摘要：本文利用ＰＣＲ技术建立一种对ＨＳＶ直接基因分型的方法。在ＨＳＶ－Ⅰ、Ⅱ两型的ＤＮＡ多聚酶基因上设计了一条两型共同的上游引物（ＨＤＰ－Ｂ）和两条型特异的下游引物（ＨＤＰ－１、ＨＤＰ－２）。三条引物共同组成一个扩增反应体系，在ＨＳＶ－Ⅰ产生５４３ｂｐ条带，ＨＳＶ－Ⅱ产生３７２ｂｐ条带，据此在基因水平上对ＨＳＶ进行分型。５株不同来源的ＨＳＶ（２株Ⅰ型，３株Ⅱ型）分型结果与病毒分离及血清学方法完全一致。该反应体系与其它来源的ＤＮＡ不产生特异反应，敏感性可达１ｆｇ。应用该法对１５１份临床可疑ＨＳＶ感染的标本进行检测并分型，结果与免疫学方法完全一致。

摘要：目的构建单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-1)糖蛋白B(g B)和糖蛋白D(g D)的Th细胞和B细胞表位重组串联核酸疫苗,并鉴定其真核表达。方法利用生物信息学分析软件预测HSV-1 g B和g D的Th细胞表位和B细胞表位,结合已发表文献,设计合成HSV-1的Th细胞和B细胞表位重组串联抗原基因(Th/B基因)。将Th/B基因定向克隆入真核表达载体p VAX1,构建真核表达质粒p VAX1-Th/B。用制备的质粒转染COS-7细胞,裂解细胞后经Western blot鉴定其蛋白表达。结果预测得到了HSV-1 g B和g D的Th细胞和B细胞表位,成功构建真核表达质粒p VAX1-Th/B,经测序确认序列正确。SDS-PAGE分离出相应大小的蛋白表达片段,经Western blot鉴定并证实该重组核酸疫苗能够在体外真核细胞中表达。结论成功构建HSV-1 Th细胞和B细胞表位重组串联核酸疫苗,并能够在体外真核细胞中表达,为HSV-1核酸疫苗的进一步研究打下基础。

摘要：单纯疱疹病毒1型(herpes simplex virus type 1,HSV-1)通常引起口唇疱疹,但近年来其引发的生殖道疱疹亦越来越多,且与阿尔茨海默病的发生密切相关。HSV-1和HSV-2已经成为全球感染率最高的性传播疾病之一,并显著增加罹患艾滋病及其他生殖道疾病的风险,这些新的流行病学资料改变了过去对HSV的忽视,促使各个国家迫切开始重视针对HSV感染情况的数据收集和开发新的疫苗设计策略。基于全球对HSV感染的新认识和举措,本文将从不同角度分别对世界和国内HSV流行情况作一综述,以期了解HSV近年的感染趋势和传播特点。

摘要：为了分离、克隆单纯疱疹病毒Ｉ型（ＨＳＶ－Ｉ） ＳＭ_(４４)株胸苷激酶基因（ＴＫ），采用原代兔婴肾细胞培养ＨＳＶ－ＩＳＭ_(４４) 株病毒，提取病毒核酸作为模板，设计了 ＨＳＶ－ＩＴＫ基因的上、下游引物，在引物的 ５’端分别引入 ＢａｍＨＩ和 ＥｃｏＲ Ｉ 限制性内切酶位点，通过ＰＣＲ方法扩增出 ＴＫ基因，经ＢａｍＨＩ／ＥｃｏＲＩ双酶切与 ＰＵＣ１９质粒载体相连接，构建重组 体转化受体菌ＪＭ１０９，通过筛选和酶切鉴定，获得ＨＳＶ－ＩＳＭ_(４４) ＴＫ基因阳性克隆，行全序列测定分析，与ＨＳＶ－ＩＣＬ１０１ 株 ＴＫ基因同源性为 ９９．０２％，存在 １１个核苷酸和 ７个氨基酸的差异。 ＨＳＶ－ＩＴＫ基因的克隆成功，为该基因应用于恶 性肿瘤的自杀基因治疗奠定了基础。

摘要：依据ＨＳＶ ＤＮＡ多聚酶基因核苷酸序列设计并合成一对引物，建立了ＰＣＲ方法。用ＰＣＲ和ＥＬＩＳＡ平行检测ＨＳＶ－１，ＨＳＶ－２标准毒株感染的细胞，拟诊ＨＳＶ脑炎患者脑脊液（ＣＳＦ）及多种对照标本。结果表明，两方法特异性完全一致；ＰＣＲ检测阳性率高，比ＥＬＩＳＡ敏感近２０倍，更适用于ＨＳＶ脑炎的早期诊断。

摘要：依据HSV-1 Patton株糖蛋白D全基因序列,设计、合成一对引物,利用多聚酶链反应(PCR),从我国HSV-1 168株基因组DNA中扩增、克隆出糖蛋白D全基因序列,共1185bp,编码395个氨基酸,并将其推测的氨基酸序列同国外HSV-1 HFEM、SCl6、17和Patton株的糖蛋白D的氨基酸序列进行了详细比较,发现最保守的区域主要是除信号肽以外的胞外编码区。氨基酸的变异主要分布在信号肽区、跨膜区及胞浆内编码区。本工作对研究HSV-1糖蛋白D的结构和功能以及研制我国HSV-1基因工程疫苗都具重要意义。

摘要：为了得到一种可以包装AAV2/5和表达绿色荧光蛋白的重组单纯疱疹病毒,设计并构建了一个由AAV2rep基因和AAV5cap基因嵌合而成的rep2cap5基因,然后,利用一套携带HSV1基因组的粘粒系统(cos6、cos28、cos14、cos56、cos48),将rep2cap5基因插入cos6粘粒上HSV1基因组片段的UL2基因中,而将EGFP的表达单位插入cos56粘粒上HSV1基因组片段的UL44基因中,用这2个重组粘粒与其它3个粘粒(cos14、cos28、cos48)共转染BHK-21细胞获得了重组病毒HSV1-r2c5-EGFP并进行了空斑纯化。HSV1-r2c5-EGFP病毒能够在BHK-21细胞连续传代,并且可以观察到几乎所有的感染细胞都能产生绿色荧光。用PCR方法以及Southern杂交方法表明所获得的HSV1-r2c5-EGFP中携带有rep2cap5基因,用HSV1-r2c5-EGFP感染携带报告基因LacZ的AAV载体细胞株,获得了具有感染性的重组AAV2/5-LacZ。结果表明,所获得的重组单纯疱疹病毒HSV1-r2c5-EGFP可提供AAV2/5载体包装所需的全部辅助功能,是一种能简便、高效制备重组AAV2/5病毒的通用性辅助病毒。

摘要：目的建立多重PCR用于同时检测苍白密螺旋体(梅毒螺旋体)、单纯疱疹病毒和杜氏嗜血菌。方法根据各病原体特异性基因序列,即单纯疱疹病毒Ⅰ和Ⅱ型(HSVⅠ和HSVⅡ)的DNA聚合酶基因、苍白密螺旋体47×103膜蛋白基因及杜氏嗜血菌16S rRNA基因序列,自行设计3对特异寡核苷酸引物,建立同时检测3种病原体DNA的多重PCR。结果各特异性引物仅扩增相应的病原体DNA,即苍白密螺旋体、单纯疱疹病毒、杜氏嗜血菌扩增靶DNA片段分别为202、2521、52 bp;各病原体DNA连续10倍稀释,可检测的DNA最低量为0.012ng;其他几种生殖道常见菌及人基因组DNA不被上述引物扩增。结论多重PCR同时检测苍白密螺旋体、单纯疱疹病毒和杜氏嗜血菌DNA具有较好的特异性,将可能为患者提供敏感、快速和准确的检测手段。

摘要：目的 :　建立直接分型检测妇女生殖器单纯疱疹病毒 (HSV)的抗原捕获聚合酶链反应 (AC -PCR)。方法 :　用抗HSV型共同性糖蛋白单克隆抗体 ,包被聚苯乙烯离心管 ,捕获HSV ,同时加入 3个引物 :HSV - 1 HSV - 2型共同性上游引物及HSV - 1和HSV - 2型特异性下游引物 ,进行PCR扩增。结果 :HSV - 1和HSV - 2标准病毒株均分别扩增出与设计大小相符的 4 77bp和 399bpDNA条带。AC -PCR可检测到 10PFUHSV - 1和 1PFUHSV - 2。用AC -PCR检测了 36 5份妇女生殖器拭子标本 ,阳性 10 1例(2 7.7% ) ,2 3例为HSV - 1(占 2 2 .8% ) ,78例为HSV - 2 (占 77.2 % ) ;其中 112份标本同时用AC -PCR和分离培养法检测 ,AC -PCR的阳性率为 2 6 .8% (30 112 ) ,分离培养法的阳性率为 2 0 .5 % (2 3 112 ) ,两者差异有显著性 (χ2 =4 .5 ,P <0 .0 5 )。结论 :　AC -PCR是特异、敏感。

摘要：为进一步提高 PCR诊断方法的特异性和敏感性 ,在单纯疱疹病毒 ( HSV) TK基因区设计了一对外层公用引物和两个内层分型引物 ,建立了半巢式 PCR检测和分型 HSV的方法。用该方法检测了天津地区 64例病毒性脑炎患者 (病脑组 )和 4 6例其他中枢神经系统疾病患者 (对照组 )的脑脊液 ( CSF)标本。病脑组了阳性率为 1 5.63% ( 1 0 / 64) ,其中 9例为 HSV-1感染 ,1例为 HSV-2感染。对照组阳性率为 2 .1 7% ( 1 / 46)。本方法在发病后第 1天即可测出 CSF中的 HSV DNA,敏感性为 0 .0 1 TCID50 。