摘要：生殖器疱疹(GH)大多是由单纯疱疹病毒ⅱ型(HSV-2)感染所致.主要通过性接触传播.其发病率迅速上升,成为人们关注的公共卫生问题[1].现今生殖器疱疹不典型表现和无症状感染相当多见[2].建立一种快速、简便、特异的检测HSV-2的方法很有必要.糖蛋白D(gD)为HSV-2最主要的激活机体免疫的抗原,本试验针对HSV-2糖蛋白D基因序列设计引物并扩增的片断,均符合进一步克隆重组载体表达的要求,所以为研究HSV-2基因疫苗提供了有利的条件.现将结果总结如下.

摘要：按照shRNA(small hairpin RNA)设计要求,选择编码单纯疱疹病毒ⅱ型DNA多聚酶催化亚单位的UL30(unique long 30,UL30)基因序列保守区域,设计、合成并构建表达UL30序列特异性siRNA(short interfering RNA)的质粒载体pUL30.通过磷酸钙转染法将其转染入HEK(human embryonic kidney)293细胞中,用蛋白印迹法检测对HSV-2 UL30蛋白表达的影响,观察受染细胞病变效应(cytopathic effect,CPE),终点滴定法测定细胞上清液中病毒感染滴度(50%tissue culture infective dose,TCID50).结果表明,针对UL30基因的siRNA能有效抑制UL30蛋白表达,同时显著抑制受染细胞的CPE,降低上清液中病毒感染滴度.提示本研究建立的针对UL30基因特异性siRNA能有效阻断HSV-2在HEK293细胞内的复制,UL30基因是一个潜在的抗HSV-2复制的药物靶标.

摘要：背景:单纯疱疹病毒ⅱ型潜伏相关转录体开放读码框1真核表达载体的构建可以为研究单纯疱疹病毒ⅱ型潜伏相关转录体开放读码框1在病毒潜伏复发中的功能奠定基础。目的:构建含存单纯疱疹病毒ⅱ型潜伏相关转录体开放读码框1的真核表达载体,并通过转染非洲绿猴肾细胞(Vero),验证载体的体外表达情况。方法:根据单纯疱疹病毒ⅱ型潜伏相关转录体开放读码框1基因序列设计一对引物,以单纯疱疹病毒ⅱ型333标准株基因组为模板PCR法扩增出开放读码框1基因,克隆至真核表达载体上,并进行酶切鉴定以及测序;利用X-fect转染试剂盒将重组质粒pEGFP-C2/潜伏相关转录体开放读码框1转染vero细胞,RT-PCR检测其mRNA水平的表达,并用荧光倒置显微镜观察融合蛋白的表达。结果与结论:开放读码框1基因的体外扩增目的片段为741bp,所构建的真核表达载体pEGFP-C2/潜伏相关转录体开放读码框1经双酶切鉴定,与预期大小一致,测序结果与NCBI收录的开放读码框1基因序列一致;重组质粒pEGFP-C2/潜伏相关转录体开放读码框1转染vero细胞后,RT-PCR验证有目的基因的转录,荧光显微镜观察到融合蛋白在转染的Vero细胞中表达。表明成功构建pEGFP-C2/潜伏相关转录体开放读码框1真核表达载体,并且实现其在非洲绿猴肾细胞(Vero)中的表达。

摘要：目的建立一种快速,准确检测单纯疱疹病毒ⅱ型G蛋白基因的方法。方法根据已发表的gG蛋白核苷酸序列设计引物,采取降落PCR对gG蛋白基因进行扩增。结果从2份病毒株中均扩增出与预期大小完全一致的目的片段,并且能有效地降低或避免非特异性扩增。结论TD-PCR能够用于快速,准确地检测gG蛋白基因,为生殖器疱疹的鉴别诊断在分子水平上提供了理想的新方法。

摘要：目的:建立一种快速、准确检测单纯疱疹病毒ⅱ型D蛋白基因的方法。方法:根据已发表的gD蛋白核苷酸序列设计引物,采取降落PCR对gD蛋白DNA进行扩增。结果:从2份病毒株中均扩增出与预期大小完全一致的目的片段,并且采用降落PCR能有效地降低或避免非特异性扩增。结论:TD-PCR能够用于快速,准确地检测gD蛋白,为生殖器疱疹的鉴别诊断在分子水平上提供了理想的新方法。

摘要：目的探讨在RNA干扰技术条件上,干扰α27基因表达对单纯疱疹病毒ⅱ型(HSV-Ⅱ)宿主细胞的影响。方法体外合成四对α27基因特异性si RNA(R1、R2、R3、R4组)和阳性、阴性对照si RNA,用Lipofectamine2000转染Vero细胞后接种HSV-Ⅱ,感染后用MTT比色法分别于12、24、36、48、60、72 h测定细胞的存活情况。结果转染了特异性si RNA的细胞OD值较空白组高,细胞存活情况较好,其中R2和R4组存活情况更好。结论α27基因特异性si RNA对宿主细胞具有保护作用。按照同样设计原则合成的不同序列si RNA,其抑制效果存在明显差异。

摘要：目的 建立一种高敏感度的检测痕量单纯疱疹病毒ⅱ型（HSV-2）DNA的实时荧光定量PCR方法，为针对HSV-2潜伏感染的治疗性疫苗和抗病毒药物疗效提供一个评价方法。方法依据HSV-2糖蛋白D（gD）基因序列，使用序列比对软件，选取其保守区序列设计引物及TaqMan探针并进行筛选；以gD基因重组质粒pcDNA3-HSV-2gD作为标准模板，对该检测方法的反应条件进行优化，提高其检测特异性、敏感度和重现性。结果该检测方法特异性好，检测的最低拷贝数可达到2个拷贝，线性范围为2×10^0～2×10^8拷贝／反应，是普通PCR敏感度的10^3倍。该检测方法组间和组内变异系数均低于5％，说明该检测方法具有良好稳定性。结论本研究建立的TaqMan实时荧光定量PCR方法用于检测痕量HSV-2DNA具有特异、敏感、定量和重现性好的优点。

摘要：目的探讨出生缺陷新生儿中低体质量和肺炎新生儿人巨细胞病毒(HCMV)、单纯疱疹病毒Ⅰ型(HSV-Ⅰ)、HSV-Ⅱ、弓形虫(TOX)、乙肝病毒(HBV)5种病原微生物感染情况,分析巢式聚合酶链反应法检测新生儿病原体感染的临床应用价值。方法选取低体质量新生儿46例和肺炎新生儿66例,每例抽取外周静脉血1mL。经曲酚-氯仿-异戊醇-蛋白消化法,提取外周血血清中的DNA,通过二对引物,一对扩增较大DNA片段的外引物和一对在扩增产物中再扩增小片段的内引物,采用巢式PCR法,分别针对HCMV、HSV-Ⅰ、HSV-Ⅱ、TOX、HBV病毒DNA高度保守区设计引物并扩增其病毒DNA,检测这5种病毒DNA在低体质量和肺炎新生儿中感染阳性率,筛查这些病毒在出生缺陷新生儿中的感染状况。采用SPSS10.0软件分析5种病原体感染率之间的关系。结果低出生体质量新生儿46例中,5种病原体检出率:HCMV为91.3%、HSV-Ⅰ为8.7%、HSV-Ⅱ为15.2%、TOX为8.7%、HBV为15.2%;肺炎新生儿66例中,5种病原体检出率:HCMV为83.3%、HSV-Ⅰ为6.1%、HSV-Ⅱ为16.7%、TOX为6.1%、HBV为7.6%。HCMV感染率在低体质量儿和肺炎患儿中均高于其他4种病原体,且5种病原体感染率有统计学意义(Pa=0)。结论对低体质量和肺炎新生儿病原体感染进行筛查十分必要,且对新生儿感染性疾病的早期诊断和预防有益。

摘要：目的了解北京地区新型毒品滥用者艾滋病病毒（HIV）、梅毒、单纯疱疹病毒ⅱ型（HSV-2）、丙型肝炎病毒（HCV）和乙型肝炎病毒（HBV）的感染情况。方法采用横断面设计的方法,于2009年10-12月,在北京市某强制戒毒所对其收治的主要吸食冰毒等新型毒品者进行问卷调查,采集血液标本,检测HIV、梅毒、HSV-2、HCV和HBV表面抗原（HBsAg）。结果 151名新型毒品滥用者中,分别有39.1%、10.5%的人多药使用和混合用药,无人注射新型毒品;承认新型毒品使用后发生性行为的人占55.6%;在过去1年中,性伴数在180人不等;仅27.4%的人每次性行为时都使用安全套;HIV、梅毒、HSV-2、HCV和HBV的感染率分别是0.7%、13.9%、60.3%、19.2%和11.5%。结论新型毒品滥用者仍是以非注射吸食为主,在毒品作用下易发生无保护性行为,是艾滋病性传播感染（STIs）的潜在高危人群。