摘要：流感病毒和新型冠状病毒(SARS-CoV-2)是近年来频繁引发呼吸道疾病的主要病原,其引起的黏膜免疫应答对于病毒的控制和清除至关重要.目前对于SARS-CoV-2感染后肺部黏膜免疫应答的具体调控机制及其与流感感染的区别尚不清楚我们通过原位杂交-多重免疫荧光染色技术及空间转录组学揭示了流感病毒和SARS-CoV-2感染过程中局部免疫应答的动态变化过程,并发现相比于流感病毒感染,SARS-CoV-2感染早期肺部黏膜会更加快速地形成诱导性支气管相关淋巴组织(iBALT)结构并活化B1细胞产生较高水平IgM和IgA,可能在抗病毒感染及iBALT的形成中发挥重要作用.同时,SARS-CoV-2及表达其S蛋白的假病毒感染均能够促进小鼠和人的B1细胞的活化.将表达S蛋白的腺病毒疫苗AdC7-S对小鼠进行免疫后,可以成功诱导出包含B1细胞的iBALT,并在病毒感染中发挥保护作用.本研究揭示了呼吸道病毒引起的肺脏黏膜免疫动态应答过程,并阐明了SARS-CoV-2感染早期B1细胞的活化特点及免疫保护作用,为揭示新发呼吸道传染病的保护性应答机制及疫苗设计提供了理论基础.

摘要：目的　构建表达肠出血性大肠杆菌 (EHEC)O1 57∶H7志贺毒素Ⅱ结合亚单位 (Stx2B)与紧密黏附素C 端免疫保护性片段 (IntiminC30 0 )的融合蛋白 (Stx2B IntiminC30 0 ) ,并观察其免疫保护作用。方法　设计引物采用PCR法自EHECO1 57∶H7基因组扩增Stx2B的编码基因stx2b ,T A克隆后在前期已构建原核表达质粒 pET 2 8a( + ) eaeC30 0的基础上构建融合基因表达质粒 pET 2 8a( + ) stx2b eaeC30 0 ,经测序鉴定后转化E .coliBL2 1 (DE3) ,IPTG诱导表达 ,PAGE检测 ;通过包涵体洗涤与阴离子柱层析纯化 ,获得目的蛋白Stx2B IntiminC30 0 ,以Al(OH ) 3为佐剂皮下注射免疫BALB/c小鼠 ,再以EHECO1 57∶H7超声破菌液腹腔注射免疫后的小鼠 ,观察攻毒保护效果。结果　PCR法自EHECO1 57∶H7基因组扩增出了约 2 90bp的目的片段 ;原核表达质粒 pET 2 8a( + ) stx2b eaeC30 0经酶切及测序鉴定与设计序列一致。转化E .coliBL2 1 (DE3)后IPTG诱导目的蛋白表达率约 2 5% ;PAGE初步测定目的蛋白的相对分子质量 (Mr)约 4 3× 1 0 3,破菌后电泳证实目的蛋白以包涵体形式表达。纯化后目的蛋白Stx2B IntiminC30 0的纯度达 75% ,免疫BALB/c小鼠后血清特异性抗体阳转率及抗体效价均显著增高 ,能够抵御致死剂量EHECO1 57∶H7超声破菌?

摘要：从疟原虫的不同发育时期、不同的疫苗成份和宿主的遗传基因限制性等方面 ,深入研究抗疟疾疫苗 .作用于红细胞前期的疟疾疫苗主要是抑制疟疾的临床发作 ,控制疟疾的传播 ;作用于红细胞期的疟疾疫苗诱导宿主体液免疫系统 ,产生特异性抗体 ,抑制疟原虫侵入和感染红细胞 ,达到减少疟原虫虫荷 ,降低疟疾的发病率和死亡率 .作用于疟原虫有性生殖时期 ,控制疟疾传播的疟疾疫苗 ,其意义在于控制一个地区疟原虫的感染率和疟疾发病率 ,但对已感染疟原虫个体的免疫保护作用意义不大 .在设计疟疾疫苗的过程中 ,必须克服不同个体的遗传基因限制性问题 .由于疟原虫生活史的复杂性 ,同时也必须考虑到疟原虫不同发育阶段抗原成份的复杂性 .

摘要：合成肽疫苗能克服常规疫苗的缺点,很早就被认为是动物传染病预防用的终极疫苗。然而多年的研究结果表明,合成肽疫苗免疫动物后所起的免疫保护作用并没有象人们当初设想的那样理想,同时证明了构建的合成肽疫苗的抗原性及其免疫原性要受到其自身组成及宿主免疫系统等多种因素的影响。在诱导机体产生免疫的过程中,单一的中和抗原表位是远远不够的,增加中和抗原表位的数目和引入细胞抗原表位将起到必不可少的辅助协同作用。若想提高合成肽疫苗的免疫效果,在搞清合成肽疫苗的免疫机理并在如何利用有限的抗原表位诱导强有力的免疫保护作用等方面需要做进一步深入地研究。

摘要：目的研究廉价有效的抗弓形虫核酸疫苗,以用于人类和畜类弓形虫病的防治。方法收集、纯化RH株弓形虫速殖子,提取基因组DNA;根据ROP2基因序列,设计合成ROP2基因引物,应用PCR、酶切、连接、测序等技术,扩增ROP2基因片段,克隆于真核表达载体pc-DNA3质粒中,制备抗弓形虫pc-DNA3-ROP2核酸疫苗。应用该疫苗免疫小鼠,通过ELISA检测血清抗体,Western blot鉴定该疫苗的免疫原性;应用RH株弓形虫进行动物攻击实验,评价其安全性及免疫保护性。结果以弓形虫基因组DNA为模板,PCR扩增出1.7 kb ROP2基因片段,克隆于pc-DNA3质粒中,成功构建了pc-DNA3-ROP2重组质粒。测序结果显示,重组质粒包含了ROP2蛋白基因读码框内的完整序列,能完整表达ROP2的抗原蛋白。应用该疫苗免疫小鼠,能诱导产生强烈的细胞、体液免疫反应,使实验组小鼠攻虫感染后的存活时间明显延长,攻虫感染192 h后的存活率为77.8%,空质粒及PBS对照组存活率为0,差异有统计学意义(P<0.001);实验全程免疫小鼠未发生毒性及异常反应。结论该核酸疫苗具有很强的免疫原性,安全可靠,能诱导小鼠产生良好的免疫保护作用,具有很好的开发应用价值。

摘要：目的研究弓形虫核酸疫苗,以用于弓形虫病的防治。方法根据ROP2基因序列,设计合成能表达ROP2完整蛋白基因的扩增引物,扩增ROP2靶基因并克隆于PUCm-T载体,然后再亚克隆于真核表达载体pc-DNA3质粒中,制备弓形虫pc-DNA3-ROP2核酸疫苗;应用裸pc-DNA3-ROP2免疫小鼠,通过免疫学指标的检测,评价小鼠的免疫应答反应,最后应用弓形虫RH株攻击实验,评价出该疫苗的有效保护率、安全性和在人类及畜类的应用价值。结果以ROP2基因为模板,PCR扩增出1.7kbDNA条带,与预想结果一致;将扩增DNA回收并成功的克隆了ROP2(PUCm-T-ROP2),然后亚克隆并构建了pc-DNA-ROP2重组体,通过酶切、PCR扩增和基因测序证明亚克隆的重组子正确,ROP2扩增基因包含了ROP2蛋白基因读码框内的完整序列;在应用疫苗免疫接种小鼠结果显示,疫苗接种能使小鼠产生强烈的细胞、体液免疫反应;攻击实验结果显示,实验组小鼠的存活时间明显延长,并且开始死亡时间明显延迟(P<0.001),实验组9只小鼠中有1只长期存活;在实验的整个过程中,没有发现小鼠对免疫接种的毒性和异常反应。结论该疫苗免疫原作用强,具有很好的开发应用价值,目前可在动物群体中试验应用。