摘要：背景:卵子冷冻技术的发展为人类辅助生殖技术带来重大的突破,但卵子冷冻的效果并不理想。目的:研究冷冻保存对不同成熟时期人卵母细胞纺锤体及发育潜能的影响。设计、时间及地点:随机对照细胞学体外实验,于2005-04/2006-05在重庆市妇幼保健院完成。材料:体外受精-胚胎移植和卵胞浆内单精子显微注射治疗周期中剩余的未成熟卵子(GV期和MI期)。方法:将未成熟卵子随机分为对照组、MI/GV卵冷冻组和体外成熟后MII卵冷冻组,用慢冻速融的方法对MI/GV卵和体外成熟的MII卵进行冷冻和解冻,应用Polscope对卵子的纺锤体进行观察,并观察卵子的发育潜能。主要观察指标:不同组卵子的纺锤体可见率,体外成熟情况,冷冻不同时期卵子的复苏情况,及后期的受精、卵裂、可用胚胎情况。结果:对照组纺锤体可见率77.3%,明显高于MII卵冻融组、MI/GV卵冻融组(56.3%,53.8%,P0.05),MII卵冷冻组的卵裂没有受到明显影响;对照组的卵裂率与MI/GV卵冻融组差异有显著性意义(84.4%,52.9%,P<0.05),MI/GV卵冻融后卵裂率明显下降;冷冻组的胚胎质量下降,可用胚胎率明显降低。结论:控制性超排卵周期中剩余的未成熟卵子无论是直接冷冻还是先体外培养成熟后再冷冻,卵子的纺锤体都受到了一定的损伤,对卵子的发育潜能造成了影响。

摘要：背景:微囊化基因工程细胞移植治疗需要制备大量的细胞活性良好、重组蛋白表达量高的生物微胶囊,体外培养和冷冻保存是生物微胶囊制备过程中两个重要的环节。目的:考察体外培养时间和冷冻保存对微囊化细胞在动物体内生长和内皮抑素表达的影响及体外培养时间对微囊化细胞冷冻保存的影响。设计、时间及地点:于2006-04/10在大连化学物理研究所生物医用材料实验室完成实验。材料:海藻酸钠与聚赖氨酸为美国Sigma公司产品。方法:将微囊化的重组内皮抑素细胞分装于24孔板中;每孔分装0.1mL微胶囊,加入DMEM/F12培养液2mL。微囊化细胞在37℃、体积分数为0.05的CO2培养箱中培养。每2d采用MTT法测微囊内的活细胞密度,并收集培养上清测内皮抑素表达量。主要观察指标:微囊化细胞生长情况和内皮抑素表达量。结果:体外培养时间对微囊化细胞在动物体内生长、内皮抑素表达和微囊稳定性具有较大的影响,体外不培养和培养4d的微囊化细胞在小鼠腹腔内生长良好、内皮抑素表达量高,并且微囊稳定性好,而体外培养8d的微囊化细胞在移植后的第26天破裂。体外培养时间对微囊化细胞冷冻保存也具有较大的影响,体外培养4和8d的微囊化细胞在液氮中冷冻保存40d,复苏后细胞生长良好、内皮抑素表达量高,而冻存前未经过体外培养的微囊化细胞,复苏后细胞几乎全部死亡。结论:生物微胶囊在体外比较适宜的培养时间为4d。并且冷冻保存对微囊化细胞在动物体内生长、内皮抑素表达和微囊稳定性没有显著的影响。

摘要：背景:胚胎卵巢组织免疫原性低,不易引起宿主的免疫排斥反应,是卵巢异体移植的理想供体。但由于获取胎儿卵巢的不随意性和来源限制,标本的冷冻显得至关重要,成功的冷冻保存和复苏技术是建立胎儿卵巢库的关键。目的:通过对大鼠新鲜或冻融胚胎卵巢组织异体无血管移植后的组织形态和功能的观察,探讨胚胎卵巢组织异体移植和超速冷冻保存的可行性。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2006-03/05在云南省第一人民医院生殖遗传科进行课题设计,于2006-05/2007-02在云南大学单克隆抗体研究中心完成实验。材料:卵巢来源于孕龄为18～20dSD大鼠胚胎。取阴道脱落细胞涂片证实有正常动情周期未交配过的SD成年雌性大鼠作为移植对象,分4组:正常对照组(n=10)、去势对照组(n=10)、新鲜胚胎卵巢移植组(n=25)、冷冻胚胎卵巢移植组(n=25)。方法:正常对照组仅行皮肤筋膜肌肉切开缝合术,去势对照组切除双侧卵巢组织。将孕龄为18～20d的新鲜或经超速冷冻法冷冻复苏的大鼠胚胎卵巢植入去势后4周的大鼠颈部皮下作为实验组,分别为新鲜移植组和冷冻移植组。主要观察指标:通过阴道脱落细胞的观察和血清雌二醇、孕酮的测定了解大鼠内分泌恢复情况,并对移植卵巢进行组织学观察。结果:新鲜移植组和冷冻移植组分别有52.17%和38.01%大鼠恢复了动情周期,两组血清雌二醇和孕酮在分别在35和49d恢复到正常,且动情周期天数与正常对照组比较,差异无显著性意义。冷冻移植组大鼠恢复动情周期虽稍短于新鲜移植组,但差异并无统计学意义。63d后取出移植物观察,见移植物色泽红润,表面有丰富的血管形成,镜下见卵巢内有大量的小动脉和小静脉;移植物组织学检查发现卵泡的发育,光镜下可见不同发育阶段的卵泡,有成熟卵泡和黄体形成,形态与正常卵巢无明显差别。结论:大鼠胚胎卵巢异体异位无血管皮下移植后能存活、生长发育并具有与正常卵巢相似的内分泌功能;超速冷冻法能较好的保存胚胎卵巢的活性,复苏后与新鲜胚胎卵巢组织具有相同的生理活性。

摘要：目的　寻求更佳的关节软骨冷冻保存方法。方法　设计两步冷冻法中的不同浸泡时间 ,对新西兰兔的关节软骨进行冷冻保存。软骨取材后 ,随机分成五组 , 组为新鲜对照组 , ～ 组为冷冻组 ,冷冻前先在4℃ 10 % DMSO中浸泡 30分钟 ( 组 )、1小时 ( 组 )、2小时 ( 组 )及 4小时 ( 组 ) ,然后均置超低温冰箱中以- 1℃ / min的速度降温至 - 6 0℃ ,维持 1小时后 ,投入液氮中保存 1周。复温后行透射电镜检查、台盼蓝染色、软骨细胞培养 3H- Td R掺入率测定。结果　 1软骨组织冷冻后 ,软骨细胞均受到不同程度的损伤。 组活细胞率96 % ,3H- Td R掺入率为 (4 95 3.13± 5 83.2 7) % , ～ 组与之比较 ,有非常显著性差异 (P<0 .0 1)。 组超微结构完全正常 ,而 ～ 组均显示细胞器损伤。 2 组的细胞结构和功能最佳 ,电镜检查仅见轻度细胞器损伤 ,活细胞率为 5 6 % ,3H- Td R掺入率 (1139.88± 146 .39) % ; 、 、 组与之比较 ,有非常显著性差异 (P<0 .0 1)。结论　关节软骨在冷冻之前 ,先浸泡 4℃ 10 % DMSO中 2小时 ,可提高软骨细胞的存活率。

摘要：目的:研究各种因素对动脉瓣膜细胞活性的影响,寻找一种更好保护瓣膜的方法。方法:按照正交试验设计,猪瓣膜经过4种因素即抗生素液浸泡,不同浸泡时间,不同冷冻保护液配方和甲基强的松龙加入处理过程。最后以流式细胞仪计数的方法计算瓣膜的细胞活性。结果:3个处理因素即抗生素液浸泡,冷冻保护液配方,甲基强的松龙加入对细胞活性的影响差异有统计学意义。结论:同种瓣的制作储存过程中应用试验提出的方法可能有助于提高同种瓣临床应用的耐久性。

摘要：试验旨在探究程序化低温保存时两种渗透性冷冻保护剂对鸡皮肤组织保存的影响。从孵化9 d的鸡胚中分离皮肤组织,剪碎为1 mm^(3)大小的组织块,对组织块冷冻保存后复苏培养并统计复苏率,通过CCK8试验、EDU试验检测冻存复苏后细胞的增殖能力、PI染色检测细胞周期分布、JC-1检测线粒体膜电位检测,qRT-PCR检测标记基因的差异表达。结果显示:使用15%二甲基亚砜和20%甘油冻存的组织块复苏效率分别为(95.8±1.4)%和(92.5±2.5)%,显著高于其他冷冻保护剂组合(P0.05);与对照组相比,15%二甲基亚砜和20%甘油冻融组织块培养的成纤维细胞G1、G2、S期都未有显著差异(P>0.05);线粒体膜电位检测显示20%甘油保存的组织块培养的成纤维细胞其膜电位与对照组相比出现了显著下降(P0.05)。结果表明,15%二甲基亚砜和20%甘油冻存的鸡皮肤组织块复苏效率无显著差异,但是15%二甲基亚砜的冻存效果要优于20%甘油。

摘要：用杂种犬４条，分成新鲜组和冷冻保存１、３、６个月组各１条。每条犬解剖出６个半月瓣和主、肺动脉壁各３块，大小１×１ｃｍ￣２。拉丁方设计。标本放在两组抗菌素中，每组各含三种保存液。各组标本均行组织培养，培养细胞￣３Ｈ－ＴｄＲ掺入。结果：细胞生长在各保存液间无差异。培养细胞计数和￣３Ｈ－ＴｄＲ掺入表明，冷冻保存动脉及瓣膜１～６个月，对组织活性无影响，以冷冻保存１～３个月为最佳。

摘要：在海洋鱼类胚胎冷冻保存试验中,为了解决试验材料有限,潜在的设计方案巨量的问题,笔者试图将专门解决有限样本下学习规律的支持向量机应用于此领域.采用LIBSVM和BSVM软件包中的多分类算法对不同抗冻剂、不同浓度、不同平衡时间下的组合方案进行筛选,经生物试验验证具有较高的预测准确率,为生物试验设计提供了一种新的思路和方法.

摘要：为充分发挥和提高优良萨福克种公羊的利用率,本试验对进口萨福克肉羊精液冷冻保存技术进行研究,试验设计4个萨福克羊冷冻精液稀释液配方,pH值6.0~7.0,挑选14只健康成年种公羊,调教采精、制冻。结果显示:稀释液C的冷冻后精子活力显著高于稀释液A的冻后精子活力(P<0.05),极显著高于稀释液B和稀释液D的冻后精子活力(P<0.01);冻精在40~42℃解冻时精子活力效果最好。故使用稀释液C制作进口萨福克肉羊冷冻精液并在42℃解冻效果较好,可在生产实践中推广使用。

摘要：背景 检测新鲜以及保存的血小板的质量的方法已有不少，包括血小板的数量、形态学、血小板介质的pH值，低渗反应，以及激活剂引起的凝集。本研究的目的在于评估在体外受激活剂刺激后，产生凝集反应和血栓素A2，以评估新鲜的和保存后的血小板的功能。设计和方法经单采制备的血小板于22℃保存5天，然后于6％的二甲基亚砜冷冻保存于-80℃，经解冻、清洗、在保存介质中重新悬浮。测定激活剂、pH值和介质成分对血小板的凝集，以及对刺激后的血小板产生血栓素A2的影响。