摘要：根据化脓链球菌(Streptococcus pyogenes)磷脂酰甘油磷酸合成酶(phosphatidylglycerophosphate synthase,PGPS)基因序列设计引物,通过PCR从兽疫链球菌(Streptococcus zooepidemicus)基因组中克隆得到开读框为531bp的同源序列pgsa-sz。pgsa-sz的预测编码蛋白含有176个氨基酸残基,分子量19400,等电点8.8,其中含有63个疏水氨基酸,预示其可能的膜结合特性。二级结构预测发现该蛋白含3个跨膜域。此外,该蛋白与***的PGPS具有85%的氨基酸序列相似性。将该蛋白与金黄色葡萄球菌(Staphylococcus aureus)、枯草芽孢杆菌(Bacillus subtilis)、大肠杆菌(Escherichia coli)和酿酒酵母(Saccharomyces cerevisiae)的PGPS进行序列比对,发现该蛋白包含PGPS中保守的活性位点区域。上述结果表明,pgsa-sz为***细胞膜中PGPS的编码基因。

摘要：以透明质酸分解酶基因(Hyl)为改造目标,利用同源重组技术获得Hyl基因敲除的重组菌。首先以兽疫链球菌的基因组DNA为模板扩增出部分透明质酸分解酶基因(Hyl-1),然后将其克隆到载体pMD19-T上,再以质粒pUC19为模板,PCR扩增得到氨苄青霉素抗性基因,通过反向PCR将其插入Hyl-1基因的中部,得到基因敲除载体pMD19T-SA。该载体与质粒pBR322分别用EcoRⅠ、PstⅠ双酶切后进行连接,得到基因敲除的重组载体pBR322-SA,PCR及限制性酶切分析,构建的敲除载体与设计结果相符。最后,利用这两种敲除载体通过同源重组技术得到一株重组菌,经PCR及酶活鉴定,这株菌的Hyl基因已缺失。

摘要：透明质酸是链球菌荚膜的主要组成部分,有着重要的生理功能。UDP-葡萄糖脱氢酶(HasB)是透明质酸合成中的一个关键酶,而C类链球菌的UDP-葡萄糖脱氢酶编码基因(hasB)尚未被克隆。通过hasB基因的上下游序列设计引物从兽疫链球茵的基因组中克隆出一段序列,测序结果显示其包含一个由1206个碱基组成的开放阅读框,所编码的蛋白序列同化脓链球菌和乳链球菌的UDP-葡萄糖脱氢酶蛋白序列分别有63.1%和70.6%的相似性。将这段基因置于T7启动子下,并在大肠杆菌中进行表达,能够得到一个约47kDa的蛋白,酶活测定显示其具有UDP-葡萄糖脱氢酶活性。这些结果表明所克隆的基因是兽疫链球菌的UDP-葡萄糖脱氢酶编码基因。

摘要：通过离子束诱变,获得了兽疫链球菌变异株T-07。根据单因素实验,发现影响兽疫链球菌变异株T-07透明质酸(HA)产量的关键因素为时间、温度和葡萄糖浓度。采用三因素三水平Box-Behnken实验设计,应用响应面分析法(RSM)对该变异株发酵生产HA的关键因素条件进行优化。经过优化,HA产量提高了3.0倍,在2.1g/L以上,实验值与预测值基本相符。

摘要：透明质酸具有保湿能力以及润滑等功效,在软骨、皮肤、脐带和鸡冠中含量极高,且在化妆品和护肤品方面、控制癌症以及新型药物载体设计方面的应用极其广泛。为了继续探究微生物摇瓶发酵下提高透明质酸产量的营养和培养条件,实验对一株兽疫链球菌菌株通过单因素和正交实验法进行发酵培养基及培养条件优化,最终确定兽疫链球菌的最佳发酵条件为:发酵温度37℃、初始pH值7.4、发酵时间为16 h,最佳培养基配比为葡萄糖3%,牛肉膏4.5%,MgSO_4·7H_2O 0.03%,异甘草素0.09%。

摘要：根据透明质酸合酶基因序列及内参照GAPDH基因序列 ,设计目的基因和内参照的引物序列 ,探讨了PCR体系中适宜的退火温度、循环次数和Mg2 + 浓度。实验结果显示 ,要保证半定量RT -PCR的准确性与可靠性 ,目的基因及内参照基因的退火温度均可选择 5 0℃ ,它们的Mg2 + 浓度均选择 1.5mmol L ,目的基因的循环次数选择 30次 ,内参照基因的循环次数选择 35次。在上述适宜的RT -PCR条件下 ,测定兽疫链球菌中透明质酸合酶mRNA水平。

摘要：以兽疫链球菌(Streptococcuszooepidemicus)C55151为原始菌种,经N-甲基-N -硝基-N-亚硝基胍(NTG)诱变处理,获得一株高产透明质酸(Hyaluronicacid,HA)的变异株J18,其HA产量较原始株提高一倍.利用正交设计试验探索出该变异株的最佳发酵培养基配比为葡萄糖50g/L,酵母膏30g/L,硫酸镁0.5g/L.发现添加十二烷基硫酸钠(SDS)能够大幅度提高HA产量.同时对原始株、变异株的发酵过程进行了研究,发现变异株J18在发酵的任何时间,其HA产量都高于原始菌种,且菌体浓度与发酵液中的葡萄糖浓度及pH值呈负相关性.

摘要：本文以一株产透明质酸(hyaluronic acid, HA)的兽疫链球菌为研究对象,在5.00 L发酵罐和250 mL摇瓶中考察了温度和pH对HA发酵过程中菌体生长、HA产量、HA分子量大小以及分布的影响。结果显示,当pH为7.00时适合菌体生长,而在产物合成阶段更高的pH条件8.00下HA比生成速率更高。据此,设计了分段和周期性改变发酵过程pH的调控模式,研究表明:分段pH调控方式与pH为7.00时相比HA浓度没有提高,但是pH在7.00和8.00之间进行的分段调节时分子量提高了10.60%,同时显著降低了多分散系数,另外在pH在7.00和8.00之间进行的分段调节的同时在33℃的培养温度下收获时HA分子量提高了18.70%,而为后续工业化生产分子量更为集中的HA,同时降低不同分子量HA分离成本提供了方向。

摘要：通过对于透明质酸产生菌发酵培养基,利用Plackett-Burman设计及响应面试验分析了摇瓶培养基成分,确定了最适合的摇瓶发酵培养基。通过小型发酵罐的研究确定了透明质酸的发酵工艺。实验结果表明,利用响应面实验优化的培养基组分简单。透明质酸的产量达到5.23g/L,分子量为2.0×106u。

摘要：构建透明质酸发酵动力学模型可反映发酵过程中菌体生长量、基质消耗量及透明质酸产量之间的变化规律。采用兽疫链球菌(Streptococcus zooepidemicus)进行摇瓶发酵,利用MATLAB软件对透明质酸含量、还原糖残量、菌体量的实验数据进行了非线性规划,建立了透明质酸生成动力学的模型。对拟合值与实验值进行比较,发现其吻合度较好,相对误差<5%。本模型适用于培养基初糖质量浓度<30 g/L的分批发酵,为透明质酸的产业化生产放大、发酵过程的工艺设计和管理控制提供科学的依据。