摘要：目的构建单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)小分子干扰RNA(siRNA)表达载体,为进一步研究其对动脉粥样硬化(AS)的防治作用提供手段。方法设计并合成两端含有酶切位点两条DNA序列,经退火成互补双链,再克隆至载体pSi-lencer 2.0-U6中构建重组表达载体,转化DH-5α菌株,提取质粒行双酶切鉴定,并进行序列测定。结果双酶切证实MCP-1 siRNA表达载体克隆构建成功,插入片段测序结果与合成的siRNA结果一致。结论成功构建MCP-siRNA表达载体,为动脉粥样⒉化的防治奠定实验基础。

摘要：目的研究质粒表达型小分子干扰RNA(siRNA)对人肾小管上皮细胞(HKC)单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)的抑制作用。方法2002年2～7月对同济大学附属东方医院针对人MCP-1 mRNA67、116、142位点设计并合成的3对MCP-1siRNA序列,构建MCP-1特异性siRNA真核表达载体pRNAT-MCP-1-Ⅰ、pRNAT-MCP-1-Ⅱ、pRNAT-MCP-1-Ⅲ,以脂质体法转染至HKC,转染24h后分别采用实时定量反转录-聚合酶链反应(RT-PCR)及Western blot技术检测HKC内MCP-1 mRNA、蛋白表达。结果siRNA表达载体的转染效率为60%,与正常对照组相比,3组不同质粒表达型siRNAMCP-1 mRNA和蛋白表达均显著降低(P<0.01)。结论siRNA能高效抑制HKC的MCP-1基因表达,提示siRNA在防治肾间质纤维化中具有潜在作用。

摘要：目的对基于CRISPR/Cas9系统的猪内皮细胞泛素样含PHD和环指域1(UHRF1)定向编辑进行研究,并分析其对单核细胞趋化蛋白-1表达的影响。方法靶向设计并构建UHRF1基因外显子区域gRNA序列载体,并将其与h Cas9载体共转染猪内皮细胞制备单克隆抗体,并分析单核细胞趋化蛋白-1表达变化。结果本研究共获重组质粒5个,转染后获得细胞株a、细胞株b和细胞株c三株UHRF1蛋白表达极低细胞株;UHRF1蛋白敲除后单核细胞趋化蛋白-1和MMP9、IL1、IL2及Bax蛋白表达分析水平明显降低而Bcl2表达明显升高,且与野生型细胞株相比差异有显著的统计学意义(P<0.05)。结论成功获得基于CRISPR/Cas9系统的猪内皮细胞UHRF1定向编辑,且获得细胞株内单核细胞趋化蛋白-1表达明显降低。

摘要：目的 :优化重组人单核细胞趋化蛋白 - 1(rhu MCP- 1)在大肠杆菌 DE3中的表达 ,生产 rhu MCP- 1。 方法 :应用 NBS15 L ***发酵罐 ,研究了诱导时不同的 p H值、温度、搅拌速率、通气量和异丙基硫代半乳糖苷 (IPTG)浓度对表达的影响 ,并利用正交设计对发酵条件进行优化。 结果 :正交试验表明溶氧条件对 rhu MCP- 1表达水平的影响较显著 ,其中搅拌速率和通气量为最大的影响因素 ,搅拌速率为 30 0 r/ m in和通气量 10 L / min时 ,表达水平最高 ,重组蛋白的含量可达 40 %以上。 结论 :本实验为该工程菌的中试提供了最佳的表达诱导条件 。

摘要：[目的]采用慢病毒系统构建AMP依赖的蛋白激酶α1(AMP activated protein kinase α1,AMPKα1)基因过表达的3T3-L1细胞系,探讨其对炎症因子表达水平的影响。[方法]在美国国家生物技术信息中心(NCBI)上查找到AMPKα1的基因序列,利用SnapGene软件设计引物,进行目的基因扩增、纯化。将纯化后的AMPKα1片段克隆到PLJM1-EGFP载体质粒上,构建好的质粒与辅助质粒共同转染到HEK293T细胞中,收集病毒液。用含有病毒液的培养基培养3T3-L1细胞,待抗性蛋白表达后用嘌呤霉素筛选,杀死未成功转染的3T3-L1细胞,更换新鲜的完全培养基继续培养。[结果]成功构建稳定过表达AMPKα1的3T3-L1细胞系(P<0.05);AMPKα1过表达的3T3-L1细胞系的炎症因子MCP-1蛋白表达水平降低(P<0.05),炎症减轻。[结论]过表达3T3-L1细胞中的AMPKα1,减轻炎症因子MCP-1的表达水平(P<0.05)。

摘要：目的从阻断炎症细胞生物功能角度,探讨健脾清化方对局灶节段硬化(FSGS)模型大鼠肾纤维化的影响。方法左侧肾切除加尾静脉注射阿霉素致大鼠肾脏FSGS,观察健脾清化方对模型大鼠白细胞介素6(IL-6)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、细胞间黏附分子(ICAM-1)表达的影响。结果大鼠肾小管间质IL6表达,健脾清化方组、健脾方组、清化方组、尿毒清组明显低于模型组(P<0.01)。大鼠肾小管间质MCP-1表达,健脾清化方组、健脾方组、清化方组、尿毒清组较模型组明显下降(P<0.01);健脾清化方组较尿毒清组下降(P<0.05)。大鼠肾小管间质ICAM-1表达,与模型组相比,健脾清化方组、清化方组、尿毒清组明显下降(P<0.01),健脾方组较模型组下降(P<0.05);健脾清化方组较尿毒清组下降(P<0.05)。大鼠肾小管间质MCP-1、ICAM-1荧光强度,与模型组相比,健脾清化方组、健脾方组、清化方组、尿毒清组明显减弱(P<0.01),与尿毒清组比较,健脾清化方组、清化方组荧光强度明显减弱(P<0.01)。健脾清化方能显著降低IL6、MCP-1、ICAM-1表达,且对MCP-1、ICAM-1的效果优于尿毒清组。结论健脾清化方对FSGS模型大鼠肾脏的炎症损伤和肾纤维化有一定的改善作用,该机制可能与健脾清化方终止IL-6的信号通路有关。

摘要：目的 观察血清脂蛋白相关磷脂酶A2(LP-PLA2)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)在ST段抬高型心肌梗死(STEMI)患者中表达,并分析二者与经皮冠状动脉介入治疗(PCI)后心力衰竭发生的关系。方法 选取2019年1月—2021年1月南阳医学高等专科学校第一附属医院与南阳市第一人民医院西区医院收治的接受PCI治疗的120例STEMI患者作为研究对象,PCI后均接受6个月随访,记录患者随访期间心力衰竭发生情况并分组,设计基线资料调查表,记录研究所需资料,于入院时检测患者血清LP-PLA2、MCP-1水平,分析血清LP-PLA2、MCP-1水平与STEMI患者PCI后心力衰竭发生的关系。结果 随访6个月结果显示,全部120例患者中,22例发生心力衰竭,发生率为18.33%;发生组STEMI患者入院时血清LP-PLA2(227.38±32.63)ng/mL、MCP-1(138.42±17.31)ng/L,高于未发生组(187.38±27.16)ng/mL、(106.38±18.51)ng/L,差异有统计学意义(t=6.010、8.198,P<0.05);经logistic回归分析结果显示,血清LP-PLA2、MCP-1过表达与STEMI患者PCI后心力衰竭发生有关(P<0.05)。结论 血清LP-PLA2、MCP-1过表达与STEMI患者PCI后心力衰竭发生存在一定联系。

摘要：目的 分析血清巨噬细胞炎性蛋白-1α(MIP-1α)、单核细胞趋化蛋白-1 (MCP-1)水平对老年帕金森病(PD)患者预后的影响。方法 选取2019年1月至2020年1月在武汉市第三医院就诊的80例老年PD患者作为研究对象,所有患者均经药物治疗,于治疗1年时评估两组预后[蒙特利尔认知评估量表(MoCA)评分]情况,并分为不良组(MoCA评分1,P0.80,预测价值均理想,且以联合预测价值最高。结论 血清MCP-1、MIP-1α异常过表达可能与老年PD患者预后不良有关。

摘要：目的观察高糖环境下糖肾宝复方含药血清对小鼠肾小球系膜细胞(MCs)增殖及E26转录因子1(Ets-1)、单核细胞趋化蛋白-1(MCP-1)、Ⅳ型胶原(ColⅣ)、纤黏蛋白(FN)表达的影响。方法分别将糖肾宝复方及蒸馏水对SPF小鼠进行灌胃,制备含药血清与正常血清。然后体外培养小鼠MCs,设计合成Ets-1-siRNA并转染小鼠MCs。实验分为6组:正常对照组、高糖组、高糖+糖肾宝血清组、Ets-1-siRNA组、Ets-1-siRNA+糖肾宝组、空转组。药物干预72 h后,采用实时荧光定量PCR和Western Blot法检测各组MCs中Ets-1、MCP-1、FN及ColⅣmRNA水平和蛋白表达;CCK-8法检测24、48、72、96、120 h各时间点MCs增殖情况。结果与正常对照组比较,高糖组及高糖+糖肾宝血清组MCs增殖显著升高(P0.05)。结论糖肾宝复方能抑制高糖培养的MCs增殖及细胞基质(ColⅣ、FN)分泌,其机制可能与抑制Ets-1/MCP-1炎症信号通路的活化。

摘要：目的研究大鼠急性肺栓塞后心肌细胞单核细胞趋化蛋白-1(monocyte chemoattractant protein-1,MCP-1)及脑钠素(brain natriuretic peptide,BNP)表达水平的变化,及中药单体白藜芦醇对其的影响。方法 96只SD大鼠按完全随机设计分为血栓栓塞组(T组),白藜芦醇+栓塞组(TR组),各组分设1、4、8h等3个时间点亚组,每组16只。制备大鼠自体血凝栓(将导管经右颈静脉插至肺动脉后回输自体血栓),复制急性肺血栓栓塞模型。模型制备后,立即予尾静脉注射白藜芦醇溶液10mg/kg(白藜芦醇溶于1%的DMSO溶液)。模型制备后1、4、8h分别处死大鼠,取大鼠心脏用10%多聚甲醛液固定,石蜡包埋切片,以免疫组化SP法分别检测大鼠右心室心肌MCP-1、BNP表达水平。结果 T、TR组各时间点大鼠心肌细胞均表达MCP-1、BNP,且随时间延长而表达增加;两组大鼠右心室心肌细胞MCP-1及BNP表达比较,术后1h差异无统计学意义(均P>0.05),4h、8h差异有统计学意义(均P<0.05),TR组均低于T组。结论两组大鼠心肌MCP-1、BNP表达均有随时间延长而增加的趋势,中药单体白藜芦醇可能通过抑制肺栓塞大鼠心肌组织MCP-1的表达而起到保护心脏组织的作用。