摘要：目的 建立TaqMan实时荧光定量RT-PCR（rQ-RT-PCR）检测外周血单个核细胞（PBMC）中肿瘤坏死因子相关的凋亡诱导配体（TRAIL）mRNA含量的方法,探讨PBMC中TRAIL mRNA的检测价值.方法 在TRAIL基因第二和第三外显子区设计特异性引物和荧光探针,用RT-PCR扩增目的片段,实时检测产物的荧光强度,以标准品建立标准曲线,软件自动计算出待测样本中TRAIL mRNA含量,以TRAIL mRNA和β2M mRNA含量的对数比值进行TRAIL mRNA表达水平评价.结果 TRAIL mRNA含量线性范围为（2.9×10^3～2.9×10^9）copies/ml,批内和批间变异系数分别为9.5%和16.7%.30例健康献血员和58例慢性乙肝患者TRAIL mRNA与β2M mRNA浓度的对数比值的（x）±s分别为0.528±0.014和0.775±0.038,两组差异显著,P＜0.001.结论 FQ-RT-PCR检测TRAIL mRNA水平具有较好的灵敏度和重复性,适用于临床研究.

摘要：目的探讨甲状腺功能亢进症(简称甲亢)患者外周血单个核细胞微小RNA(miR)-206表达水平与Wnt/β-连环蛋白(β-catenin)通路中Wnt-1和β-catenin表达水平的相关性。方法采用前瞻性设计,选择2018年1月至2020年6月武威市人民医院收治的甲亢患者79例作为观察组,另选择2019年1月至2020年9月武威市人民医院健康体检者70例作为对照组。观察组使用抗甲状腺药物治疗,于治疗期口服他巴唑10~20 mg/d;血清甲状腺激素正常后减量,维持他巴唑5~10 mg/d,持续治疗12个月。采用实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测观察组治疗前后以及对照组外周血单个核细胞miR-206,Wnt-1、β-catenin mRNA表达水平。结果观察组治疗前外周血单个核细胞miR-206表达水平低于对照组(0.28±0.07比0.79±0.15),Wnt-1和β-catenin mRNA表达水平均高于对照组(6.75±1.39比2.23±0.65,5.83±1.24比3.21±0.86,P均<0.05)。观察组治疗后外周血单个核细胞miR-206表达水平(0.54±0.13)高于治疗前,Wnt-1和β-catenin mRNA表达水平(3.62±1.08、4.34±1.16)均低于治疗前(P均<0.05)。甲亢患者外周血单个核细胞miR-206表达水平与Wnt-1、β-catenin mRNA表达水平均呈负相关(r=-0.763、-0.798,P均<0.05)。结论甲亢患者外周血单个核细胞miR-206低表达,而Wnt-1和β-catenin mRNA高表达,miR-206表达水平与Wnt-1、β-catenin mRNA表达水平均呈负相关。

摘要：背景:既往已有研究证实经皮射频消融在有效灭活肿瘤的同时,能够在一定程度上改善机体免疫抑制状态。抗原呈递细胞在机体的抗肿瘤免疫中发挥着重要的作用,树突状细胞是目前所知机体内功能最强的专职性抗原提呈细胞。目的:观察肝脏射频消融后大鼠外周血单个核细胞OX-62,OX-6和CD86的表达变化。设计、时间及地点:随机对照动物实验,于2005-06/2006-03在北京大学临床肿瘤学院完成。材料:选用SD大鼠12只,按随机数字表法分为2组,对照组和射频后1周组各6只。方法:对照组大鼠处死后抽取外周血2mL。将射频后1周组大鼠肝脏左叶牵出,斜置电极针入肝,展开电极针,射频作用时间4min。射频完毕给予抗感染治疗,射频治疗后1周处死后抽取外周血。主要观察指标:①正常鼠肝射频后大体和病理学改变。②射频前后外周血内单个核细胞OX-62,OX-6以及CD86表达水平。结果:鼠肝组织射频灶病理组织学检查显示从中心到外围呈凝固性坏死-细胞变性-肉芽组织形成的演变特点。射频后1周组大鼠外周血单个核细胞中树突状细胞特异性标志OX-62的阳性表达率为(0.70±0.16)%,显著高于对照组[(0.34±0.08)%,P0.05)。结论:射频消融可促进大鼠外周血中树突状细胞前体细胞数量增多,可能会对提高机体在免疫应答中的抗原提呈能力起到促进作用。

摘要：背景:体外扩增脐血造血细胞对增加脐血造血细胞数量及植入能力至关重要,合适的细胞因子组合介导的体外扩增不仅能使造血细胞数量增加,而且能够上调和归巢有关的黏附分子和趋化因子受体4的表达。目的:实验拟观察白细胞介素3和白细胞介素6在人脐血单个核细胞体外扩增中的作用及对扩增后黏附分子和趋化因子受体4表达的影响。设计、时间及地点:随机区组开放性实验,于2007-03/12在广西壮族自治区人民医院及广州医学院附属广州市第一人民医院血液实验室完成。材料:10份足月顺产健康新生儿脐血标本。方法:将自新鲜脐血标本分离的单个核细胞接种于含有不同细胞因子组合的无血清无基质培养体系中培养7d,根据不同细胞因子组合实验分组为:对照组(无细胞因子组)、干细胞因子+FLT3配基+促巨核细胞生成因子组(A组)、干细胞因子+FLT3配基+促巨核细胞生成因子+白细胞介素6组(B组)、干细胞因子+FLT3配基+促巨核细胞生成因子+白细胞介素3(C组)、干细胞因子+FLT3配基+促巨核细胞生成因子+白细胞介素6组+白细胞介素3(D组)。主要观察指标:在0,7d检测有核细胞数,CD34+细胞数及CD34+CXCR4+,CD34+CD62L+,CD34+CD49d+的细胞数和集落形成单位数。结果:与对照组相比,A,B,C,D组均可有效的扩增脐血造血细胞(P0.05),D组能有效的扩增脐血细胞,并优于C组(P0.05),但均优于C组(P<0.05),D组CD34+CXCR4+,CD34+CD62L+和CD34+CD49d+的细胞数扩增倍数优于A,B,C组(P<0.05)。结论:白细胞介素6组+白细胞介素3可协同扩增脐血细胞,并能促进和归巢有关的CD49d,CD62L及趋化因子受体4表达。

摘要：目的　研究鸭IFN γ(DuIFN γ)在感染及控制病毒过程中的作用和机制。方法　基于β actin的高度保守序列设计引物 ,通过RT PCR方法获得了 β actin的部分cDNA为看家基因 ,然后构建DuIFN γ靶片段的竞争性内参照 ,建立检测DuIFN γ基因转录的半定量竞争性RT PCR方法。结果　建立了检测DuIFN γ基因转录的半定量竞争性RT PCR方法 ,并检测了在PHA刺激下鸭外周血单核细胞IFN γmRNA动态变化 ,结果表明PHA刺激 2 4～ 36h ,DuIFN γmRNA转录量最高。以此方法对用DHBVpreSDNA或与IFN γDNA共免疫DHBV感染鸭进行了测定 ,结果表明IFN γ表达质粒作为DNA免疫佐剂 ,可以增强宿主IFN γ的应答。结论　IFN γ表达质粒为DNA疫苗的有效佐剂。DuIFN γ基因转录的半定量竞争性RT PCR方法为研究鸭IFN γ在DHBV感染及清除中的作用和机制奠定了基础。

摘要：背景:目前神经干细胞(NeuralStemCells,NSCs)的来源仅限于胚胎,因此寻找一种新的NSCs的来源对于神经科学领域基础与应用研究的发展至关重要,而脐血中资源丰富。目的:探讨脐血单个核细胞培养前后神经细胞特有标志物的表达差异。地点与材料:研究地点为郑州大学医学院干细胞研究中心。材料为用肝素抗凝采血袋从郑州大学第一附属医院及第三附属医院产科无菌收集健康产妇足月孕娠顺产或剖宫产的婴儿脐带血50～100mL,充分混匀后,置保温盒中带回实验室。设计与方法:采用RT-PCR方法对脐血单个核细胞培养前后nestin,NF-M及MAP2mRNA的表达进行检测。主要观察指标:脐血单个核细胞培养前后nestin,NF-M和MAP2mRNA的表达。结果:nestin,NF-M及MAP2mRNA在培养前后的脐血单个核细胞中表达呈阳性;同未培养的脐血单个核细胞相比,nestin,NF-M及MAP2mRNA在培养的脐血单个核细胞表达增强。结论:在直接分离的脐血单个核细胞中存在着神经(干)细胞;培养后,神经元样细胞增多,nestin,NF-M及MAP2mRNA表达增强。

摘要：背景:脐血单个核细胞可作为种子细胞源以移植修复不同原因所致脑功能损害,但能否表达神经元另一重要特有分子τ蛋白?目的:探讨脐血单个核细胞在培养前后及细胞因子诱导作用下,τ蛋白mRNA的表达。设计:随机对照研究。地点和对象:实验地点:华中科技大学同济医学院。采集健康新生儿脐血8份,每份80mL。干预:在细胞培养过程中,使用细胞因子:表皮生长因子(epidermalgrowthfactor,EGF)和碱性成纤维细胞生长因子(basicfibroblastgrowthfactor,bFGF)。主要观察指标:①细胞形态。②τ蛋白mRNA在脐血单个核细胞中的表达。结果:培养前,脐血单个核细胞胞体小呈圆形,培养后EGF+bFGF组细胞胞体较大,有粗长突起形成,未加细胞因子所培养细胞胞体较小,突起较短、较细,形似星形细胞。反转录聚合酶链式反应(reverse-transcriptpolymerasechainreaction,RT-PCR)检测未培养的脐血单个核细胞τ蛋白mRNA呈阴性而MAP2mRNA表达阳性,培养后二者均表达阳性,在EGF+bFGF作用下,阳性表达更明显。结论:脐血单个核细胞表达MAP2mRNA,经培养后同时表达τ蛋白mRNA,细胞因子能增强这种作用。

摘要：目的　建立成熟的体外扩增多样性人免疫球蛋白基因的实验方法。方法　设计多对具有简并性特点的人IgG、IgM扩增引物 ,从人外周血单个核细胞 (PBMCs)中提取RNA并反转录为cDNA ,以其为模板聚合酶链反应 (PCR)扩增人免疫球蛋白κ轻链基因和重链Fd段基因 ,对扩增产物进行凝胶电泳和DNA指纹分析鉴定。结果　利用不同引物进行的PCR反应均成功扩增出相应的免疫球蛋白基因 ,经鉴定所获得的基因产物具有良好的多样性 ,在天然抗角蛋白自身抗体研究和抗体库的构建中得到初步应用。结论　合理设计引物能够从PBMCs中成功扩增出多样性的人免疫球蛋白基因 。

摘要：目的探讨高纯度、高回收率分离外周血单个核细胞治疗习惯性流产的方法.方法设计-种可产业化生产异体外周血单个核细胞体外分离试剂盒,用来分离单个核细胞.结果通过采用试剂盒的分离,单个核细胞回收率可达到90%以上,纯度可达到95%以上,冻存前存活率达到98%以上,大大提高了外周血单个核细胞使用效率.结论合理的应用本技术及适当护理参与,可高纯度、高回收率分离异体外周血单个核细胞治疗习惯性流产.

摘要：目的:探讨逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)半定量检测fg12凝血酶原酶在正常人外周血单个核细胞(PBMNC)中的表达及其规律。方法:根据genbank中fg12凝血酶原酶基因序列设计一对引物,以β-actin的表达为内参照,采用RT-PCR方法半定量检测体外培养体系中不同时点的PBMNC中fg12凝血酶原酶mRNA的表达及变化规律。结果:fg12凝血酶原酶mRNA的表达水平在新鲜分离的PBMNC中表达最高,随着培养时间的延长而逐渐降低,至72h几乎不能检测出。结论:RT-PCR方法半定量检测PBMNC中fg12凝血酶原酶mRNA灵敏度高;PBMNC中的fg12凝血酶原酶在体外培养体系中不能持续表达。