摘要：目的设计、构建猪链球菌GDH真核表达载体并研究DNA疫苗免疫小鼠的体液免疫。方法在猪链球菌保护性抗原GDH基因5′末端引入人IL-2信号肽序列,通过PCR进行拼接,得到的融合DNA片段经过酶切克隆入质粒pcDNA3.0,构建核酸疫苗重组质粒pcDNA3.0-gdh。通过肌肉注射途径将重组质粒pcDNA3.0-gdh免疫小鼠,经ELASA实验和Western blot进行检验。结果构建的表达载体在小鼠体内表达出正确的目的蛋白,能诱导体液免疫。结论构建的DNA疫苗能够引起体液免疫,为研究猪链球菌核酸疫苗提供分子工具。

摘要：以短短小芽孢杆菌B15的总DNA为模板,利用PCR技术克隆到其细胞壁蛋白基因串联启动子和信号肽编码序列,测序分析后提交GenBank,登录号为AY956423。重新设计引物扩增该片段并在PCR产物两侧引入BamHⅠ和PstⅠ酶切位点,将PCR产物双酶切后克隆至穿梭载体pP43NMK的相应位点构建分泌表达载体pP15MK,插入片段置于该载体中mpd基因的上游,并使信号肽编码序列与去除了自身信号肽编码序列的mpd基因阅读框恰好融合。将pP15MK导入枯草杆菌构建表达菌株1A751(pP15MK),在短短小芽孢杆菌启动子和信号肽元件的带动下,mpd基因能够在表达菌株的对数生长期和稳定期持续性高效分泌表达,表达产物结合在细胞膜上;发酵液在48h酶活达到最高值7.79U/mL,是出发菌株邻单胞菌M6表达量的8.1倍。

摘要：通过计算机辅助分析 ,发现在耐热碱性磷酸酯酶 (简称FD TAP)的N端存在 2 6个氨基酸的信号肽序列。但一般信号肽切点并非是完全专一的 ,所以利用基因工程手段将FD TAP的N端分别缺失 2 4、2 5、2 6和 2 7个氨基酸 ,得到了N端分别缺失 2 4、2 5、2 6和 2 7个氨基酸的克隆子 pTAPND2 4、pTAPND2 5、pTAPND2 6和 pTAPND2 7。考虑到这样的克隆子其翻译起始区所形成的能量较低结构稳定的二级结构可能阻碍基因的表达 ,所以在保证氨基酸序列不变的前提下另外设计了 4个引物 ,得到了二级结构能量大大提高的 4个克隆子pTAPND2 4C、pTAP ND2 5C、pTAPND2 6C和 pTAPND2 7C。结果表明pTAPND2 4、pTAPND2 5和 pTAPND2 7没有表达 ;pTAPND2 6和pTAPND2 4C的表达量较低 ,pTAPND2 5C、pTAPND2 6C和pTAPND2 7C的表达量较高。通过测定 pTAPND2 5C、pTAPND2 6C和pTAPND2 7C的表达蛋白TAPND2 5、TAPND2 6和TAPND2 7的比活和热稳定性 ,发现无论比活和热稳定性TAPND2 7明显比TAPND2 5和TAPND2 6高且比野生型FD TAP略高。

摘要：为了提升蛋白质信号肽及其切割位点预测精度,有效区分3种不同类型的信号肽,提出基于位置特异性打分矩阵(PSSM)和同源检测迭代的隐马尔科夫(HMM)文件的深度学习预测方法。设计基于自注意力机制的神经网络模型用于信号肽预测,并使用基于知识迁移的模型集成方法提升预测效果。设计基于门控循环单元(GRU)网络的条件随机场(CRF)来预测信号肽切割位点,并集成领域规则方法提升预测能力。实验结果表明,该文方法对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的Sec/SPI、Sec/SPII与Tat/SPI信号肽预测任务的平均马修斯相关系数(MCC)为0.962。该文方法对革兰氏阴性菌和革兰氏阳性菌的Sec/SPI、Sec/SPII与Tat/SPI信号肽切割位点预测任务的平均召回率和准确率分别为0.698和0.662。在部分信号肽样本上,该文方法能正确预测SignalP 5.0方法预测错误的样本,2种方法在切割位点的预测上存在着一定的互补性。

摘要：根据GenBank上发表的犬瘟热病毒（CDV）融合蛋白基因（F）序列，设计引物扩增F蛋白部分信号肽区，片段长369bp。对2005年～2007年收集的犬瘟热阳性的水貂、狐、貉实质脏器、血液、尿液等样品进行扩增，获得了13个CDVF蛋白部分信号肽区基因片段。序列分析发现，CDV野毒F蛋白该区段核苷酸与氨基酸序列与目前我国使用疫苗株CDV，及其他国内外疫苗株比较存在较大差异，与CDV3对应区段的核苷酸同源性在80．7％～83．2％之间，而推导的对应氨基酸序列同源性只有64．8％～71．3％。部分信号肽区的氨基酸疏水性分析，推测其调控功能也发生变化，本研究为CDV遗传变异和分子流行病学提供理论数据。

摘要：该研究旨在筛选不同的分泌型信号肽以提高肝细胞生长因子(hepatocyte growth factor,HGF)在中国仓鼠卵巢细胞(Chinese hamster ovary cell,CHO)中的表达。通过PCR方法将5种不同的分泌型信号肽代替HGF自身信号肽,分别构建了表达质粒并转化哺乳动物细胞CHO,挑选高表达克隆。采用qPCR方法检测表达过程中HGF转录水平差异,Western blot检测CHO培养基中HGF的累积差异,犬肾细胞(Madin-Daby canine kidney cells,MDCK cells)离散实验初步验证HGF的活性。研究结果表明,不同的分泌型信号肽对CHO表达HGF过程中的转录水平没有影响,但明显改变HGF在培养基中的累积,对分泌的HGF活性没有影响。综上所述,合适的分泌型信号肽促进CHO分泌外源蛋白质。

摘要：利用菜豆根瘤菌Rhizobium etli CFN42全基因组测序结果,结合计算机技术和生物信息学分析方法,对菜豆根瘤菌蛋白质组中的分泌蛋白进行预测和分析,以便更深入地了解共生固氮的分子机制。经过分析发现,在该根瘤菌5 963个蛋白质中,具有信号肽的分泌蛋白332个,占总数的5.4%主要涉及底物转运、物质代谢和信号转导等方面。在有功能描述的186个分泌蛋白中,识别了Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ型分泌系统和丝氨酸蛋白酶,这些蛋白质可能参与了根瘤菌对宿主植物的侵染,是两者分子对话的关键参与者;在假定蛋白中,通过结构域分析,发现了SH3b、BA14K和EFh结构域,含有这些结构域的分泌蛋白可能参与了根瘤信号转导途径。在根瘤菌共生结瘤过程中,分泌蛋白发挥了重要作用。

摘要：细胞外蛋白质和细胞膜表面受体在生物体个体发育、生理功能的发挥及各种病理过程的演进中起着重要作用。信号肽捕获系统是基于信号肽学说建立起来的一种功能性基因克隆方法 ,该方法可以专一性地克隆编码分泌型蛋白质以及I型、II型跨膜蛋白质分子的编码基因。本文对已发表的信号肽捕获系统及其工作原理、设计思路作一介绍。

摘要：为提高信号肽以及识别信号肽拼接精度,在结构融合度特征的基础上,构建氨基酸综合替代矩阵和马尔科夫转移矩阵,对不分泌/极低分泌的信号肽序列进行人工调整和优化设计。结果表明:通过寻找信号肽中不同位置氨基酸的偏向性选取趋势,能够确定影响蛋白质分泌水平的关键氨基酸,提高了外源蛋白质高分泌表达信号肽拼接准确度。

摘要：β干扰素(IFN-β)具有重要的抗病毒生物学功能,为了研究从江香猪源IFN-β生物活性,试验设计1对扩增切除信号肽序列的香猪源IFN-β编码区引物,以pUCm-T-IFN-β为模板进行PCR扩增,经菌液PCR筛选、测序鉴定后,获得重组质粒pColdⅠ-CJ-poIFN-β,将其转入大肠埃希菌BL21(DE3)感受态细胞中,IPTG诱导表达后用SDS-PAGE蛋白电泳,Western blot方法对重组表达蛋白进行分析。结果:切除信号肽序列的从江香猪源IFN-β序列编码区长为498 bp,表明该片段已正确插入原核表达质粒pColdⅠ中;SDS-PAGE蛋白电泳在预期位置未见蛋白条带,但Western blot检测显示带His标签的重组表达蛋白能被His单抗识别,显色后条带为18.26 ku,与预期大小相符。结果显示:试验成功构建了携带切除信号肽序列的香猪源IFN-β基因的原核表达质粒,但重组蛋白表达量极低,试验结果为进一步研究从江香猪源-β干扰素的生物活性奠定基础。