摘要：选取丝氨酸蛋白酶超家族作为研究对象, 采用SSAP算法从结构比较的层次上进行蛋白质超家族分子进化的研究. 分析了相同或相似物种中酶结构和功能的演化、鼠类胰蛋白酶突变体结构的聚类关系以及不同抑制剂对牛?-胰蛋白酶天然结构的影响, 探索了结构比较对于蛋白质工程中定点突变改造蛋白质结构与功能以及蛋白质抑制剂设计等方面的指导作用. 基于结构比较的方法是蛋白质分子进化研究的一种新方法.

摘要：设计引物PCR方法克隆了奶牛1926bp的HSP70基因,连接到pGEMR○-T Easy Vector上测序,与NCBI上的序列比对,发现开放阅读框内的点突变(941位点,T→C),致使314位L(亮氨酸)→P(脯氨酸)。DNAstar Protean分析点突变对蛋白的原核表达一、二级结构、等电点进行了分析,结果显示螺旋转角区数目增多,不规则卷曲发生轻微变化,但其它指标均不变。此外,通过DNAstar MegAlign用Clustal V方法分析HSP70家族蛋白的同源性、氨基酸残基替换频率并构建了分子进化树,结果发现碱性、酸性氨基酸(R和K)、分支的氨基酸(V和L)、极性氨基酸(S和T)等在生物HSP70分子进化中氨基酸发生替换的频率最高,HSP70可以作为研究生物系统演化的一个重要的工具。在上述基础上,在HSP70基因上、下游引物分别加上EcoRⅠ和HindⅢ酶切位点,构建了pET-32a-c(+)-bHSP70原核表达质粒,IPTG诱导成功得到重组牛源HSP70蛋白,293细胞和Hela细胞的体外实验表明原核表达的蛋白有抗凋亡生物活性[动物学报51(6)1080-1090,2005]。

摘要：为了诊断巢湖地区送检元宝鸡的病情,试验进行了剖检观察、制备病理组织切片、设计特异性引物用PCR扩增几种常见免疫抑制病毒序列,并将测序结果用DNAStar软件与已报道的序列进行比对分析。结果表明:测序所得结果与NCBI上报道的J亚群禽白血病病毒(ALV-J)和鸡传染性贫血病毒(CIAV)序列结果一致,并且ALV-J序列同源性在93.4%~98.2%之间,CIAV序列同源性在97.5%~99.2%之间。说明巢湖地区送检的元宝鸡感染了ALV-J和CIAV,并且元宝鸡感染的ALV-J基因序列与英国株Z46390.1同源性最高,为98.2%,而检测到的CIAV与国内外已报道的鸡传染性贫血病毒同源性最高,为99.2%。

摘要：根据已发表的鸭白细胞介素（IL-2）cDNA序列设计并合成1对引物，直接从成年固始鸭脾淋巴细胞中提取的总RNA，应用反转录-聚合酶链反应（RT—PCR）扩增鸭儿-2cDNA，将扩增片段克隆入pGEM—TEasy载体，并对其进行测序、结果表明，扩增片段长度为446bp，与预期大小一致，为鸭，IL-2基因的编码区全长，共编码140个氨基酸的多肽、把该基因编码的鸭IL-2氨基酸序列与已公布的禽及哺乳动物IL-2氨基酸序列进行比较，其同源性分别在54．3％～100％和15．0％～17．9％之间．分子系统进化树分析表明，固始鸭，IL-2与哺乳动物，IL-2有共同的祖先，亲源关系较近，但在免疫系统选择性压力下，形成独特的种族特异性．

摘要：根据GenBank中牛干扰素-β1（IFN-β1）基因序列（E00137）,设计并合成了1对引物,以梅花鹿肝脏组织DNA为模板,采用PCR技术扩增梅花鹿IFN-β1全基因,并克隆、测序。结果表明：梅花鹿IFN-β1基因全长561 bp,编码186个氨基酸,含有6个与二硫键形成有关的半胱氨酸,3个糖基化位点,成熟蛋白含有4个α螺旋,3个β折叠区,7个β转角。序列比较分析发现,梅花鹿IFN-β1基因序列与GenBank发表的23种IFN-β1基因核苷酸序列同源性为3.2%~91.1%,氨基酸序列同源性为21.9%~79.7%。梅花鹿与其他23种动物的IFN-β1基因序列分析和系统进化树分析表明,IFN-β1基因存在种属特异性。梅花鹿INF-β1基因的成功克隆,为进一步研究梅花鹿INF-β1基因表达、生物学活性和应用奠定了基础。

摘要：旨在研究荷包猪SLA-DRB基因的分子特征,设计引物用RT-PCR扩增3头荷包猪DRB基因c DNA,并克隆至p MD18-T Vector,阳性克隆测序并做序列分析,分别进行同源性、分子进化及主要氨基酸变异位点分析。结果表明,成功从3头荷包猪中扩增得到SLA-DRB基因,分别命名为SLA-DRB-HB01-03,经序列测定后,证实c DNA全长为836 bp,其中1-801为ORF区,共编码266个氨基酸。同源性分析显示,SLA-DRB-HB与其他SLA-DRB等位基因的同源性介于90.3%-99.8%之间。分子进化分析表明,荷包猪SLA-DRB-HB独立分支,与其他等位基因相比较,进化更加原始。氨基酸变异位点和多态性分析结果显示,SLA-DRBHB本身存在一定的多态性。

摘要：借鉴互联网中已克隆的活化素βA亚基基因的序列,设计并合成一对兼并引物,首次扩增和克隆到亚洲黑熊βA亚基基因的357 bp片段,以水作为阴性对照排除污染,多次重复实验获得一致稳定结果.序列分析显示此片段在处于不同进化程度的物种之间,仍然具有高度的保守性,亚洲黑熊βA亚基基因与人相比有29个核苷酸差异,一致性高达91.6%;与亲缘关系较近的大熊猫、小熊猫和马来熊相比,分别有4、20、3个核苷酸差异,一致性分别为98.9%、94.4%、99.2%.系统发育分析和酶切图谱分析显示亚洲黑熊、大熊猫和马来熊具有较近的亲缘关系,而它们与小熊猫的亲缘关系较远.

摘要：[目的]获得珠颈斑鸠(Streptopelia chinensis)线粒体12S rRNA基因序列,并以此分析不同鸟类的分子进化关系。[方法]根据其他鸟类线粒体12S rRNA基因及侧翼序列设计引物,采用PCR的方法获得珠颈斑鸠线粒体12S rRNA基因片段,克隆后进行序列测定,利用Mega 4.0软件Neighbor-Joining法分析不同鸟类的进化关系。[结果]获得珠颈斑鸠线粒体12S rRNA基因序列长度为970 bp,碱基组成为:A=31.6%、C=28.9%、G=19.8%、T=19.7%,其中A+T含量高于G+C含量。通过与GenBank中环颈斑鸠(Streptopelia capicola)等其他8种鸟类12S rRNA基因序列比较发现,珠颈斑鸠与环颈斑鸠的同源性最高,为94.4%,与家鸭(Anas platyrhynchos)的同源性最低,为78.4%。并根据这9种鸟类序列用NJ法构建进化树,结果表明,珠颈斑鸠和其他8种鸟类在分子水平上反映的进化关系与在形态学上的进化关系基本吻合。[结论]首次得到珠颈斑鸠12S rRNA基因全长序列,并确定了珠颈斑鸠与其他8种鸟类的分子进化关系。

摘要：根据鸡白细胞介素18(IL-18)cDNA基因序列设计了1对特异性引物,应用RT-PCR技术,从脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)刺激的我国地方品种萧山鸡原代鸡脾细胞中扩增并克隆鸡IL-18全长基因(Genbank accession,AY628648)。扩增片段全长591 bp,共编码197个氨基酸的前体蛋白,其中含有表达完整功能蛋白所必需的起始密码子和终止密码子。该序列与国外报道的鸡IL-18全长基因核苷酸序列及推导的氨基酸序列的同源性为98.99%,只在引导序列中出现两个氨基酸残基的缺失,分子进化分析表明萧山鸡IL-18基因与火鸡以及家鸭基因形成一个独立的分支。将萧山鸡IL-18成熟蛋白序列插入pGEX-4T-2载体并在***中得到表达,获得45 kD的GST-IL-18融合蛋白,经纯化后用于制备多克隆抗体。本研究对萧山鸡白细胞介素18的全长基因进行了克隆及表达,并对其分子进化进行了分析,为深入研究其功能奠定了基础。

摘要：为了初步探讨白纹伊蚊细胞色素P450 CYP6家族新基因分子进化机理,根据已获得的白纹伊蚊溴氰菊酯抗性株一新的细胞色素P450CYP6基因cDNA片段,设计反向引物,进行5’-cDNA末端快速扩增（rapid　amplification　of　cDNA　ends,RACE）;以正向引物进行3’-RACE。然后分别进行克隆、测序和鉴定。根据获得白纹伊蚊CYP6家族新成员全长cDNA序列,运用PC/GENE软件分析其5’-UTP区DNA序列相似性及编码区氨基酸残基相似性、构建系谱树。结果获得的3个全长序列中5’-UTP区DNA序列完全相同;编码区氨基酸残基相似性为3/497或4/497个氨基酸差异,而且此种差异均位于蛋白质功能非保守的基因区域;构建的系谱树显示CYP6N3基因与冈比亚按蚊CYP6N1-2亲缘关系最近,而与致倦库蚊的CYP6E1、CYP6F1亲缘关系较远。说明白纹伊蚊CYP6N3基因较致倦库蚊的CYP6E1、CYP6F1基因更为古老;白纹伊蚊CYP6N3各等位基因变异体是通过整个CYP6N3基因座的新近复制而产生。