摘要：目的建立基于环介导等温扩增（LAMP）技术的副溶血弧菌快速检测方法。方法针对副溶血弧菌toxR基因序列设计一套LAMP引物，应用LAMP技术对33株副溶血弧菌、22株其他种属细菌及含不同副溶血弧菌参考菌株（ATCC17802）基因组拷贝数（5×10^0-5×10^5拷贝）／μ1）的样品进行检测，对平行样品分别应用普通PCR法和TaqMan探针实时PCR法进行检测，对3种检测方法的特异度、灵敏度及检测下限及反应时间进行比较。结果LAMP技术、普通PCR法、TaqMan探针实时PCR法检测副溶血弧菌的特异度、灵敏度均为100％（分别为22／22，33／33），检测下限分别为5×10^1、5×10^3、5×10^2拷贝）／μ1，反应所需时长分别为22min、3h、50min。结论与普通PCR、TaqMan探针实时PCR检测相比，LAMP技术检测下限低，检测时长短，适于对副溶血弧菌进行快速检测。

摘要：目的:建立一个用于副溶血性弧菌致病性定量测定的检测体系.方法:以多组tdh基因的保守序列为基础,设计实时荧光定量PCR扩增适用的引物和TaqMan探针.以定量方式提取副溶血性弧菌基因组DNA,以tdh+菌株为阳性对照,建立实时荧光定量PCR方法.以tdh荧光定量结果与绝对菌数浓度作参比,以确定tdh基因在菌群中的拷贝水平.结果:使用正向序列5′-CGAAG ATGTT TATGG TCAAT C-3′(位置在467～487bp处),反向序列5′-ACCGC TGCCA TTG-TA TAGTC T-3′(位置在571～551bp处),TaqMan探针5′-FAM-TGACA TCCTA CATGA CTGTG AAC-ECLIPSE-3′(位置在517～539bp处)建立一个实时荧光定量PCR反应,目的片段长度105bp.建立反应的DNA拷贝数对数值与Ct值线性关系为y=-3.144logx+43.229(r=0.997,P<0.001).建立了菌液A值与显微镜下绝对菌数浓度的相关关系为y=2.0452x+6.2845(r=0.7828,P<0.01).根据tdh基因拷贝数与绝对菌数相比可计算tdh基因的单菌体拷贝量.结论:建立了一个定量副溶血性弧菌tdh基因拷贝水平的实时荧光定量PCR检测方法,可应用于副溶血性弧菌致病性的标准化定量测定体系.

摘要：〔目的〕建立一种对食品中副溶血性弧菌的快速检测方法。〔方法〕根据GenBank公布的副溶血性弧菌的toxR基因的保守序列,设计1对引物和Taqman MGB探针,建立基于Taqman MGB探针的实时PCR快速检测副溶血性弧菌方法。〔结果〕通过对20种细菌的DNA进行扩增,结果6株副溶血性弧菌均可产生特异性扩增,与其他细菌无交叉反应;对纯菌而言,菌液灵敏度为23/ml,DNA浓度为130pg。定量关系式为:y=-3.353151Ln(x)+43.797989,R2=0.947952。67份冷冻海产品中2份副溶血性弧菌实时PCR检测结果阳性,相对应的有1份样品副溶血性弧菌培养阳性,检测时间仅需2h。〔结论〕该反应体系具有高度的灵敏度和极高的特异性,可用于食品和食物中毒样品中副溶血性弧菌的快速检测。

摘要：〔目的〕建立一种快速、准确、特异的方法,快速检测和鉴定出食品中的非致病性和致病性霍乱弧菌与副溶血性弧菌。〔方法〕针对霍乱弧菌的种特异性基因ompW、毒力基因tcpA、ctxA和副溶血性弧菌的种特异性基因tl、毒力基因tdh设计引物,建立PCR检测体系。〔结果〕检测结果显示,该方法能够特异性检出副溶血性弧菌或霍乱弧菌,并进一步确定其是否携带tdht、cpA或ctxA毒力基因,检测的灵敏度可达到5×101cfu/ml菌浓度。〔结论〕与传统方法比较,该方法快速、特异、灵敏,能在较短时间内对大量水产品样品进行检测。