摘要：目的对带有信号序列的日本血吸虫虫卵毛蚴基因的全长cdna序列进行分析。方法根据日本血吸虫虫卵毛蚴中带信号序列的cdna片段序列设计合成基因特异性引物。以虫卵的第一链全长cdna为模板,采用套式PCR,快速扩增带信号序列的虫卵毛蚴cdna的5′、3′末端片段,将特异性扩增片段进行TA克隆与序列分析。将每个带信号序列的虫卵毛蚴cdna片段序列与其5′、3′末端片段序列进行比对和拼接,构建每个带信号序列的虫卵毛蚴基因的完整全长cdna序列,对部分带信号序列虫卵毛蚴基因的信号序列所对应的基因组序列结构进行分析。结果本研究分析了30个带有信号序列的cdna片段,其中16个片段的5′、3′末端cdna序列被成功扩增,并测定了它们的DNA序列,通过序列比对和拼接,获得了该16个虫卵毛蚴基因的全长cdna序列。对开放阅读框演绎的氨基酸序列进行分析,发现基因SjP4001与SjP1531的信号肽序列完全相同,而基因SjP3742和SjP1183的信号肽氨基酸序列甚为相似,从而进一步证明不同的基因可拥有相同或相似的信号肽。基因组序列分析表明,基因SjP1183的信号肽基因序列与成熟肽基因序列通过交替拼接(alternativesplicing)方式进行拼接;而基因SjP4001、SjP1531、SjP3742的信号肽基因序列与成熟肽基因序列之间可能是通过转移拼接的方式进行拼接。结论确定了16个带有信号序列的虫卵毛蚴基因的全长cdna序列,虫卵毛蚴基因可通过交替拼接方式或转移拼接方式获得信号肽序列。

摘要：根据所有已知 G 蛋白β亚基的保守区设计简并性寡核苷酸引物,通过3′-和5′-RACE方法结合 RT-PCR 技术,从麦长管蚜中分离全长 cdna 序列,并用半定量 RT-PCR 的方法研究基因在不同组织的转录水平。克隆的β亚基序列全长1336 bp,编码区1023 bp,编码340个aa,推测的分子量为37.27 kDa,等电点为5.56。GenBank BLAST 结果表明,β亚基与冈比亚蚊 Anopheles gambiae 的氨基酸序列同源性最高,为93%,与果蝇 Drosophila melanogaster β_1的同源性为90%,与线虫 Caenorhabditis efegans 的同源性为85%,与哺乳动物β_2的同源性为80%。该亚基在麦蚜头、胸和腹部都能表达,但在头部的表达量最高,推测该种类型的β亚基可能参与多种信号传导途径的调控。该基因首次从麦蚜中克隆到,命名为 SavGβ,在 GenBank中的登录号为 AY205294。

摘要：根据已报道的人源蓝氏贾第虫病毒序列设计了互相重叠的6对特异性引物,以犬贾第虫(长春株)纯培养滋养体总核酸为模板进行RT-PCR。PCR产物连接到pMD18-T载体进行测序,通过BLAST在GenBank进行同源性搜索,并用DNAMAN分子生物学软件进行分析。结果测得我国犬贾第虫病毒(长春株)基因组全长为6 276bp(DQ238861),编码1个有887个氨基酸残基的衣壳蛋白和1 056个氨基酸残基的融合蛋白,这2个阅读框被-1核糖体移码框分开,重叠处有220 nt。基因组中G+C占49.62%。其序列与国外报道的人源蓝氏贾第虫病毒(L13218)序列同源性为94.62%,编码的氨基酸同源性为93.50%;与国内人源蓝氏贾第虫病毒(AF525216)序列同源性为98.88%,编码的氨基酸同源性为98.30%。

摘要：捻转血矛线虫ZJ株疫苗候选抗原H11亚型基因H11-4的克隆及序列分析/段丽君（浙江大学动物科学学院，浙江杭州310058），周前进，张红丽…//中国兽医学报.-2013，33（3）.-381～385 微粒体氨肽酶H11天然提取物是目前捻转血矛线虫（Haemonchus contortus）防治研究中最好的疫苗候选抗原之一，但其重组形式均不能提供有效的免疫保护效果；同时报道H11蛋白存在多种亚型，推测其某种亚型或亚型组合可能在天然提取物参与免疫保护中起了关键作用。本试验参考NCBI公布的*** H11-4基因序列，设计2对特异性引物，以*** ZJ株总RNA为模板，利用RT-PCR技术分段扩增出该基因的部分片段，并进行T-A克隆。测序正确后，利用含有不同片段的阳性质粒经BamHⅠ/NcoⅠ消化，连接后获得H11-4基因的全长cdna序列。测序结果显示成功获得H11-4基因，开放阅读框大小为2916bp，与NCBI中公布的核苷酸序列同源性为97.8%，氨基酸序列同源性为97.6%。生物信息学分析，已获得的H11-4与H11（H11-3）亚型氨基酸序列高度同源，且具有保守糖基化位点、相对保守的跨膜区与微粒体氨肽酶活性中心锌指基序。为进一步分析H11天然提取物各亚型在参与免疫保护的机制和角色分工奠定了基础。

摘要：运用SMART技术构建了悦目金蛛丝腺SMARTRACEcdna文库。经检测,文库所含全长cdna的长度主要集中在500bp～2000bp之间;把双链cdna通过T/A克隆、随机挑选阳性克隆并测序后,得到1条752bp的全长cdna序列。以该文库为模板,用依据这条全长cdna序列设计的基因特异性引物与接头引物进行RACE,3’RACE和5’RACE的产物拼接后的全长序列与上述全长cdna序列一致。结果表明,该文库适于用RACE方法从中分离在悦目金蛛丝腺中表达基因的全长cdna。本文还对SMART技术的特点和局限性进行了讨论。

摘要：苯丙氨酸解氨酶（phenylalanine ammonialyase，PAL）是酚类物质合成的第一个酶，是催化苯丙烷类反应的第一酶。根据已经报道的PAL基因的序列设计兼并引物，采用3＇RACE和5＇RACE方法，克隆得到了芒果果实PAL基因的全长cdna序列。