摘要：为了优化鸡特异性CpG ODN活性分子体外筛选体系,避免核酸细胞毒性的干扰,增强细胞应答效果,尝试利用CEF代替鸡淋巴细胞进行CpG ODN活性分子的体外筛选。将设计的9条不同序列的CpG ODN分别刺激CEF,通过测定细胞增殖效果和相关免疫基因的表达变化,评判免疫应答效果是否准确反映了CpG ODN结构特征,确定CpG ODN最佳免疫刺激活性分子。结果显示,CEF对CpG ODN的刺激呈现出良好的免疫反应,正确体现了CpG ODN序列的构效关系,成功筛选到3条CpG ODN活性分子,表明CEF适合于CpG ODN免疫佐剂的体外筛选。

摘要：目的探讨体外筛选效率较高的引导核糖核酸(guide ribonucleic acid,gRNA)的方法。方法以家兔扭转蛋白2A(torsin family 2 member A,TOR2A)基因的gRNA设计和筛选为例,介绍gRNA简单的体外筛选方法。首先根据TOR2A基因的外显子序列在线设计gRNA,选择3条gRNA序列(也可更多),将其分别插入到T7启动子之后,体外转录gRNA并纯化备用。设计包含gRNA打靶序列的一对引物,以基因组DNA为模板进行PCR扩增并胶回收PCR产物。将gRNA,PCR产物和Cas9内切酶组成的体系进行酶切实验,琼脂糖电泳判定gRNA引导的酶切效率。结果琼脂糖凝胶电泳结果显示第1条gRNA未能引导Cas9内切酶对含打靶位点的PCR产物进行DNA酶切,第2条gRNA(GCTTGTCCATCTCGTCGAAG)和第3条gRNA(TCTCTTCCTCTTCGACGAGA)引导Cas9进行了比较彻底的酶切,第2、3条gRNA可用于后续研究。结论此体外筛选方法是一种简单、可行和实用的gRNA的体外筛选策略。

摘要：基于环氧合酶-2(COX-2)与COX-1结构上的差异,设计了在布洛芬苯环3位引入取代苯甲酰胺基的系列化合物,以期利用COX-2的侧面口袋,增加对COX-2的结合作用.以布洛芬为原料经五步反应合成12个目标化合物,其结构经核磁共振氢谱、质谱和元素分析(或高分辨质谱)确证.体外筛选结果表明,化合物有一定的COX-2抑制活性;对化合物7g和7h进行了体内实验,结果表明抗炎活性弱,但镇痛活性比较强.

摘要：四氧化二氮/偏二甲肼(Unsymmetricaldimethyl_hybrazine,简称UDMH)为常用的航天器双组元液体推进剂。偏二甲肼沸点低,具有“三致”毒性,可在使用过程中释放到环境中,对污染地的生物多样性和人类健康构成威胁,因此迫切需要清除环境中的偏二甲肼。该文采用细胞工程的技术手段,以芦苇幼苗的下胚轴为材料诱导愈伤组织,继而通过逐步提高筛选压力选育出可耐受偏二甲肼的变异细胞系,再诱导变异细胞系分化,为可治理含偏二甲肼的废水的人工湿地处理系统的构建提供理想的工程植物。结果表明:芦苇的愈伤组织在含有0.5mg·L-12,4D的MS培养基上生长良好;偏二甲肼对该愈伤组织生长的半致死剂量为16.3mmol·L-1;在分别含有1.63、3.26和8.15mmol·L-1偏二甲肼的筛选培养基上进行3～6次继代培养后,可得到较稳定的抗性细胞系,培养23d后的相对生长量分别为对照的90.4%、84.3%和43.4%,培养43d后的相对生长量分别为对照的95.6%、91.7%和46.8%;但是只有前两类抗性细胞系可在含0.1g·L-1KT、0.01g·L-1NAA和相应浓度的偏二甲肼的MS培养基中诱导分化;将绿色再生苗转移到不含激素但含偏二甲肼的培养基上强化根的生长,再经过35d左右的适应性驯化,70%以上的再生苗可成功地转移至温室中培养,为日后人工湿地系统的构建奠定了基础。

摘要：核酶作为一种特异性抑制转录后基因表达的遗传操作工具 ,已在基因治疗和后基因组研究领域显示出其巨大的应用价值。目前 ,人们正致力于提高核酶在体内的活性 ,以及寻找新的更有价值的核酶结构。本文就在核酶的设计 目标剪切位点的选择 促进核酶剪切活性的额外因子 用体外筛选方法获得新型核酶。