摘要：目的:原核表达并纯化人5-脂氧合酶(5LO)△112蛋白,将其免疫新西兰大白兔制备5-LO多克隆抗体。方法:使用DNAMAN设计重组引物,PCR扩增N端缺失112个氨基酸的5-LO截短DNA片段,将其重组到KpnⅠ和EcoRⅠ酶切的pET30a(+)质粒中,重组质粒pET30a-5LO△112转化大肠杆菌Rosetta(DE3),培养至OD_(600)为0.4时加入IPTG以诱导5LO△112重组蛋白表达,目的蛋白经纯化后免疫新西兰大白兔制备其多克隆抗体。结果:使用BugBuster蛋白提取试剂裂解细菌并获得纯度较高的包涵体,包涵体用含6mol/L盐酸胍的溶液变性溶解,再经Ni-NTA agarose亲和纯化得到高纯度的5LO△112重组蛋白。用该蛋白免疫新西兰大白兔获得5-LO的特异性抗体,该抗体的效价为1∶51200。结论:使用6mol/L盐酸胍溶解包涵体蛋白结合Ni-NTA agarose亲和纯化的方法成功获得了纯度较高的5LO△112重组蛋白,并用此蛋白制备了高效价的多克隆抗体。