摘要：为研究细胞对药物的定性定量反应,并且能够形成浓度梯度,本研究利用软件CAD、软件CFD以及软件Fluent设计了一种新形式的浓度梯度微流控芯片,注入芯片的流体能够形成浓度梯度,该芯片添加了有细胞捕获结构。研究对芯片的影响因素进行了优化,用红绿染料对芯片的浓度梯度特征进行了验证,探讨带有细胞捕获结构的浓度梯度微流控芯片实现药物对内皮细胞凋亡的可行性。通过芯片平台研究了葡萄糖以及土豆叶匀浆液诱导内皮细胞凋亡的情况。研究结果表明,新设计的浓度梯度芯片经过红、绿染料的验证,在出口主通道有八通道溶液形成了层流特性,能够保持较长的距离,形成了明显的稳定的浓度梯度。在诱导内皮细胞凋亡方面,当葡萄糖的浓度大于25μmol/L时,细胞出现了明显的抑制;而8个浓度的土豆叶匀浆稀释液对诱导内皮细胞凋亡没有明显的作用。本研究设计的微流控芯片能够实现药物诱导细胞,为筛选肿瘤药物提供了新的途径。

摘要：氟喹诺酮类药物是广泛使用的临床一线抗感染药物,经过结构修饰有可能将此类药物改造成为抗肿瘤药物[1-2]。本研究用酰胺基作为氟喹诺酮C-3羧基的电子等排体,绕丹宁环为其修饰基,对氟苄叉基为修饰基的功能修饰侧链构建绕丹宁不饱和酮骨架,运用药效团拼合药物设计原理,设计合成了一系列N-(5-芳苄叉基绕丹宁)氟喹诺酮类衍生物,并进行了抗肿瘤活性筛选。结果显示,该类衍生物均具有较好的抗肿瘤活性,其中1-环丙基-6-氟-7-(4-甲基-哌嗪-1-基)-N-(5-对氟苄叉基-绕丹宁-3-基)-喹啉-4-(1H)-酮-3-甲酰胺(HGQ-15)活性最强,IC50值达3.89~4.53μmol·L^-1,具有进一步研究和开发的价值。在对新合成化合物的研究过程中,发现抗肿瘤药能够诱导肿瘤细胞自噬,并对肿瘤细胞的增殖和凋亡产生影响[3]。自噬现象可能是影响药物疗效和产生耐药机制的重要因素,是药物研究开发中需要重视的问题[4]。本文通过检测HGQ-15对人肝癌SMMC-7721细胞株的作用,初步研究了HGQ-15抑制细胞增殖,促进细胞凋亡以及与自噬作用的关系,为该类化合物抗癌作用的应用和开发提供一定的体外实验依据。

摘要：从水稻愈伤组织抑制消减杂交 (suppressionsubtractivehybridization ,SSH)文库中分离出一个PCD相关基因的EST片段 ,根据水稻基因组的序列设计引物 ,从汕优 6 3中分离与克隆出rPDCD5的全长cDNA。rPDCD5包含387bp的可译框 ,编码由 12 8个氨基酸构成的蛋白质。序列比对分析显示 ,该检测的蛋白质与已知PDCD5的高度同源。半定量实时PCR分析证实了该基因在环境因子 (低温处理和NaCl处理 )

摘要：目的探讨抑制FLOT1基因表达对胃癌细胞侵袭、凋亡的影响及机制。方法将设计合成的FLOT1siRNA慢病毒载体(si-FLOT1组)转染人胃癌MKN-45细胞,同时转染阴性对照慢病毒载体(阴性组),并设置空白组。Western blotting检测转染48h后细胞FLOT1、E-cadherin、α-SMA、cleaved caspase 3、Bcl-2和Bax蛋白表达。CCK-8法检测转染24、48、72和96h的细胞活力。Transwell小室、流式细胞术及DCFH-DA法分别检测转染48h的细胞侵袭能力、凋亡率及活性氧(ROS)含量。结果FLOT1siRNA慢病毒载体可明显抑制MKN-45细胞FLOT1表达,与空白组比较差异具有统计学意义(P<0.05)。si-FLOT1组与空白组比较,细胞活力降低,细胞侵袭能力降低,细胞凋亡率升高,E-cadherin、cleaved caspase 3和Bax蛋白表达升高,α-SMA和Bcl-2蛋白表达降低,ROS含量升高,差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论下调FLOT1基因表达可通过抑制EMT降低胃癌细胞侵袭能力,通过调控凋亡相关蛋白表达及提高细胞ROS含量促进细胞凋亡。

摘要：目的研究靶向血管内皮生长因子(VEGF)基因的外源性miRNA对恶性黑色素瘤细胞增殖及凋亡的影响。方法根据VEGF基因序列设计合成4对miRNA干扰片段,构建质粒真核表达载体,分别为X-26-1-3、X-26-2n-1、X-26-3-2和X-26-4-4,测序分析鉴定插入序列的完整性;脂质体法将该4个重组表达载体转染黑色素瘤细胞株SKmel-28,RT-PCR检测转染细胞中VEGF基因的mRNA表达变化,Western blotting检测miRNA对VEGF蛋白表达水平的调控效应,明确抑制效果最为显著的miRNA干扰序列。MTS法和流式细胞仪分别检测人工合成的靶向VEGF的miRNA对SKmel-28生长的抑制作用,以及对肿瘤细胞凋亡的影响。结果测序分析证实4个重组体插入片段的碱基序列均完全正确,成功转染SKmel-28细胞后,均能显著抑制肿瘤细胞VEGF mRNA和蛋白的表达,与对照组相比有显著性差异(P<0.01)。抑制效应最强的重组载体是X-26-2n-1,MTS法和流式细胞仪检测显示,SKmel-28细胞转染X-26-2n-1后,细胞增殖受到明显抑制,增殖抑制效应具有时间依赖性,与阴性对照组比较差异具有显著性(P<0.05),与空白组比较细胞增殖抑制更加明显(P<0.01);肿瘤细胞早期凋亡率、晚期凋亡率、总凋亡率也显著高于对照组(P<0.01)。结论外源性靶向VEGF的miRNA能够显著降低黑色素瘤细胞SKmel-28 VEGF基因和蛋白的表达水平,抑制肿瘤细胞增殖,诱导细胞凋亡。

摘要：目的从凋亡相关分子Fas（CD95）、半胱天冬酶-3（caspase-3）和活性氧（ROS）、细胞色素C的角度,研究扇贝多肽（polypeptide fromChlamys farreri,PCF）抑制UVB引起的人角质HaCaT细胞凋亡的分子机制。方法实验设计为5组：对照组、UVB模型组、UVB＋5.69mmol.L-1PCF组、UVB＋2.84mmol.L-1PCF组、UVB＋1.42mmol·L-1PCF组。应用小干扰RNA（siRNA）干扰UVB辐射的HaCaT细胞的Fas表达;琼脂糖凝胶电泳分析Fas siRNA及ROS清除剂NAC对细胞凋亡的影响;以DCFH-DA为荧光探针,检测细胞内ROS的含量;免疫印迹法检测细胞色素C及用RNAi干扰降低Fas表达后caspase-3的表达。结果干扰Fas后,UVB辐射的HaCaT细胞凋亡受到明显抑制及caspase-3的表达降低;NAC对UVB诱导的HaCaT细胞凋亡有抑制作用;1.42~5.69mmol.L-1剂量范围内的PCF可剂量依赖性抑制UVB引起的ROS的生成及细胞色素C的释放。结论PCF可抑制UVB诱导的HaCaT细胞凋亡,其作用机制与抑制Fas-caspase-3及ROS-细胞色素C通路有关。

摘要：目的:观察Survivin反义寡核苷酸对SMMC-7721细胞增殖、凋亡的影响。方法:设计合成特异性Survivin反义寡核苷酸,转染肝癌SMMC-7721细胞,MTT法测定Survivin ASODN对细胞增殖抑制情况的影响,FCM法检测对细胞周期、凋亡及Survivin蛋白表达的影响。结果:Survivin ASODN可抑制SMMC-7721细胞的生长增殖,并呈浓度和时间依赖性。ASODN转染组可诱导SMMC-7721细胞凋亡(P<0.01),细胞周期阻滞于G2/M期(P<0.05)。ASODN转染组Survivin蛋白表达水平显著降低(P<0.01)。结论:Survivin ASODN能下调SMMC-7721细胞Survivin表达,并可抑制其增殖并诱导凋亡。

摘要：豆豉是一种具有很多益处的传统大豆发酵食品。本研究的目的是确定其香气成分在体外诱导细胞凋亡的作用及检验豆豉香气成分(volatile components of Douchi,VCD)与抗癌作用之间的关系。经0.4、0.8、1.6 mg/mL的VCD处理48 h后,人鼻咽癌CNE-1细胞的增殖受到抑制,且1.6 mg/mL的VCD具有最高的抑制效果(抑制率84.6%)。0.4 mg/mL和0.8 mg/mL的VCD处理同样表现出很好的抑制效果,抑制率分别为29.7%和55.6%。流式细胞术分析结果显示1.6 mg/mL VCD作用CNE-1细胞后处于G1期细胞有36.2%。通过逆转录-聚合酶链反应分析,VCD通过上调天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶(cysteine-aspartic acid protease,caspase)-3、caspase-8、caspase-9、B细胞淋巴瘤因子-2相关X蛋白、p53、p21、E2F1、p73、核因子κB抑制蛋白-α和下调B细胞淋巴瘤因子-2、超大B细胞淋巴瘤因子-2、人凋亡抑制蛋白(human inhibitor of apoptosis protein,HIAP)-1、HIAP-2、核因子活化B细胞κ轻链增强子-κB的mRNA的表达来显著诱导癌细胞凋亡(P<0.05),并呈剂量依赖性。VCD包含的63种化合物可能导致CNE-1细胞的凋亡。这些结果表明,VCD具有体外诱导CNE-1细胞凋亡的作用,这些效果来源于VCD复杂的化学成分。

摘要：目的:探讨丰富环境对缺血缺氧脑损伤(HIBD)新生大鼠海马脑源性神经营养因子(BDNF)表达及细胞凋亡的影响。方法:采用随机数字表法将36只7日龄新生大鼠分为假手术组、模型组及丰富环境组,各组又分为术后7d、28d两个亚组(n=6)。采用Rice-Vannucci经典方法建立新生大鼠HIBD模型。模型组及假手术组不予任何干预,丰富环境组予以早期抚触及丰富环境刺激治疗。术后7d、28d采用水迷宫检测方法评估大鼠学习记忆能力,免疫组化法检测大鼠海马CA1区BDNF的表达,TUNEL法检测海马CA1区细胞凋亡。结果:术后7d、28d,与模型组比较,丰富环境组逃避潜伏期均缩短(P<0.05),穿越平台次数增多(P<0.05),BDNF表达升高(P<0.05),TUNEL阳性细胞数降低(P<0.05)。结论:丰富环境能改善HIBD新生大鼠学习记忆能力,其机制可能与上调海马区BDNF的表达及抑制细胞凋亡有关。

摘要：目的探讨假性蛋白激酶毛球族同源蛋白3(TRB3)在肝癌(HCC)细胞增殖、凋亡和迁移中的调控作用及机制。方法免疫组织化学及蛋白质印迹法(Western blot)检测HCC患者癌组织及癌旁组织TRB3的表达;体外检测肝癌细胞系HepG2和Huh7细胞中TRB3的表达,同时设计小干扰RNA靶向抑制TRB3后:CCK8、EdU检测细胞增殖;流式细胞术检测凋亡;Transwell评估迁移能力;同时Western blot检测凋亡、迁移相关蛋白和AKT磷酸化活性的变化。两组间均数比较采用t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果Western blot检测发现TRB3在肝癌组织中的表达显著上调,与癌旁正常肝组织相比,其相对表达水平分别为0.78±0.12和0.29±0.09,P<0.01,差异有统计学意义;小干扰RNA抑制TRB3后,CCK8、EdU检测发现HepG2和Huh7细胞的增殖活性明显减弱(P值均<0.05);流式细胞学检测结果显示HepG2和Huh7细胞的凋亡比例显著增加(P值均<0.01);Western blot检测也发现凋亡调控蛋白BAX和Bim表达亦显著增加(P值均<0.01);Transwell结果显示HepG2和Huh7细胞的迁移能力下降(P值均<0.05),迁移调控蛋白MMP4和MMP9的表达亦显著下调。Western blot结果显示AKT的磷酸化水平显著增加。结论TRB3通过抑制AKT的磷酸化活性,调控肝癌细胞增殖、凋亡、迁移。TRB3可能是一种潜在的治疗肝癌的靶向位点。