摘要：在A型肉毒毒素保护性抗原基因初步表达的基础上 ,为提高表达水平 ,依据EMBL的DNA数据库中A型肉毒毒素基因全序列 ,重新设计上游引物 ,通过修饰基因片段N端 ,保持氨基酸序列不变 ,从已获得的A型肉毒毒素与靶细胞起结合作用的重链C端基因中 ,扩增小的突变基因 ,克隆入pGEM T载体进行测序 ,并以pBV2 2 0为表达载体构建重组表达质粒 ,在大肠杆菌中实现高效表达。结果表明 ,重组表达产物占全菌蛋白的 4 0 % ,酶联检测重组表达产物具有特异结合活性。A型肉毒毒素保护性抗原基因的高效表达 。

摘要：目的快速制备炭疽杆菌保护性抗原基因芯片探针。方法根据PubMed上公布的炭疽杆菌保护性抗原的DNA序列设计引物,扩增保护性抗原基因。利用酶切、AT克隆方法快速分析筛选出保护性抗原基因片段的重组子,从而制备成芯片探针。DNA自动分析仪对克隆片段进行序列测定,生物信息学软件对其基因序列进行分析。结果根据炭疽杆菌保护性抗原设计的引物,可以扩增出长2 205 bp的保护性抗原基因,经酶切、AT克隆方法筛选出约7个长度不一的片段,对其片段进行序列测定并进行Blast序列比对得知这些片段均属于炭疽杆菌保护性抗原基因。结论利用PCR扩增产物并结合酶切、AT克隆方法可以快速、简便地制备基因芯片探针。

摘要：本文应用基因工程技术,设计并化学合成了编码恶性疟原虫红内期保护性抗原MSA_1,MSA_2和RESA上多个免疫原性决定簇(含T、B细胞位点)以及来自白细胞介素-1(IL-1)和破伤风类毒素(TT)上的外源性T细胞激活位点的复合基因HGFC。全基因共由246个碱基对组成,编码一个75肽的复合抗原。合成后的基因克隆在M13mp18载体上,并经序列分析证实与设计完全一致。杂合基因合成和克隆的成功,为在基因水平上进行多价疟疾疫苗的蛋白质工程研究创造了条件。

摘要：目的构建一种以猴痘病毒(monkeypox virus,MPXV)优势保护性抗原为基础的多表位疫苗。方法从NCBI网站获取9种MPXV蛋白的GenBank登录ID及其氨基酸序列;通过ABCpred、NetCTL 1.2和IEDB的MHC-I Immunogenicity模块分别预测9种MPXV蛋白的B、CTL及Th细胞(HTL)表位;采用IEDB的MHC I Binding模块预测各CTL表位与特定MHC-I类分子的亲和力;使用VaxiJen v2.0、ToxinPred、AllerTOP v.2.0分别预测所得表位的抗原性、毒性及致敏性,从中筛选出具有最高抗原性但无细胞毒性和致敏性的表位,其中,CTL表位选择IC_(50)值<30 nmol/L者,HTL表位选择IFN-γ预测值最好者;将上述各表位与RS09、PADRE、Pam2Cys三种佐剂随机连接并添加6×H(组蛋白)尾巴以构建多表位疫苗,从各连接组合中筛选出具有最高抗原性但无细胞毒性和致敏性的组合;通过ExPASy的Protparam与ProtScale模块分析其理化性质;通过PSIPRED预测其二级结构;使用I-TASSER进行多表位疫苗的三级结构模拟,然后使用ModeRefiner和GalaxyRefiner将模拟出的三级结构进行优化;使用ZDOCK serves将优化后的多表位疫苗与TLR2、TLR4受体进行分子对接处理,以观察其相互作用情况与对接位点;采用C-ImmSim行免疫模拟对疫苗的免疫效果进行评估。结果该MPXV疫苗包括9个B细胞表位、23个CTL细胞表位和9个HTL表位,组合方式为RS09-PADRE-B-Pam2Cys-HTL-CTL-6×H,其抗原性得分为0.6828,共包含675个氨基酸残基,相对分子质量(M_r)为74431.30,理论pI值9.36,分子式为C_(3473)H_(5267)N_(867)O_(920)S_(17),热稳定性好,亲水性强;二级结构中α螺旋占46.82%,β折叠占18.37%,无规则卷曲占34.81%;可与TLR2、TLR4分子稳定结合,还可诱导较强的体液与细胞免疫应答。结论运用免疫信息学方法成功构建一种含多个优势抗原表位的MPXV疫苗,可能对猴痘病毒感染有预防作用。

摘要：布鲁菌病作为人兽共患病,给动物生产和人类公共卫生安全带来了极大的威胁。近年来的研究揭示,布鲁菌感染机体后,机体天然免疫和特异性免疫都起到了重要作用,尤其是细胞免疫更是清除胞内寄生菌的主力。此外,在感染过程中布鲁菌的外膜成分起到了重要作用,这些成分或使细菌逃避免疫识别,或在体外重组后引起宿主的强烈应答,对设计预防布鲁菌感染的疫苗具有重要的价值。论文针对近年来布鲁菌感染的免疫防御机制和其保护性抗原的研究进展进行了概述。

摘要：根据genbank序列,参照植物偏性密码子,设计合成适合植物表达的布鲁菌rplL基因和omp31基因。将携带植物表达优化序列的rplL基因片段与pBI-121载体相连接构建重组植物表达载体pBI121-rplL;将omp31基因与相应酶切并携带植物表达特征序列的pMD19-T6载体连接获得重组质粒,之后酶切获得携带植物表达优化序列的omp31基因片段,将其克隆入pBI-121载体,从而构建出带有不同目的片段的重组植物表达载体,为下一步检测基因在植物中的表达奠定基础。

摘要：本文设计并化学合成一条含有恶性疟原虫裂殖子表面抗原（ＭＳＡ１、ＭＳＡ２）、环子孢子蛋白（ＣＳＰ）、环状体感染红细胞表面抗原（ＲＥＳＡ）等不同生活史期的４种抗原，共６个表位的复合基因（ＰｆＣＭＲ）。该基因含２个粘性未端，共分８个片段，采用“缺口填补法”接成双链ＤＮＡ，再与噬菌体Ｍ１３ｍｐ１８分别经ＢａｍＨＩ、ＥｃｏＲＩ双酶切后回收、纯化、重组，并转化ＥｃｏｌｉＪｍ１０９，经ＰＣＲ和酶切鉴定，ＤＮＡ序列分析测定，证实阳性克隆子Ｍ１３ｍｐ１８－Ａ４与预设计基因顺序完全一致。

摘要：幽门螺杆菌是一种与慢性胃炎、胃溃疡及胃癌的发生密切相关的致病菌。疫苗是预防和控制传染病的有效途径,筛选出幽门螺杆菌保护性抗原是设计和构建幽门螺杆菌疫苗的关键。本文对与幽门螺杆菌粘附、定植及与其毒素相关的保护性抗原做一概述。

摘要：近年发展起来的反向疫苗学,是现代疫苗学研究的一种新策略,使疫苗学研究进入了一个新时期。这种以"序列-结构-功能"思想为依据,以免疫信息学、计算机预测设计以及高通量的各种组学(包括基因组学、转录本组学、蛋白质组学等)综合集成技术为核心的策略,能为各种病原体保护性抗原候选分子的发现提供一条新途径,可以提高疫苗筛选效率。

摘要：根据GenBank报道的志贺毒素A、B亚单位基因序列设计合成两对引物,以Ⅰ型痢疾志贺菌的基因组为模板经PCR扩增获得3条DNA序列,将其分别插入pMD18-T载体,测序证明所获得的3条序列为志贺毒素A、B亚单位基因及其串联片段,与GenBank中相应序列比较,同源性分别为99.5%、100%和99.8%。通过计算机软件对所推测的氨基酸序列进行了蛋白质参数分析。志贺毒素保护性抗原基因的获得为志贺毒素的免疫学研究准备了必要的材料。