摘要：目的研究微小RNA-34a(microRNA-34a,miR-34a)在人结肠癌细胞株HCT116中的过表达对细胞增殖和侵袭的影响及其机制。方法设计合成并构建携带绿色荧光蛋白(GFP)的miR-34a真核表达载体,脂质体法稳定转染HCT116细胞。通过Realtime PCR验证转染后miR-34a的表达变化。MTT法检测转染前后HCT116细胞增殖能力变化,Transwell法检测转染前后HCT116细胞侵袭能力改变,western blot检测目的蛋白的表达。结果 miR-34a转染HCT116细胞后其表达量增加到(7.32±1.34)倍,而HCT116细胞增殖能力也受到显著抑制,下降到(0.49±0.10);Bcl-2蛋白受到miR-34a表达的抑制,而BAX的表达则受到miR-34a表达的增强;HCT116细胞侵袭能力在miR-34a过表达后显著增强,相应的MMP-2和MMP-9表达也出现显著增强。阴性对照组与空白对照组比较无显著性差异。结论 miR-34a的过表达能够抑制人结肠癌细胞HCT116的增殖及侵袭转移,与调控Bcl-2/BAX和MMP-2和-9蛋白的表达密切相关。

摘要：目的构建TSG101(tumour susceptibility gene101,TSG 101)小干扰RNA(TSG101-siRNA)的真核表达载体,观察RNA干扰沉默TSG101基因后化疗药物奥沙利铂(L-OHP)对结肠癌耐药细胞株HT29/L-OHP增殖的影响。方法根据小干扰RNA的设计原则由计算机软件辅助设计TSG101的靶序列,应用DNA重组技术将目的序列克隆入小干扰RNA的表达载体;RT-PCR检测TSG101-siRNA对HT29/L-OHP细胞TSG101 mRNA表达的影响;Western blot检测TSG101-siRNA对TSG101基因表达蛋白的抑制效率;采用MTT法测定TSG101-siRNA联合化疗药物L-OHP对HT29/L-OHP的增殖抑制作用;FCM分析TSG101-siRNA转染HT29/L-OHP细胞前后的细胞周期分布情况。结果测序显示干扰载体构建成功,TSG101-siRNA能抑制TSG101mRNA表达,使HT29/L-OHP细胞TSG101蛋白的表达下降,明显增强L-OHP对HT29//L-OHP的增殖抑制,TSG101-siRNA转染HT29/L-OHP细胞后G0/G1期和S期细胞数有增加,而G2/M期细胞数有减少。结论TSG101-siRNA的真核表达载体能有效地抑制HT29/L-OHP细胞的TSG101 mRNA、TSG101蛋白的表达,提高化疗药物奥沙利铂对HT29/L-OHP的抑制率,能逆转结肠癌耐药细胞株HT29/L-OHP对L-OHP的耐药性。

摘要：目的利用细菌内同源重组法构建携带凋亡素VP3基因的重组腺病毒,观察其与姜黄素单独或联合对结肠癌SW480细胞凋亡及周期分布的影响。方法设计VP3 cDNA扩增引物,从PET15b-VP3质粒中扩增VP3 DNA序列,与pShuttle-IRES-hrGFP连接构建pShuttle-VP3-hrGFP穿梭质粒,PCR和EcoRⅤ酶切电泳鉴定;线性化穿梭质粒pShuttle-VP3-hrGFP,转化含pAdeasy-1的超感受态BJ5183大肠杆菌,构建pAd-VP3重组腺病毒质粒并经PCR、电泳及测序鉴定,线性化腺病毒质粒经脂质体转染AD293细胞进行pAd-VP3重组腺病毒的包装和扩增,CsCI密度梯度离心法进行病毒浓缩和纯化并将其单独或联合姜黄素作用人结肠癌SW480细胞,观察其对细胞凋亡及周期分布的影响。结果pShuttle-VP3-hrGFP穿梭质粒构建鉴定成功,pAd-VP3重组腺病毒质粒经酶切获得一大于23 kb的大片段和4.5kb的片段,PCR反应扩增出了402 bp的片段,重组质粒测序证实VP3-hrGFP编码区成功地克隆入了腺病毒pAd中,且其序列与GeneBank中VP3 CDNA序列完全一致。成功包装出携带VP3基因的腺病毒,滴度为1.738×1012opu·ml-1,获得的重组腺病毒及姜黄素单独或合用均可阻滞细胞周期于G0/G1期,诱导细胞凋亡(P<0.05,P<0.01),二药联用效果更为显著(P<0.01)。结论细菌内同源重组法可快速、高效地制备携带凋亡素VP3基因的重组腺病毒,并能与姜黄素协同通过阻滞细胞周期于G0/G1期诱导结肠癌SW480细胞凋亡。

摘要：为了寻找结构新颖,活性较好的抗肿瘤化合物,本文设计并合成了15个未见报道的异吲哚酮衍生物(Ⅰ_(1)~Ⅰ_(5),Ⅱ_(1)~Ⅱ_(5)和Ⅲ_(1)~Ⅲ_(5)),其结构经^(1)H NMR和HR-MS(ESI)表征。使用四甲基偶氮唑盐(MTT)法,初步的生物活性测试结果表明:部分化合物对人肺癌细胞A549(Ⅱ_(4),IC_(50)=15.49μM)、人结肠癌细胞Colo205(Ⅱ_(4),IC_(50)=15.54μM)、人胰腺癌细胞PNAC-1(Ⅱ_(4),IC_(50)=37.07μM)和人骨髓瘤细胞U266(Ⅱ_(5),IC_(50)=75.27μM)表现出明显的抑制作用。