摘要：目的　探讨乙酰肝素酶 (HPSE)反义寡脱氧核苷酸对人乳腺癌细胞株MDA435侵袭力的抑制作用。方法　设计合成互补于HPSEmRNA起始密码区的硫代反义寡脱氧核苷酸AS ODN及相应的无义对照寡脱氧核苷酸NS ODN ,以阳离子脂质体Lipofectin包埋后转染MDA435细胞 ,以逆转录 聚合酶链反应 (RT PCR)检测转染后HPSEmRNA表达的变化 ,以Western印迹检测HPSE蛋白表达的变化 ,以定量Matrigel侵袭实验检测MDA435细胞侵袭力的变化。结果　与正常对照组、脂质体对照组和NS ODN相应浓度组相比 ,AS ODN各浓度组对HPSEmRNA和蛋白的表达及细胞侵袭力均有明显抑制作用 (P <0 0 1) ,其抑制效应在不同浓度组间差别显著 (P <0 0 1)。AS ODN在终浓度为 0 1μmol/L、0 2 μmol/L和 0 4μmol/L时对MDA435细胞的侵袭力抑制率分别为 34 0 %、5 7 8%和 79 7%。结论　HPSE反义寡脱氧核苷酸通过下调HPSEmRNA和蛋白的表达可显著抑制人乳腺癌细胞株MDA435的侵袭力 ,并呈剂量依赖性。

摘要：目的　探讨乙酰肝素酶 (HPSE)反义寡脱氧核苷酸 (AS ODN )对人乳腺癌细胞株侵袭力的抑制活性。方法　设计合成分别互补于HPSEmRNA 5 '未翻译区和起始密码区的AS ODN1、AS ODN2及相应对照NS ODN1、NS ODN 2 ,在脂质体介导下以 2 5 0nmol/L终浓度转染人乳腺癌MDA43 5细胞 ,以RT PCR和Westernblot分别检测HPSEmRNA和蛋白表达 ,以基质凝胶侵袭实验检测细胞侵袭力。结果　AS ODN 2组的HPSEmRNA相对表达量、蛋白表达量和侵袭细胞数(0 .62± 0 .0 4、12 .70± 1.70、61.0 0± 9.0 0 )与脂质体对照组 (1.60± 0 .0 4、3 6.2 0± 2 .10、178.0 0±17.0 0 )和NS ODN2组 (1.48± 0 .0 3、3 5 .5 0± 2 .3 0、174.0 0± 2 0 .0 0 )相比较均显著降低 (P 0 .0 5 )。结论　互补于起始密码区的HPSEAS ODN可通过下调HPSE表达显著抑制人乳腺癌细胞株MDA43 5的侵袭力。

摘要：目的探讨乙酰肝素酶反义硫代寡脱氧核苷酸对人肝癌细胞系侵袭力的抑制作用。方法设计合成互补于HPAmRNA起始密码区的硫代反义寡脱氧核苷酸AS-ODN及相应的无义对照寡脱氧核苷酸NS-ODN,以阳离子脂质体OligofectamineTMReagent包埋后转染SMMC-7721、BEL-7402细胞。采用RT-PCR和Western-blot检测转染前后细胞HPAmRNA及蛋白表达的变化,以基底膜重建实验检测SMMC-7721、BEL-7402细胞侵袭力的变化。结果与正常对照组相比,AS-ODN转染组SMMC-7721、BEL-7402细胞HPAmRNA和蛋白的表达均显著下降(P<0.01,P<0.05),转染后两细胞系的侵袭力抑制率分别为55.8%和61.8%。结论HPA硫代反义寡脱氧核苷酸可通过下调HPAmRNA和蛋白的表达抑制肝癌的侵袭力。

摘要：目的研究纤维连接蛋白(fibronectin,FN)对人结肠癌细胞侵袭力的影响,并探讨其中的信号传导机制。方法以递增浓度的 FN 刺激结肠癌细胞株 Colo320,以免疫沉淀和蛋白质印迹法检测结肠癌细胞内黏着斑激酶(focal adhesion kinase,FAK)第397位酪氨酸(tyr-397)磷酸化的状况,以改良Boyden 小室法检测相应的细胞侵袭力变化。设计反义寡核苷酸阻断 FAK 蛋白质表达,再次观察接受FN 刺激后,结肠癌细胞内 FAK tyr-397磷酸化状况及细胞侵袭力的改变。结果 FN 能够促进 Colo320FAK tyr-397磷酸化,在一定范围内具有剂量依赖性。FN 浓度达10nmol/L 时,此作用最显著,继续增加 FN 浓度,FAK tyr-397磷酸化不再呈现继续增强趋势,当浓度达到100 nmol/L 时,磷酸化程度反而有所下降;FN 可以增强细胞侵袭力,同样在一定范围内具有剂量依赖性;反义寡核苷酸干预后,结肠癌细胞内 FAK tyr-397磷酸化及细胞侵袭力均有显著降低(P<0.01)。结论 FN 可以有效增强结肠癌细胞的侵袭力,其作用是通过 FN-FAK 信号通路实现的,FAK 的活性形式是其酪氨酸位点的磷酸化,阻断 FAK 的表达可以减弱 FN 促进细胞侵袭的作用。

摘要：目的探讨膜联蛋白Ⅱ(AnnexinⅡ)反义寡核苷酸(ASODN)对膀胱癌BIU-87细胞AnnexinⅡ基因表达及侵袭力的影响。方法设计合成AnnexinⅡASODN,采用脂质体将低、中及高浓度(6、12及18μmol/L)的AnnexinⅡASODNs分别转染BIU-87细胞24、48及72 h,同时设空白对照组(不转染)。采用免疫细胞化学与原位杂交法分别检测各组细胞中AnnexinⅡ蛋白与m RNA的表达;采用MTT法检测细胞增殖情况,计算细胞生长抑制率,采用Boyden chamber侵袭实验检测高浓度转染72 h细胞侵袭力情况。结果与空白对照组相比,各转染组细胞AnnexinⅡ蛋白和m RNA的表达均减弱,且差异均有统计学意义(P<0.05),且AnnexinⅡ蛋白及m RNA的表达随AnnexinⅡASODN浓度的增加及转染时间的延而减弱(P<0.05);AnnexinⅡASODN转染组细胞生长抑制率明显增加(P<0.05);细胞穿越Matrigel的细胞数交空白组减少,且差异均有统计学意义(P<0.05)。结论 AnnexinⅡASODN可有效抑制膀胱癌BIU-87细胞AnnexinⅡ蛋白及m RNA的表达,抑制BIU-87细胞的生长及侵袭力。

摘要：目的研究纤维连接蛋白激活paxillin后对人胃癌细胞侵袭力的影响,探讨抑制paxillin影响胃癌细胞侵袭力的机制。方法以递增浓度的纤维连接蛋白刺激人胃癌细胞株AGS,以免疫沉淀和蛋白质印迹法检测胃癌细胞内paxillin第118位酪氨酸(tyr-118)磷酸化的变化,同时以改良Boy-den小室法检测细胞侵袭力变化。设计合成paxillin siRNA并进行效果比较,观察siRNA抑制纤维连接蛋白促胃癌细胞内paxillin tyr-118磷酸化及细胞侵袭力的改变。结果纤维连接蛋白能促进AGS细胞paxillin tyr-118磷酸化的增强和胃癌细胞侵袭力(P<0.05),并在一定范围内具有剂量依赖性。siRNA干预后,胃癌细胞内paxillin tyr-118磷酸化及细胞侵袭力均有显著降低(P<0.05)。结论纤维连接蛋白可有效增强胃癌细胞的侵袭力,paxillin tyr-118磷酸化在此过程中起关键作用,使用paxillin siRNA可以抑制纤维连接蛋白促人胃癌细胞侵袭的作用。

摘要：目的构建IRF-4结合蛋白(IBP)基因RNA干扰(RNAi)的真核表达载体,观察其对MDA-MB-231乳腺癌细胞内IBP基因表达及细胞增殖和侵袭力的影响。方法以IBP为靶基因,以pcDNATM6.2-GW/EmGFPmiR质粒为载体,设计构建4对重组体,并进行DNA测序鉴定。重组载体转染MDA-MB-231细胞后,选择转染效果最好的1对重组体建立稳定转染的细胞株,经RT-PCR和Westernblot检测重组表达质粒对IBPmRNA和蛋白表达的抑制效果;MTT法检测对各组细胞生长的影响;细胞体外侵袭实验测定对侵袭力的影响。结果重组体测序结果与目的序列完全一致;重组体转染MDA-MB-231细胞后IBP的mRNA和蛋白表达降低约70%;IBP表达下调后乳腺癌细胞增殖减缓(P<0.05);同时体外侵袭实验显示转染后乳腺癌发生迁移细胞数明显低于未转染组和空质粒对照组[分别为(25±7)、(67±6)、(68±5),P<0.05]。结论下调IBP能有效降低乳腺癌细胞的增殖和侵袭力。

摘要：目的探讨头小畸形相关基因(abnormal spindle-like microcephaly associated,ASPM)对结肠癌细胞SW116和HCT116增殖、侵袭和凋亡的影响以及对β-catenin的调节作用。方法挑选ASPM含量较高的结肠癌细胞株HCT116和SW116。体外培养结肠癌细胞HCT116和SW116,设计siRNA-ASPM序列,转染细胞,分为阴性对照组(negative control,NC)组、siRNA1组和siRNA2组。采用CCK8法检测细胞增殖情况,Transwell实验检测细胞侵袭能力,Annexin V-FITC/PI细胞凋亡检测试剂盒检测细胞的凋亡率。qRT-PCR和Western blot法检测HCT116各组细胞中ASPM和β-catenin mRNA和蛋白的表达。挽救实验探究加入LiCl处理后,结肠癌细胞中ASPM对β-catenin表达的影响。结果siRNA-ASPM转染HCT116和SW116细胞后,siRNA组中ASPM表达量下降(P<0.05)。与NC组相比,siRNA1组、siRNA2组细胞的增殖和侵袭能力均降低,凋亡率升高;siRNA1组、siRNA2组中ASPM和β-catenin蛋白表达明显降低(P<0.05)。挽救实验结果证实,与siRNA-ASPM组相比,LiCl能部分恢复β-catenin mRNA的表达。结论沉默ASPM表达可抑制结肠癌细胞活力,降低细胞侵袭能力并诱导细胞凋亡,其机制可能与抑制Wnt/β-catenin信号通路有关。

摘要：用猪带绦虫卵攻击免疫猪和空白对照猪,以观察虫卵的侵袭力。动物实验历时 2a,设计使用 8～ 12日龄仔猪 10 2头,分 3次实验,共 2 2个组。我们用不同剂量、不同抗原成分的猪囊尾蚴细胞疫苗,以不同免疫次数,对使用对象动物(猪)进行免疫后,于不同免疫期,以不同量的猪带绦虫卵进行攻虫。尽管使用疫苗剂量的差别有 10 0倍,免疫期相距有 4倍,攻虫量相差至 15倍,而虫卵的效力都很显著。这种不是采用最佳免疫剂量、最佳免疫期、最佳攻虫剂量,却是更为紧密地接近于生猪实际所处的易受感染环境的免疫实验,才能检验出疫苗的免疫力和实用性。剖检出的猪囊尾蚴虫体的数量和状态,表面上看是猪带绦虫卵的攻虫效力,实则是猪囊尾蚴细胞灭活油乳剂疫苗免疫力的体现。只有用不同数量的虫卵攻击不同成分疫苗免疫猪的不同免疫期这样复杂的情况,才能够获得猪带绦虫卵真实的攻击力。猪带绦虫卵的侵袭力是不稳定的。

摘要：目的 观察肝素酶（hparinase,Hpa）小干扰RNA（small-interfering RNA,siRNA）对胰腺癌侵袭力的影响.方法 设计3条Hpa干扰靶序列：Hpa1-siRNA,Hpa2-siRNA,Hpa3-siRNA,稀释退火后分别与线性化pGenesil-1.1质粒表达载体的连接制成pGenesil1.1/Hpa1-siRNA、pGenesil1.1/Hpa2-siRNA、pGenesil1.1/Hpa3-siRNA重组质粒.然后将上述目的基因转染SW1990胰腺癌细胞,并设空白对照和阴性对照组.RT-PCR检测Hpa-mRNA表达,Western blot检测Hpa蛋白表达.Transwell小室检测SW1990细胞体外侵袭力.结果 Hpa-mRNA和Hpa蛋白在基因转染前后的表达,NC和HK组无明显差别,Hpa1-siRNA,Hpa2-siRNA,Hpa3-siRNA三组均明显下降,Hpa2-siRNA抑制效率优于Hpa1-siRNA和Hpa3-siRNA（P＜0.05）.Hpa2-siRNA明显抑制SW1990胰腺癌细胞侵袭力,抑制率均达42.6%.结论 Hpa2-siRNA是Hpa特异性干扰序列,对SW1990胰腺癌细胞侵袭力具有明显抑制作用.