摘要：为了对疑似禽博尔纳病毒感染病例进行确诊,并了解鹦鹉源禽博尔纳病毒毒株的流行特点,本试验设计合成1对特异性引物,对疑似感染禽博尔纳病毒而死亡的鹦鹉进行检测,并设计7对首尾重叠的引物对其中1株确诊的博尔纳病毒全基因进行RT-PCR扩增、测序,应用DNAStar和MEGA6.06软件将本次获得的PaBV-4与GenBank上公布的PaBV序列进行同源性和遗传进化分析。结果显示,死亡的10只鹦鹉中,有5只感染PaBV-4,1只感染PaBV-5。选取其中1份PaBV-4组织样品做全基因测序和序列分析,结果显示PaBV-4基因组全长8915 nt,编码6种蛋白,与NM20分离株核苷酸相似性最高(99.6%),与6758分离株氨基酸相似性最高(99.8%);遗传进化分析显示,与PaBV-4各分离株M14、AG5、6758亲缘关系最近,同属一个小的分支,其次是NM01,与PaBV-5各分离株亲缘关系最远。

摘要：根据GenBank中猪圆环病毒2型(PCV2)全基因序列设计引物,从疑似患断奶仔猪多系统衰竭综合症(PMWS)的仔猪组织病料中分别扩增出PCV2的全基因,将全基因克隆并测序。根据PCV2 ORF2序列设计引物,扩增HN01株ORF2基因序列,克隆入真核表达载体pEGFP-N1。通过脂质体介导法转染细胞,观察表达产物的荧光情况。结果表明,成功从疑似PMWS病料中扩增出PCV2全基因序列,三者间同源性很高,与GenBank中登录的中国分离株核苷酸序列同源性较高,而与国外分离株的同源性较低。所构建的真核质粒pEGFP-N1-ORF2结构正确,能够在PK-15细胞中表达。

摘要：从患病鹅的病料中分离鉴定了2株鹅细小病毒(Goose parvovirus,GPV),命名为CH株和LS株。参考NCBI中多株GPV全基因序列,分段设计5对引物,对分离株的全基因序列进行PCR扩增、测序、拼接,并使用生物学软件对全基因序列进行比对和分析。遗传进化分析显示,CH株与LS株处于同一分支且相邻,表明具有较近的亲缘关系。由此推测,两株病毒可能起源于同一原始毒株。

摘要：为了评估辽宁地区鸡传染性贫血病毒(Chicken anemia virus,CAV)的变异情况及致病能力,试验提取鸡传染性贫血发病鸡肝脏总DNA,依据GenBank中德国株CUX-1(M55918.1)基因序列设计3对特异性引物进行PCR扩增、测序及序列分析;然后对鸡传染性贫血发病鸡肝脏进行常规处理,取菌液接种1日龄SPF雏鸡,观察其是否具有致病性。结果表明:成功分离出1株CAV(DD-2016),该毒株基因编码区全长为2 297 bp,共编码764个氨基酸,与GenBank中南韩株South Kores(JF507715.1)核苷酸序列的同源性最高(99.17%);该分离株能引起SPF雏鸡发生贫血、皮下出血、胸腺萎缩、骨髓黄化等典型病理学损伤。说明辽宁地区目前流行毒株基因发生了较大变异且致病力较强。

摘要：为了解鸡肾型传染性支气管炎病毒陕西流行株的分子生物学特征，参考DY07株全基因核苷酸序列设计22对引物，采用RT PCR方法对西北农林科技大学动物医学院禽病研究室分离的1株肾型IBV陕西分离株CK/CH/Shaanxi/2009/H09的全基因进行分段扩增并测序，将测序成功的各序列依次拼接，得到全基因序列后进行序列比对分析。研究结果表明，该分离株基因组全长27 675 bp，共有10个开放阅读框，其基因排序为5′cap Replicase S 3a 3b 3c M 5a 5b N poly（A）3′，纤突蛋白裂解位点为到536RRFRR540， 3a、5a和N基因的大小与参考毒株相比是保守的，但编码其他蛋白的基因长度存在差异；同源性分析结果显示，该毒株与48个参考毒株的同源性为85.2%~93.5%；系统进化树分析结果显示，该毒株与中国分离株ck/CH/LDL/091022、YX10株和DY07 株的亲缘关系较近，同属于中国近年来主要流行的血清型毒株，但在基因水平上已经产生一定程度的变异。

摘要：流行病学调查表明,水貂阿留申病是严重危害水貂养殖业的3大疫病之首。迄今为止,尚未开发出能有效防控水貂阿留申病的疫苗。本试验根据GenBank上公布的不同水貂阿留申病毒(ADV)毒株的基因序列,设计并合成了12对引物,对吉林农业大学经济动物疾病实验室已分离和鉴定且具有致病性的5株水貂阿留申病毒野毒株进行全基因测序,并将测序结果与ADV参考毒株及细小病毒亚科各属代表种的全基因序列进行核苷酸序列分析及同源性比较。结果表明,所分离5株病毒基因组大小分别为4 537、4 539、4 562、4 572、4 569bp。同源性分析结果显示,分离的5株ADV毒株与欧美毒株ADV-G、ADVUtahl、ADV-SL3的核苷酸同源性最低为92.8%,最高为97.6%。通过DNA Star软件对5株ADV的VP2核苷酸推导的氨基酸序列分析可知,所分离的5个毒株中,有61个氨基酸发生突变。ADV-DL124和ADV-DL125与ADV-G株相同,在26-35位处缺失9个氨基酸,同时在36位缺失1个氨基酸(甘氨酸)。对这些改变位点的研究可为水貂阿留申病的致病机理及水貂阿留申病基因疫苗的构建积累资料。

摘要：参照Genbank收录猪圆环病毒（porcine circovirus,PCV）1、2型序列,设计两对特异性引物,分别扩增猪圆环病毒1型和2型四川分离株（PCV1-YA1株和PCV2-SC株）全基因组,获得了预期目标大小一致扩增产物,分别将其克隆于PMD18-T载体,分别命名为PMD18-T-PCV1-YA与PMD18-T-PCV2-SC。经酶切鉴定和序列测定证实,成功克隆了PCV1-YA1株1759bp和PCV2-SC株1767 bp的全基因组序列。所得序列与GenBank中的国内外其它PCV1和PCV2毒株进行比较分析,其同源性分别达到98.8%-99.9%与93.6%-98.6%;而PCV1-YA1株和PCV2-SC株之间的同源性则仅为69.2%,进一步分析两个毒株的主要阅读框架,毒株间ORF1核苷酸序列及推导的氨基酸同源性均为85.3%,而ORF2的核苷酸序列及推导的氨基酸同源性分别为66%和65.2%。推导显示两毒株之间ORF1编码产物疏水性区域分布有相似之处,而ORF2编码产物的跨膜区存在差异。

摘要：根据GerlBank中牛干扰素-α（IFN-α）基因序列（A00145），设计并合成了一对引物，以梅花鹿肝脏组织DNA为模板，采用PCR技术扩增梅花鹿IFN—a全基因，并克隆、测序。结果表明，梅花鹿IFN—α基因全长570bp，编码189个氨基酸，含有6个与二硫键形成有关的半胱氨酸；序列比较分析发现，

摘要：2017年4月,山东省某鹦鹉场发生疑似喙羽病感染,鹦鹉出现异形喙和羽毛脱落,甚至急性猝死。目的:了解该地区鹦鹉喙羽病病毒( Psittacine beak and feather disease,PBFD )的流行现状、分子生物学特征和遗传变异规律,为PBFDV的防控提供参考依据。方法:收集怀疑有喙羽病病毒( PBFDV )感染的非洲灰鹦鹉的新鲜肝脏组织和羽毛样本,根据PBFDV全基因组序列设计特异性引物,从患病灰鹦鹉肝脏和羽毛组织中扩增PBFDV的全基因组序列,克隆到pMD19-T载体中,经测序获得PBFDV全长cDNA序列,利用DNAstar软件对全基因组进行遗传变异分析。由于目前尚未发现适合PBFDV繁殖的培养细胞或胚胎,我们尝试使用患病鹦鹉的羽毛研磨液注入7日龄SPF鸡胚的卵黄膜中。结果:分离到3株PBFDV ( GenBank登录号:MH279594,MH180298和MH190788 ),全基因组序列测序后,发现它们彼此具有93.3%—99.9%的相似性,并且它们也与GenBank中的一些参考序列具有86.1%—98.8%的相似性。卵黄囊注射病毒液后胚胎发育变缓,48—72 h内鸡胚死亡,全身出血。接着我们收集鸡胚的肝组织的研磨液在鸡胚上传代至第5代,均能使鸡胚死亡。提取来自每一代鸡胚肝组织的DNA都可以通过PCR扩增出PBFDV的目的条带。结论:以上实验结果表明,成功从患病鹦鹉体内克隆出PBFDV的全基因,并完成了序列分析,同时PBFDV接种鸡胚卵黄膜后成功复制。我们针对在该地区新出现的病毒从分子方面进行相关研究,分析其遗传变异特征,以研究该病毒与其他地区喙羽病病毒之间的亲缘关系,这些数据为研究该病毒的遗传变异和流行病学提供分子生物学依据。

摘要：旨在了解北京地区猪圆环病毒3型(porcine circovirus type 3,PCV3)的流行现状、分子生物学特征和遗传变异规律,为PCV3的防控提供参考依据。采集北京地区规模化养殖场73份临床表现为繁殖障碍和呼吸系统疾病的组织样品,对其中的PCV3进行检测和测序。根据PCV3全基因组序列设计3对特异性引物,从患PDNS的断奶仔猪内脏组织中扩增PCV3全基因序列片段,克隆到pMD19-T载体中,经测序、拼接获得PCV3全长cDNA序列,利用DNAStar和DNAMAN生物软件对全基因组进行遗传变异分析。结果:北京地区PCV3感染率为30.1%(22/73),PCV3全基因组长2 000bp,GenBank序列登录号为MG546667,将该病毒命名为PCV3/CN/BJ-YH2016。其基因组有3个开放阅读框(ORF),其中两个ORF编码的蛋白与圆环病毒的复制相关蛋白(replication-associated protein,Rep)和衣壳蛋白(capsid protein,Cap)同源。PCV3/CN/BJ-YH2016与NCBI上30株PCV3基因组序列相似性为98.6%~99.3%,Rep蛋白氨基酸序列与美国毒株PCV3-US/MO2015(KX778720)的相似性最高(为100%),与中国毒株PCV3/CN/Guangdong-SG1/2016(MF589105)相似性最低(为95%),有16个氨基酸变异,全部集中在5-23位氨基酸。Cap蛋白氨基酸序列与美国毒株2164(KX458235)的相似性为100%,与其他毒株均有1~4个氨基酸发生变异,其中与PCV3-US/MO2015毒株相比变异位点分别位于24、26、56、100aa。以上试验结果表明,成功从患断奶仔猪多系统衰竭综合征仔猪体内克隆了PCV3全基因,并完成了序列分析,这些数据将为研究这种新型病毒——PCV3的遗传变异和流行病学特征提供分子生物学依据。