摘要：目的：制备用于检测小鼠胚胎早期Ucp2基因表达的地高辛标记的特异性RNA探针。方法：提取小鼠胚胎脑组织总RNA,设计引物,通过RT-PCR方法获取Ucp2基因片段,将其克隆到pGEM-T载体。分别利用Sp6、T7和Ucp2特异性引物,PCR扩增获得转录模板,通过Sp6及T7 RNA聚合酶,获得地高辛标记的正义、反义Ucp2 RNA原位杂交探针。检测标记探针的效价后,通过全胚胎原位杂交分析制备探针的特异性和杂交效果。结果：成功获得Ucp2基因正义、反义探针,反义探针能高效灵敏检测到Ucp2基因在小鼠胚胎Ed9.5、Ed10.5神经系统呈现高表达,而正义探针未能检测到表达信号。结论：成功制备了特异高效的地高辛标记Ucp2 RNA原位杂交探针,为进一步研究Ucp2基因在小鼠胚胎组织中的表达,尤其在神经组织的定位奠定基础。

摘要：目的：用band3基因的反义 mRNA探针进行斑马鱼全胚胎原位杂交，检测 band3基因在野生型Tüebingen斑马鱼胚胎发育过程中的表达。方法：Trizol法提取斑马鱼胚胎总RNA并设计特异性引物，采用RT-PCR法扩增band3基因cDNA编码区片段；通过基因重组技术构建PBSK-band3重组质粒，用BamHⅠ酶切得到线性化PBSK-band3；以T7 RNA聚合酶转录合成反义地高辛标记的band3 RNA探针，用全胚胎原位杂交法检测band3基因在斑马鱼胚胎早期的表达情况。结果：成功克隆band3基因片段，构建PBSK-band3重组质粒；经体外转录获得地高辛标记的反义band3 mRNA探针，原位杂交后检测证实band3基因在斑马鱼胚胎早期发育过程中间细胞群（ICM）和主动脉性腺中肾区（AGM）呈现高表达。结论：地高辛标记的反义band3 mRNA探针可检测到斑马鱼胚胎中band3基因的定位表达。