摘要：根据人神经营养素 3(Humanneurotrohin 3,hNT 3)的基因序列 ,把编码氨基酸的密码子转换成毕赤酵母(Pichiapastoris)偏爱的形式 ,设计了 10条 36～ 5 9nt的寡聚核苷酸引物 ,通过 5次连续PCR反应 ,获得了人工合成的NT 3cDNA片段 (简称NT 3b基因 )。将合成的NT 3b基因克隆到pPIC9K质粒上 ,获得重组表达载体pPIC9K NT 3b。将重组表达载体pPIC9K NT 3b和pPIC9K hNT 3分别电击转化宿主毕赤酵母GS115菌株 ,经筛选得到重组转化子。不同转化子经甲醇诱导 ,表达产物进行SDS PAGE检测、Westernblot检测和ELISA分析 ,结果表明 ,NT 3b基因和hNT 3基因成功获得分泌性表达 ,从整体水平上 ,使用偏爱密码子的NT 3b基因在毕赤酵母GS115菌株中的表达明显优越于hNT 3基因 (x2 =4 .334,P <0 .0 5 ) ,表达量在诱导后 72～ 96h最高 ,达到 31mg L左右。

摘要：根据GenBank报道的基质金属蛋白酶组织抑制剂-2(TIMP-2)氨基酸序列和毕赤酵母偏爱密码子设计,通过化学方法合成得到适合在毕赤酵母中表达的目的TIMP-2基因序列,并将其克隆到质粒pPIC9中,构建了pPIC9-T2表达载体,PCR鉴定及测序结果表明得到了正确的TIMP-2基因序列。

摘要：观察人工设计葛佬素的cDNA序列表达产物是否具有抗菌及中和内毒素作用。方法：采用统计学方法，统计同种族蛋白质的cDNA序列氨基酸的偏爱密码子，并以此为基础设计葛佬素的cDNA序列，将合成的葛佬素cDNA插入真核细胞表达载体pCDSI中后转染COS-7细胞，对转染的COS-7细胞上清进行杀菌及中和内毒素活性的检测。