摘要：目的比较两种阴离子交换层析填料Capto Q和Eshmuno Q去除重组全人源抗程序性死亡配体1(programmed cell death-ligand 1,PD-L1)单克隆抗体宿主蛋白(host cell protein,HCP)的能力以及动态载量。方法采用AKTA avant 25层析系统,通过实验设计(design of experiment,Do E)考查上样量、pH和电导率3个工艺参数变量对HCP去除的影响,设计条件为上样量范围40~60 mg IgG/m L gel,pH范围6.6~7.4,电导率范围1~4 ms/cm,阴离子交换层析采用抗体穿透模式。结果在设计的工艺参数范围内,随着pH的增加和电导率的减小,HCP去除效果有上升趋势;随着pH的减小和电导率的增加,动态载量有上升趋势。在最佳操作范围内当pH=7.0,电导率=1 ms/cm时,Capto Q的HCP去除能力为0.01%,载量为45 mg/m L gel;Eshmuno Q的HCP去除能力为0.02%,载量为35 mg/m L gel。结论阴离子交换层析能有效去除PD-L1单抗的HCP,去除率达50倍以上,动态载量Eshmuno Q达35 mg/m L gel,Capto Q达45 mg/m L gel。

摘要：以蛋白A结构中耐碱性更好的C区为基础,构建一种新型耐碱蛋白A,并偶联至琼脂糖基质,获得新型耐碱蛋白A亲和层析介质,分别用激光共聚焦显微镜和石英晶体微天平研究了人免疫球蛋白(h Ig G)与蛋白A介质的结合过程。结果表明,该介质具有较商品配基更高的结合力和稳定的再生性能,hIgG动态载量达62.0 mg/mL,40次再生操作后载量为初始载量的84%。该介质在抗体纯化领域具有较好的应用前景。

摘要：随着蛋白表达技术的不断发展与优化,发酵液上清中蛋白表达量不断提升,对下游纯化工艺提出了更高的要求,亟需开发高质高效的纯化工艺。Ni亲和层析是一种传统捕获目的蛋白的常用纯化方法。目前市面已有多种Ni亲和层析介质,其配基为螯合剂共价偶联到4%交联的琼脂糖介质上,再螯合Ni2+制备而成,但不同类别的Ni亲和层析介质配基有各自的基质和配位螯合技术,不同蛋白也有自身特性,从而造成介质对目标蛋白亲和力以及洗脱纯度有所差异。针对某抗体药物的纯化工艺探索,比较了3种不同的Ni亲和层析介质动态载量,从上样体积和平衡液咪唑浓度两方面进行该抗体融合蛋白Ni柱纯化条件筛选,并分析纯化后样品SEC纯度、总量、得率。综合考量除杂效果、总量、得率三个因素可知,Ni-IDA 6FF介质最适合该抗体融合蛋白的纯化,且纯化效率最高。