摘要：为了探讨犊牛睾丸组织适宜的冷冻保存体系,设计以甘油、DMSO、乙二醇、海藻糖、BSA和睾丸液作为主要成分的6种冷冻保护液,以碱性磷酸酶(AKP)、酸性磷酸酶(ACP)、乳酸脱氢酶(LDH)和β-D葡萄糖苷酶(β-D-Glucosidase)的酶活性作为测定指标,以新鲜犊牛睾丸组织的4种酶活性为空白对照,使用6种冷冻保护液将睾丸组织于液氮中冷冻保存7d,然后37℃水浴解冻并无菌培养24h,再制备成φ=10%的睾丸组织匀浆液并测定4种酶活性,最后分析6种冷冻保护液对犊牛睾丸组织标志性酶活性的冷冻保护效果。结果表明,含ρ=0.015g/mL牛血清白蛋白(BSA)的冷冻保护液冷冻7d后,睾丸组织AKP、ACP、LDH和β-D葡萄糖苷酶的活性分别为599.99、129.11、1 891.53和489.98U/g,均显著优于其他组(P<0.05);含ρ=0.04g/mL海藻糖的冷冻保护液冷冻7d后,AKP、ACP、LDH和β-D葡萄糖苷酶活性分别为454.88、114.63、1 862.79和457.8U/g,其保护效果次于0.015g/mL BSA组,但均显著优于其他组(P<0.05);经DMSO、乙二醇和睾丸液冷冻7d后,4种标志性酶的活性均低于0.015g/mL BSA组和0.04g/mL海藻糖组,甘油组冷冻保护液的效果最差。因此,含ρ=0.015g/mL BSA和ρ=0.04g/mL海藻糖的冷冻保护液能够较好地保护犊牛睾丸组织的酶活性,是犊牛睾丸组织适宜的冷冻保护剂。

摘要：用假阴道法采集山羊精液,进行品质分析,应用正交设计L(934),4因素为稀释液种类(A)、稀释比例(B)、平衡时间(C)和解冻液(D),每因素选择3个水平,分析解冻精液品质,构建其综合指数,优化夏季山羊精液冷冻-解冻方法。结果表明:乏情季节精液品质略有下降,但仍能满足制作冻精的需要。4因素影响解冻后精液综合指数的显著性顺序是A>C>D>B,其中稀释液种类对解冻后精液综合指数影响差异显著(P0.05),但稀释至108个/mL时综合指数高于稀释至5×108个/mL和2×108个/mL;平衡时间对解冻后综合指数影响差异显著(P<0.05),平衡4h效果优于1h和2h;解冻液种类对解冻后综合指数影响差异显著(P<0.05),维生素B12较TALP液和2.9%柠檬酸钠效果好。优选各因素最佳水平,确定夏季山羊精液冷冻-解冻方法为选用高卵黄稀释液Ⅱ,将精子密度稀释至108个/mL,平衡时间4h,以维生素B12作为解冻液40℃湿解冻。

摘要：目的筛选一种既提高精子转染外源DNA效率,又保持解冻后精子活力的山羊精液冷冻—解冻方法。方法应用正交设计L9(34),因素分别为稀释液种类、稀释比例、降温时间和解冻液,每个因素选择3个水平,检测和比较解冻后精子转染外源DNA效率和精子活力。结果所选冷冻—解冻各因素对精液转染效率影响不显著[F(8,18)=1.032,P=0.449];平衡时间对冷冻—解冻活力影响极显著[F(2,24)=9.972,P=0.001],平衡1h极显著小于平衡2 h和4 h的精液活力(P=0.003,P=0.000),以平衡4 h最好。用筛选的冷冻—解冻方法处理精液,解冻后精子的活力极明显降低(P=0.002);生存指数降低,GOT释放量增加,菌落数减少,与鲜精相比差异显著(P=0.018;P=0.016;P=0.018);精子畸形率增加,顶体完整率降低,与鲜精相比差异不显著(P=0.494;P=0.084)。结论优化了提高精子转染外源DNA效率的山羊精液冷冻—解冻方法。

摘要：目的 :探讨不同维持温度冷冻对血管组织超微结构的影响。方法 :以 15 %DMSO为低温保护剂 ,采用两步冷冻保存步骤 ,设计维持温度为 - 4 5℃、- 5 0℃、- 5 5℃、- 6 0℃、- 6 5℃和 - 70℃ ,对SD大鼠血管组织进行冷冻预处理后 ,- 196℃液氮保存 1周。复温后光镜和透射电镜观察。结果 :用维持温度 - 5 5℃、- 6 0℃冷冻预处理的血管 ,经液氮保存、复温 ,血管组织超微结构保持良好 ,优于其它温度值的实验组。结论 :- 5 5℃～ - 6 0℃是适宜血管组织冷冻的维持温度值。

摘要：背景:同种异体骨软骨移植技术是治疗关节软骨缺损有效的方法之一,但由于移植物保存方法不理想,明显制约着该技术的临床应用。目的:探讨玻璃化冷冻法保存关节软骨组织的可行性和优越性。方法:切取成年猪骨软骨,制成约5mm×6mm(直径×长度)大小的圆柱形骨软骨块。以新鲜软骨组为对照,分别采用0.5mol/L甘油、1mol/L二甲基亚砜、1mol/L玻璃化溶液3种方法预处理软骨块,再行冷冻法保存软骨块8周,采用组织化学染色、免疫荧光染色观察并比较软骨细胞活性的变化。结果与结论:玻璃化溶液预处理组的关节软骨细胞存活率达到74.5%,明显高于甘油和二甲基亚砜预处理组,软骨基质成分仅少量丢失。3种方法相比较,玻璃化溶液预处理后慢速梯度降温冷冻保存法可以明显提高冻存关节软骨组织的活性。

摘要：目的定量分析并对比冻存器官和甲醛固定石蜡包埋(formaldehyde-fixed and paraffin-embedded,FFPE)组织中核糖核酸(ribonucleic acid,RNA)的表达情况。方法选取不同死亡时间人体脑、心肌和肝组织的冻存及FFPE样本,提取并检测RNA质量浓度,运用实时荧光定量反转录聚合酶链反应(reverse transcription-quantitative polymerase chain reaction,RT-qPCR)技术分析各RNA指标的扩增效率及相对表达量。结果与冻存样本相比,FFPE样本中所提取RNA的质量浓度和完整性相对较低。各RNA指标扩增效率与RNA种类及扩增产物长度有关,其中扩增产物较长的甘油醛-3-磷酸脱氢酶(glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase,GAPDH)及β-肌动蛋白(β-actin,ACTB)扩增效率不理想,而5S核糖体RNA(5Sribosomal RNA,5S rRNA)扩增效率理想且在各组织中表达稳定,故选为内参指标。较长死亡时间的冻存样本及FFPE样本中扩增产物较长的GAPDH及ACTB表达量下降,而组织特异性微小RNA(microRNA,miRNA)以及扩增产物较短的GAPDH和ACTB在同一组织冻存和FFPE样本中表达具有一致性。结论通过标准化RT-qPCR实验,选取合适的RNA指标及设计合适产物长度的引物,能够准确定量FFPE样本中RNA的表达水平。

摘要：生物样本库为转化研究提供重要的研究资源[1],其通过与疾病特征和研究目的相关联的顶层设计、系统规范地收集健康个体来源的和疾病个体来源的血液、组织、各种体液等样本,经过与样本特性相适宜的处理后再将样本冷冻保存[2]。

摘要：①目的探讨冻贮活性同种血管临床应用的效果。②方法１９９１年４月～１９９５年４月共３５例手术。③结果除用于法乐氏四联症等右室流出道重建２６例，复杂先天性心脏病右心室－肺动脉外通道３例之外，还首次设计并应用到肺外科（３例）及大静脉外科（３例），均取得良好效果。

摘要：我们对液氮罐内气相温层进行了分析研究,并设计了一种简易器械降温,并进行了胎脑细胞冻存的实验研究。现报告如下: 材料与方法 首先将液氮充入液氮罐(成都液氮生物容器厂生产YDS-10)内40mm深,(液氮在液氮罐内的液相深度),加盖静置24h,去盖换上自制的钢质连接体(见附图)。