摘要：目的优化MRSG mRNA表达的Taqman荧光定量PCR检测反应体系并进行系统评价。方法设计荧光PCR适用的引物和探针,从模板、引物、探针、镁离子浓度等方面优化荧光定量PCR检测反应体系,评价优化系统的特异性和稳定性。结果确定系统的模板取样量为2μl,引物浓度为0.4μmol/L,探针浓度为0.2μmol/L,Mg^(2+)浓度为4mM,建立了稳定的MRSG mRNA表达的Taqman荧光PCR检测方法。结论优化后的MRSG mRNA荧光PCR检测方法特异性和稳定性较好。

摘要：目的:观察高密度脂蛋白对HepG2细胞代谢综合征相关新基因MSRG表达的影响。方法:实验于2006-03/10在四川大学华西基础医学与法医学院医学分子生物学省级重点开放实验室完成。设计MSRG引物及Taqman探针,构建标准质粒,建立RealtimePCR定量检测MSRG表达的方法。以含5%无脂蛋白血清的低糖DMEM培养基培养HepG2细胞,分别加入不同浓度的高密度脂蛋白(0,25,50,100,200mg/L)孵育24h;以含100mg/L高密度脂蛋白的5%LPDS低糖DMEM培养基孵育HepG2细胞不同时间(0,6,12,24,36h),分别以0mg/L及0h为对照,通过RealtimePCR检测MSRG的表达。结果:①不同浓度高密度脂蛋白孵育细胞时,在0～100mg/L范围,MSRG表达随高密度脂蛋白浓度的增加有下降趋势;与0mg/L组相比,MSRG在50,100mg/L组表达差异具有显著性意义(P0.05)。②不同高密度脂蛋白孵育时间0～24h组,MSRG表达随时间延长有下降趋势;与0h相比,12,24,36h组基因表达降低(P0.05)。结论:在低浓度(0～100mg/L)及短时间内(0～24h)高密度脂蛋白可以抑制HepG2细胞MSRG的表达。