摘要：目的 研究具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum,Fn)外膜囊泡(Outer membrane vesicle,OMV)蛋白质组学特征及其对宿主细胞的毒性作用。方法 使用梯度离心法从Fn的培养上清液中分离纯化出OMV (Fn-OMV),通过中文名称(Nano-LC/MS/MS)分析鉴定Fn-OMV携带的蛋白质;利用GO数据库进行分类,并通过KEGG注释通路进行分类和分析。通过流式细胞术检测Fn-OMV处理人白血病T细胞Jurkat细胞和小鼠巨噬细胞RAW264.7后细胞凋亡的情况,同时使用Fn活菌作为对照;通过细胞增殖毒性实验(CCK8)探究Fn-OMV对人结肠癌RKO细胞增殖的影响。结果 通过革兰染色观察确定Fn形态,粒径分析所提取的Fn-OMV平均大小为126.5 nm,质量良好。Nano-LC/MS/MS结果表明Fn-OMV共携带509个蛋白,占Fn全菌蛋白的25%,其中主要的细菌外膜蛋白有10个,均具有良好的抗原性和多个抗原决定簇。通过GO分类发现Fn-OMV携带大量分子功能相关蛋白,经KEGG注释通路分析包含蛋白数目最多的前10个通路为:抗生素合成,碳代谢,核糖体,氨基酸合成,嘌呤代谢,氨酰tRNA合成,丁酸盐代谢,糖酵解/糖异生,丙酮酸代谢,氨基酸和核苷酸糖代谢。流式细胞术结果表明Fn活菌可促进Jurkat细胞和RAW264.7细胞凋亡,但Fn-OMV对二者凋亡无显著作用。Fn-OMV对RKO细胞的增殖无显著作用。结论 Fn-OMV携带的细菌外膜蛋白有10个,均具有良好的抗原性和多个抗原决定簇,与Fn相比,其对细胞凋亡和增殖无显著作用。因此,本研究对基于OMV的Fn疫苗设计提供了基础信息,具有潜在的应用价值。

摘要：目的建立定量检测粪便中具核梭杆菌(Fusobacterium nucleatum,***)的免疫磁珠捕获联合实时荧光定量PCR(IMBs-qPCR)技术方法。方法5×***(0.4%甲醛灭活)免疫新西兰兔制备多克隆抗体,饱和硫酸铵沉淀法和HiTrap Protein G HP亲和层析法纯化抗体;优化MS300免疫磁珠偶联多克隆抗体和捕获***的反应条件。根据***特异性基因NusG设计引物和构建含目的基因的载体质粒,建立qPCR反应体系并绘制qPCR标准曲线。最后,在不同浓度(50CFU/200mg^10^5CFU/200mg)***的人粪便标本中,评价该方法的检测效能。结果成功制备***多克隆抗体,抗体ELISA效价>320000,盐析和亲和层析纯化抗体纯度分别为60%和85%;多克隆抗体偶联免疫磁珠时偶联缓冲液最佳pH值为5.0,最佳温度为25℃,最佳偶联时间为2.5h,加入抗体最适量为10μg/mg,免疫磁珠最佳捕获温度为37℃,时间为40min;成功建立qPCR反应体系;IMBs-qPCR和粪便全基因组DNA提取法直接检测模拟粪便标本最低检测限分别为100CFU/200mg和400CFU/200mg,ROC曲线中AUC分别为0.948和0.878。结论成功建立了IMBs-qPCR检测粪便中***的方法,该方法具有简便快速、灵敏度高、特异性好等特点。

摘要：目的通过meta分析明确具核梭杆菌(Fn)感染是否会加重炎症性肠病(IBD)患者病情并增加其治疗难度。方法计算机检索PubMed、MEDLINE、EMBASE、Web of Science、万方医学网、中国知网等数据库,时限为1988年1月至2022年6月。通过纳入及排除标准进行筛选文献及提取资料。采用STATA12.0软件进行meta分析。结果共纳入病例对照研究文献6篇。与未感染患者比较,Fn感染IBD患者临床炎症活动度明显加重、需要手术治疗者明显增加,差异均有统计学意义[优势比(OR)=4.13、3.90,95%可信区间(95%CI):2.08~8.23、1.22~12.45];Fn感染IBD患者年龄、性别、炎症部位、临床进程、难治性与未感染患者比较,差异均无统计学意义(OR=0.76、1.51、1.59、1.94、1.80,95%CI:0.39~1.50、0.86~2.64、0.90~2.80、0.41~9.09、0.07~49.84)。采用逐一排除方法进行敏感性分析,临床活动度OR结果稳定。结论Fn感染可能会导致IBD患者病情加重,并导致需要手术治疗的风险明显增加,IBD患者如合并Fn感染可能需要使用抗生素治疗,但尚有待于更多前瞻性研究进一步证实。

摘要：目的:利用响应面法研究免疫球蛋白Y(IgY)影响口腔唾液模拟环境中具核梭杆菌(***)的生长繁殖特性,发现***最终菌落数与培养时间、***初始接种浓度和IgY剂量的关系。方法:以***最终菌落数为评价指标,在单因素试验基础上,设计三因素三水平响应面实验进行优化,通过响应面法对回归方程的分析,得到各因素最佳条件,优化后的条件重复试验3次,以验证模型的准确性。结果:以2×10~6CFU/mL初始浓度接种***、181mmol/L剂量给药IgY,培养时间6h得到最终菌落数4.52×10~4 CFU/mL,与预测值相对误差小于5%,方差分析表明模型P值显著,缺失值P值不显著,理论值与实测值拟合度良好,优化后***最终菌落数显著降低。结论:响应面法优化结果表明IgY能显著抑制口腔唾液模拟环境中具核梭杆菌的增殖,回归模型能够预测IgY影响口腔唾液模拟环境中***增殖的特性。