受体中,术后1例（17%）移植肾功能延迟恢复、2例（33%）急性排斥。人类白细胞抗原0-3错配数和4-6错配数两组比较,其移植肾功能延迟恢复和急性排斥发生率差异均有显著性意义（P〈0.05）。不同免疫抑制治疗方案对移植肾功能延迟恢复和急性排斥发生率无显著影响（P〉0.05）。所有急性排斥患者经甲泼尼龙和/或抗胸腺细胞球蛋白等治疗后逆转。对3例术前预致敏受者术后定期监测群体反应性抗体变化：1例群体反应性抗体水平无明显变化,移植肾功能顺利恢复;2例术前经血浆置换后转阴或自然转阴,术后发生急性排斥,经甲泼尼龙、抗胸腺细胞球蛋白等治疗后逆转。结论：亲属活体供肾组织配型中,人类白细胞抗原配型与肾移植术后急性排斥、移植肾功能延迟恢复等相关。术前组织配型及抗人类白细胞抗原抗体动态监测对于亲属活体供肾移植特别是预致敏受者很重要。

摘要：背景:目前中华骨髓库主要采用分辨率较高的聚合酶链反应-寡核苷酸探针分型反向杂交荧光微珠法检测人类白细胞抗原HLA-A、B、DRB1,该方法在提高分辨率的同时,有些检测结果难以一次性确定,可采用DNA测序技术确认。目的:识别和确认一个人类白细胞抗原新等位基因。设计、时间及地点:以DNA为观察对象的开放性实验。常规初检聚合酶链反应-寡核苷酸探针分型反向杂交荧光微珠法于2007-11在河南省红十字血液中心中华骨髓库河南分库人类白细胞抗原组织配型实验室完成,测序实验于2008-02在戴诺生物技术(北京)有限公司人类白细胞抗原实验室完成。材料:中国造血干细胞捐献者初检结果可疑为新基因的重采血样5mL。方法:采用聚合酶链反应-寡核苷酸探针分型反向杂交荧光微珠法进行常规人类白细胞抗原分型,发现A位点反应格局异常,提示有2个无法解释的假阳性探针反应(10FP、88FP)和1个假阴性探针反应(58FN)、不能正常判读给出确切结果时,采用DNA测序技术测定人类白细胞抗原A位点外显子2,3,4(Exon2,3,4)的核苷酸序列,并与已知相近等位基因进行序列对比分析。主要观察指标:测序结果与已知人类白细胞抗原等位基因序列的比较分析。结果:聚合酶链反应-寡核苷酸探针分型反向杂交荧光微珠法基因分析结果显示,受检者人类白细胞抗原基因分型为A*02xx,26xx(10FP、88FP58FN),B*15(75),55xx,DRB1 08xx,11xx,A位点反应格局异常,提示有2个无法解释假阳性反应*(10FP、88FP),有1个假阴性探针反应(58FN),不能指定为任何人类白细胞抗原A位点等位基因。对本例人类白细胞抗原A基因第2,3,4外显子双向之直接测序结果分析显示:A*02010101,A*260101292S/C。分析测序结果峰图,292位置应为C,分析软件提示该基因改变在A26new一侧。该序列与人类白细胞抗原A*260101进行比对,同源性99%,在第2外显子区域292位碱基发生了G→C,74位的密码子GAC>CAC最终导致了氨基酸的改变,即天冬氨酸(Asp)→组氨酸(His)。结论:该序列为A位点的一个新等位基因,已在GenBank注册(注册号EU785343),并于2008-04被WHO-HLA因子命名委员会正式命名为A2636.(HWS10005530)。

摘要：目的　建立用于人类白细胞抗原 (HLA) DR5 3组基因分型的寡核苷酸DNA微阵列。方法　根据中国汉族人群HLA DRB等位基因的频率设计特异性的分型探针 ,制作寡核苷酸DNA微阵列。通过组间特异引物扩增基因组DR5 3相应区段的DNA ,扩增中用Cy5 dCTP荧光标记 ,扩增标记后的产物与芯片的探针杂交 ,通过杂交产生的荧光信号及分布格局确定样品的基因亚型。分型结果用标准DNA和序列特异寡核苷酸探针杂交验证。　结果　经寡核苷酸DNA微阵列分型 ,111份样本中共检出DR5 3组位点 72个 ,其中DR934个 ,DR42 5个 ,DR713个 ,无一例假阳性或假阴性 ,重复率和准确率均达到 10 0 %。检测总耗时约 5h。　结论　寡核苷酸DNA微阵列用于HLA DR5 3组基因分型具有高分辨率、高特异性和简单快速的特点 ,适合于临床应用。

摘要：背景:选择适合的人类白细胞抗原匹配供者是实施造血干细胞移植治疗的关键,不同人种、地区和疾病人群的人类白细胞抗原与单倍型频率分布是评估地中海贫血患者选择适合供者的重要遗传学依据。目的:分析地中海贫血患者人类白细胞抗原A-B-DRB1单倍型和表型频率分布格局,估算其与骨髓库相合供者相配的概率。设计:病例-对照分析。对象:患者组为2000-06/2006-12广东地市级以上13家医院诊断为地中海贫血的108例患者,广东籍,彼此无血缘关系。正常对照组为2000-08/2006-12中华骨髓库招募的5352名广东籍健康供者,与患者无血缘关系。方法:应用最大似然性算法计算两组人类白细胞抗原A,B,DRB1单倍型及表型频率分布。根据人类白细胞抗原单倍型遗传特征,某一个体人类白细胞抗原A,B,DRB1表型频率等于相应的基因型频率之和。在由n个供者组成的供者群体找到至少1例与患者表型全相同供者的概率P,应用公式P=1-(1-Df)n计算,Df为供者表型频率。结果:患者组和对照组最常见单倍型和表型频率分布格局不同。正常对照组常见的单倍型为A2-B46-DR9,A33-B58-DR17,A11-B75-DR12,A11-B13-DR15和A33-B47-DR13;患者组常见的单倍型为A2-B46-DR9,A33-B58-DR17,A2-B46-DR14,A11-B60-DR12和A11-B75-DR12。正常对照组常见的表型频率分布情况为A2,33;B46,58;DR9,17,A2,11;B46,75;DR9,12,A11,33;B58,75;DR12,17,A2,2;B46,46;DR9,9和A2,11;B13,46;DR9,15;患者组常见的表型为A2,33;B46,58;DR9,17,A2,2;B46,46;DR9,9,A2,2;B46,46;DR9,14,A2,11;B46,60;DR9,12和A2,11;B46,75;DR9,15。两组之间相匹配的表型有19种,表型匹配概率为0.44%(19/4282)。人类白细胞抗原A24-B51-DR8,A3-B38-DR7,A24-B50-DR12,A3-B38-DR4,A24-B51-DR8和A24-B60-DR7等34条单倍型及A2,33;B46,58;DR9,17,A2,2;B46,46;DR9,9和A2,11;B46,75;DR9,15等67种表型,其频率在正常对照组有不同程度的降低,携带有这些单倍型或表型患者找到人类白细胞抗原单倍型相合或全相合供者的概率降低。结论:地中海贫血患者人类白细胞抗原A-B-DR单倍型频率分布呈高度遗传多态性,患者找到人类白细胞抗原全相合供者的概率取决于供者群体人类白细胞抗原表型频率。

摘要：背景:人类白细胞抗原基因测序分型中,当某些等位基因间的差异碱基位于测序范围外时,无法得到清晰的等位基因结果。目的:分析中国人群人类白细胞抗原A、B、DRB1基因测序分型中模棱两可等位基因的分布规律,探讨其在中华骨髓库大样本人类白细胞抗原A、B、DRB1基因的测序分型中的解决方案。设计、时间及地点:采用随机抽样方法对研究样本进行人类白细胞抗原A、B、DRB1基因的测序分型,并对其中的模棱两可等位基因进行验证性实验,于2006-01/2008-06在深圳市血液中心完成。材料:658名深圳骨髓库汉族供者乙二胺四乙酸盐抗凝血5mL。方法:采用聚合酶链式反应--测序分型方法对658名深圳骨髓库供者的人类白细胞抗原A、B和DRB1基因进行高分辨分型,并采用针对相应位点的高分辨聚合酶链式反应-序列特异性引物方法对其中由于碱基差异位于检测区外而产生的模棱两可等位基因进行鉴别。主要观察指标:模棱两可等位基因的分布及确认。结果:658份标本中,人类白细胞抗原A、B和DRB1三个基因座的模棱两可等位基因分别为9个(2种)、140个(5种)、406个(8种),占等位基因总数的14.06%(555/3948)。高分辨聚合酶链式反应-序列特异性引物鉴定结果显示,中国报道的DRB1*1401被全部确认为DRB1*1454;12例B*0705/B*0706中,有1例被确认为B*0706,其他13种等位基因的鉴定结果分别为A*6801、A*7402、B*2705、B*3501、B*4402、B*5801、DRB1*0101、DRB1*0406、DRB1*0803、DRB1*1101、DRB1*1201、DRB1*1302和DRB1*1502。结论:在中华骨髓库大样本人类白细胞抗原基因的测序分型中可以应用直接鉴别的方法区分模棱两可等位基因,但在临床移植前的高分辨确认试验中则需要采用实验方法进行精确分型。