摘要：为了对提取鸡蛋黄中卵黄高磷蛋白的工艺参数进行优化,在单因素的基础上采用二次通用旋转组合设计试验;考察了有机溶剂比例(正己烷/乙醇)和用量对卵黄高磷蛋白提取效果的影响,并基于遗传算法优化出了提取卵黄高磷蛋白的最佳工艺参数;采用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(简称SDS-PAGE)测定卵黄高磷蛋白的分子量。结果表明:当有机溶剂比例(正己烷/乙醇)为3.4/1、有机溶剂用量为148mL时,卵黄高磷蛋白的纯度高达81.62%;SDS-PAGE凝胶电泳结果表明:提取出的卵黄高磷蛋白的分子质量在35kD左右。

摘要：本实验以海南产番木瓜为研究对象,采取盐析法联合离子液体双水相对其富含的木瓜蛋白酶进行提取纯化。以不同饱和度的(NH_4)_2SO_4对粗酶液进行盐析,通过实验结果分析,确定了以饱和度分别为20%和45%的两步盐析法的最佳条件。然后再进行双水相萃取,通过单因素试验结果设计3因素3水平的响应面试验,优化双水相萃取条件为离子液体[C_4mim]N(CN)_2质量分数29.76%、(NH_4)_2SO_4质量分数16.08%、pH 8.18,在此最优条件下木瓜蛋白酶萃取率为89.01%,酶活力回收率为86.72%,所得到木瓜蛋白酶比活力为1 056 U/mg,纯化倍数达到9.6倍。然后对实验产物进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,经纯化的酶中杂条带明显减少,验证了分离纯化的效果。

摘要：采用单因素和响应面设计优化了超声波辅助菠萝蛋白酶嫩化鸭肉的最佳工艺参数,并对嫩化机理进行探讨。得到优化条件为处理温度45℃、pH 7.2、菠萝蛋白酶添加量350 U/g、超声波功率80 W、嫩化时间15 min,在该条件下剪切力的预测值为20.208 N,实测值为21.110 N。相对于未处理的鸭肉,嫩化组鸭肉的pH值、持水力和肌原纤维小片化指数显著增加(P0.05)。十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳图谱显示嫩化组鸭肉中大分子蛋白被水解成小分子肽类或氨基酸。透射电镜结果显示嫩化组鸭肉肌原纤维Z线断裂溶解,肌节变形缩短,I带和A带模糊不清,出现了肌原纤维小片化现象。超声波与菠萝蛋白酶协同作用对鸭肉的嫩化具有显著的效果,大大缩短了嫩化时间,使鸭肉更加多汁并富有弹性,鸭肉的品质得到了极大的改善。

摘要：利用十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulphate polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)分析唾液蛋白与模拟酒反应后蛋白减少比例,并将其表示为涩味强度;同时,以酒度、总酸、p H值以及饮用温度为考察因素,利用二次正交旋转组合设计分析各因子对涩味强度的影响。结果表明:p H值对涩度影响最大,其次是酸度和温度,酒度影响最小;其中p H值和酸度互作效应对涩味的影响显著。

摘要：目的克隆肺炎链球菌自溶酶(LytA)的基因序列,并进行重组表达。方法分别提取不同临床分离株的基因组DNA,根据已知肺炎链球菌野生R6株LytA基因序列设计引物,进行PCR扩增,将获得的目的基因片段克隆入原核表达质粒,然后测序;利用生物信息学方法,对不同临床分离株LytA基因序列进行比较分析,同时进行LytA基因的重组表达。结果从不同临床分离株的基因组中均扩增出完整的LytA基因片段,成功构建了重组质粒pGEX-4T-1-L-ytA。比较不同临床分离株LytA基因的DNA序列及推测的氨基酸序列,发现各株LytA基因序列及氨基酸序列间存在差异。通过异丙基巯基半乳糖(IPTG)诱导,LytA基因在大肠埃希菌JM109中得到高效表达,十二烷基硫酸钠聚丙烯酰胺凝胶电泳(SDSPAGE)结果显示pGEX-4T-1-L-ytA融合蛋白相对分子质量约62000,与理论预测一致。结论序列分析发现各分离株的LytA基因序列及氨基酸序列间存在差异,但同源性极高,推测LytA基因序列保守,可用于疫苗研发。

摘要：以葛根为原料提取葛根蛋白,以葛根蛋白提取率为指标对4种不同提取工艺进行对比,采用Box-Behnken响应面试验设计,优化葛根蛋白提取工艺,对葛根蛋白进行体外抗氧化分析,并以十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳法(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)测定葛根蛋白分子量。结果表明葛根蛋白最佳提取工艺为:提取温度45℃,提取时间2 h,料液比1∶20(g/mL),pH3.5;测得葛根蛋白提取率为11.73%;抗氧化试验表明,葛根蛋白具有良好的羟基自由基和DPPH自由基清除效果,其清除率分别为(88.62±0.73)%、(51.15±0.32)%,且清除DPPH自由基和羟基自由基的IC50分别为0.78、1.89 mg/mL,并具有一定的还原能力;SDS-PAGE试验结果可清晰看见葛根蛋白条带,分子量主要分布在14.0 kDa~43.0 kDa。

摘要：利用逐级盐析法结合双水相萃取对葛仙米藻蓝蛋白进行纯化,设计三因素二次回归正交旋转组合试验对提取工艺进行优化,并应用Design-Expert 7.0软件建立了各影响因素与萃取纯度的数学回归模型。结果显示最佳的提取工艺为:20%(NH4)2SO4盐析去沉淀后用40%和50%(NH4)2SO4盐析得藻蓝蛋白,再用质量分数10%的聚乙二醇6 000、质量分数18%的(NH4)2SO4进行双水相萃取。所得产物纯度可达到8.6,回收率为71.40%。对所得产物进行十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳分析,得到清晰的两条条带(条带1和条带2),其分子质量分别在35 ku和15 ku左右。通过质谱分析可知,条带2的分子质量为15 ku左右,等电点5.35,部分肽的氨基酸序列为TPLTEAVAAADSQGR和DIGYYLR。通过SWISS-MODEL网站模拟蛋白质结构得出,条带2可能是葛仙米藻蓝蛋白的α亚基。

摘要：目的降低乳清分离蛋白中的致敏蛋白含量,制备低致敏性乳制品。方法利用碱性蛋白酶水解乳清分离蛋白,研究酶添加量、初始pH、酶解时间以及温度对乳清分离蛋白水解度的影响。在单因素的实验基础上,采用Box-Behnken实验设计方法进行四因素三水平的响应面优化实验。结果在P<0.05的水平下,4个因素对乳清分离蛋白的水解度都有显著影响。最优的水解工艺为:酶添加量6.4%、初始pH 11、酶解时间4 h、温度60℃。乳清分离蛋白在此条件下水解后,水解度达到21.11%。酶解液的十二烷基硫酸钠-聚丙烯酰胺凝胶电泳(sodium dodecyl sulfate-polyacrylamide gel electrophoresis,SDS-PAGE)分析显示,经过这一优化工艺水解,10 kDa以上的蛋白基本全部被降解。高效液相色谱法(high performance liquid chromatography,HPLC)分析酶解产物的多肽及蛋白质分子量分布,结果显示酶解产物的分子量大都分布在3.5 kDa及以下。采用间接竞争酶联免疫吸附法原理测定2种标志性致敏蛋白(β-乳球蛋白和α-乳白蛋白)的残余抗原性,发现2种致敏蛋白的残余抗原性也有不同程度的降低。结论通过碱性蛋白酶水解后,乳清分离蛋白中具有致敏性的大分子蛋白转变为小分子的肽类,从而降低了致敏性。