摘要：目的研究重度烧伤小鼠脾脏凝溶胶蛋白（GSN）含量和mRNA表达及T淋巴细胞增殖活性的变化，选择GSN的最佳干预时间。方法取80只雄性BALB/c小鼠，按随机数字表法分为假伤组和烧伤组，每组40只。烧伤组小鼠造成背部15%TBSAⅢ度烫伤（下称烧伤），伤后即刻皮下注射生理盐水1 mL，背部涂适量碘伏防治感染，每日1次。假伤组小鼠致假伤，伤后不补液、不外涂碘伏。分别于伤后0（即刻）、8、24、48、72 h，每组各取8只小鼠，无菌留取脾脏，噻唑蓝比色法检测脾脏T淋巴细胞增殖活性，ELISA法检测脾脏组织中GSN含量，实时荧光定量RT－PCR法检测脾脏组织中GSN mRNA表达。对数据行析因设计方差分析、单因素方差分析、LSD检验及Bonferroni校正。结果（1）2组小鼠伤后0 h的脾脏T淋巴细胞增殖活性无明显差异（P〉0.05），假伤组小鼠伤后8、24、48、72 h脾脏T淋巴细胞增殖活性显著高于烧伤组（P值均小于0.05）。假伤组小鼠伤后各时相点脾脏T淋巴细胞增殖活性无明显差异（F＝0.756，P〉0.05）；烧伤组小鼠伤后8 h脾脏T淋巴细胞增殖活性为0.12±0.04，显著低于组内伤后0、24、48、72 h的0.73±0.07、0.56±0.07、0.51±0.09、0.59±0.07（P值均小于0.05）。（2）2组小鼠伤后0 h脾脏组织中GSN含量无明显差异（P〉0.05），假伤组小鼠伤后8、24、48、72 h脾脏组织中GSN含量显著高于烧伤组（P值均小于0.05）。假伤组小鼠伤后各时相点脾脏组织中GSN含量无明显差异（F＝1.083，P〉0.05）；烧伤组小鼠伤后8 h脾脏组织中GSN含量为（11.9±2.6）pg/mg，显著低于组内伤后0、24、48、72 h的（37.7±2.9）、（19.9±4.0）、（24.1±4.1）、（24.6±4.0）pg/mg（P值均小于0.05）。（3）2组小鼠伤后0 h脾脏组织中GSN mRNA表达量无明显差异（P〉0.05），假伤组小鼠伤后8、24、48、72 h脾脏组织中GSN mRNA表达量显著高于烧伤组（P值均小于0.05）。假伤组小鼠伤后各时相点脾脏组织中GSN mRNA表达量无明显差异（F＝0.413，P〉0.05）；烧伤组小鼠伤后8 h脾脏组织中GSN mRNA表达量为0.307±0.064，显著低于组内伤后0、24、48、72 h的0.944±0.023、0.625±0.091、0.744±0.104、0.821±0.072（P值均小于0.05）。结论重度烧伤可导致小鼠脾脏GSN含量及mRNA表达、T淋巴细胞增殖活性显著下降，且三者均是在伤后8 h降至最低，可选择伤后8 h之前作为重度烧伤后GSN的最佳干预时间。

摘要：在前期蛋白质组学和基因组学研究发现凝溶胶蛋白(Gelsolin,GSN)是一个潜在促进小鼠肝癌淋巴道转移基因基础上,本次实验设计合成3条GSN的shRNA短发夹序列(shRNA1、2、3),并成功将它们构建入pSilencer3.1质粒,重组质粒转染鼠肝癌高淋巴道转移力Hca-F细胞,获得了稳定转染的pSilencer-GSN-Hca-F细胞株.结果表明:GSN空白对照组和无关序列对照组细胞中在mRNA及蛋白表达水平均相近;与空白对照组相比较,3个重组质粒在mRNA水平对GSN抑制率分别为46.8%、48.2%、20.2%,在蛋白水平对GSN的抑制率分别为73.9%、45.1%、31.2%;shRNA1重组质粒的抑制效果最明显,统计学意义显著(P<0.01).通过RNA干扰和基因转染技术成功建立了GSN表达稳定下调的鼠肝癌Hca-F细胞株,为进一步研究GSN在恶性肿瘤淋巴道转移中的作用奠定了基础.

摘要：目的构建日本血吸虫凝溶胶蛋白（Sjgelsolin）的原核表达载体，获得其表达产物并分析其在不同发育阶段的转录水平。方法根据序列AY814387设计引物，体外扩增Sjgelsolin的蛋白质编码序列，将其插入pET28a（＋）质粒，转化至大肠埃希菌BL21（DE3），用IPTG诱导表达。提取日本血吸虫虫卵，尾蚴，7-d童虫，42-d雌、雄成虫的总RNA，用半定量RT—PCR分析sjgelsolin在每个样本中的转录水平。结果成功构建了pET28a（＋）-Sjgelsolin重组质粒，并获得高水平的表达。Sjgelsolin转录子在尾蚴和雌虫成虫中未被检测到，而在7-d童虫和42-d雄虫成虫中被检测到。结论Sjgelsolin在体外获得表达，且其转录是受发育调控的。