摘要：目的:基于CRISPR/Cas9技术构建猪胎儿成纤维细胞(porcine fetal fibroblasts,PFFs)OSBPL2敲除细胞系,为构建小型猪致聋基因缺陷动物模型奠定重要的前期工作基础。方法:首先通过生物信息学方法对人与猪OSBPL2基因共线性和同源性进行分析,预测并模拟人与猪OSBPL2蛋白质二级、三级结构。其次,设计合成靶向猪OSBPL2第5、6外显子设计单导向RNA(single guide RNA,sg RNA),以p X330质粒为载体,构建含有Cas9骨架的重组载体,转染至猪PFFs中,G418药物筛选阳性单克隆细胞。最后,T7EN1酶切实验检测靶向效率,序列分析检测单克隆细胞基因型。结果:生物信息学分析结果表明人与猪的OSBPL2在染色体上具有较好的共线性关系,蛋白质氨基酸同源性高达88%,且具有相似的功能结构域。成功构建打靶OSBPL2基因的Cas9/sg RNA表达载体,转染PFFs细胞,药物筛选获得OSBPL2基因双敲的单细胞克隆并测序证实了基因突变型。结论:人和猪OSBPL2基因具有高度的同源性。构建成功的Cas9/sg RNA表达载体在PFFs中预期实现了OSBPL2基因编辑并获得基因双敲的单细胞克隆,为后续OSBPL2基因敲除猪模型构建提供了必需的实验材料。

摘要：[目的]了解2021年10月广西某猪场引进仔猪的死亡原因。[方法]采用细菌学和分子生物学方法进行诊断,并对猪蓝耳病病毒与猪圆环病毒进行基因组层面的比较分析。[结果]本次疫病为猪蓝耳病病毒(PRRSV)、猪圆环病毒(PCV2、PCV3)型与大肠杆菌混合感染引起。对基因组比较发现,PRRSV病毒编码GP2~GP5蛋白对应的基因区域易发生突变,但编码ORF区蛋白的基因较为保守;对NCBI数据库中2022年1-5月62份PCV基因组进行分析发现,我国出现3个变种。[结论]PRRSV病毒结构更复杂,对其ORF1a、ORF1b 2个高度保守与稳定的核心区域进行PCR检测,同时相对保守的GP5糖基化包膜蛋白区域可以设计快检试剂的开发;而PCV病毒在全基因组上容易发生变异,这增加了对新型PCV变异毒株的检测难度。